MEDIOS DE CULTIVOS

METODOS FENOTIPICOS
 MEDIOS DE
CULTIVO
En los medios de cultivo las bacterias se
multiplican y es necesario esperar al menos
18-24 horas para visualizarlas

En términos generales todas las bacterias,

tienen unos requerimientos nutricionales
imprescindibles para su crecimiento.

Necesitan una fuente de energía, una

fuente de carbono, una fuente de nitrógeno,
algunas sales, oligoelementos y agua
 Según su capacidad para permitir el crecimiento microbiano se clasifican en medios
básicos o generales, de enriquecimiento, selectivos y diferenciales.

Medios básicos: son medios ricos en nutrientes que permiten el crecimiento de la gran mayoría de las bacterias.
Se utilizan en la siembra primaria de las muestras clínicas. Uno de los medios más utilizados en los laboratorios
es el agar sangre.
Medios de enriquecimiento: están desarrollados para recuperar bacterias exigentes en sus requerimientos
nutricionales. Se utilizan para bacterias que no crecen en medios básicos.

Medios selectivos: contienen sustancias como cloruro sódico a dosis elevadas, citrato sódico, cristal violeta, sales
biliares o antibióticos y antisépticos que fomentan el crecimiento de algunas bacterias y evitan el de otras. Son de
gran utilidad para el aislamiento bacteriano a partir de una población bacteriana mixta.
 Requisitos de Crecimientos
1. Atmosfera: Las bacterias se Clasifican en:
Aerobias estrictas: Crecen en presencia de oxígeno.
Anaerobias estrictas: Crecen en ausencia de oxígeno.
Facultativas: Crecen tanto en aerobiosis como en anaerobiosis.
Microaerofilicas: Crecen en una atmosfera con reducida concentración de oxígeno.
Capnofilicas: Requieren CO2 adicional para crecer.

2. Temperatura: Se clasifican en función de la temperatura necesaria para su

crecimiento.

Psicrofilicas: Crecen a Mesofilicas: Crecen a

Termofilicas: Crecen
bajas temperaturas entre temperaturas entre 10-
muy poco a 37°C
2-5°C 45°C
3. Nutrición: Se usa en la identificación de la capacidad para crecer en medios
ordinarios o con la adicción de sangre, suero o glucosa.

Pruebas Bioquímicas
Permiten determinar características metabólicas de las bacterias.

1. Son técnicas rápidas que tienen la presencia de una enzima preformada y su

lectura varia de segundos hasta unas horas.
2. Requieren una lectura con una incubación previa de 18 a 48h; que detectan
componentes metabólicos o la sensibilidad a una sustancia dada.
 
Algunas de estas pruebas se realizan de forma rápida 2-6h; por reacciones
enzimáticas cromogénicas o pruebas convencionales modificadas.
 PRUEBA DE CATALASA
 La catalasa es una enzima que se encuentra en la mayoría de los microorganismos aerobios
y anaerobios facultativos. Se encuentra normalmente junto a la cromoxidasa y es la
responsable del desdoble del H2O2.
 Técnica 
 Coger un inóculo del microorganismo
problema con un asa de siembra de
platino.
 Despositar el inóculo realizando una
impronta sobre un portaobjetos o sobre
un trozo de papel de filtro situado sobre
Material y reactivos el porta.
 Microorganismo problema procedente de  Añadir una gota de H2O2.
un cultivo  Visualizar si aparecen o no burbujas y
 Pipeta pasteur catalogar al microorganismo como
catalasa positivo o negativo.
 Asa de siembra de platino
 Portaobjetos
 Peróxido de hidrógeno de 100 volúmenes
al 30%
 Papel de filtro
 Mechero bunsen
 Portaobjetos
14 Pruebas IMVIC
OBJETIVO
Comprobar que el microorganismo
problema metaboliza los hidratos de
carbono por la vía ácido-mixta.
PRUEBA ROJO METILO
FUNDAMENTO
El medio de cultivo Clark y Lubs es un medio que
tiene lo mínimo necesario para el crecimiento de un
microorganismo problema.
Si el microorganismo consume el hidrato de
carbono del medio (glucosa) habrá producción de
ácido, y esto se pondrá de manifiesto mediante el
indicador Rojo de Metilo.
 Experimentación
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Materiales y
reactivos
 Microorganismo  Si el medio de cultivo se torna
problema procedente de
un cultivo
 Medio de cultivo Clark y
Lubs
 Asa de siembra
 Mechero bunsen
 Papel de filtro
 Pipeta Pasteur
 Estufa de cultivo
 Reactivo Rojo de Metilo
Resultado e
interpretación
ácido es porque el
microorganismo consume la
glucosa por la vía ácido-mixta.
Esto se pone de manifiesto
gracias al indicador, haciendo
que el medio se vuelva de color
rojo. En caso negativo, el medio
de cultivo mantendrá su color
inicial cuando se añada el
indicador.
Prueba del Citrato.

Objetivo

Prueba del citrato

Resultado e interpretación