Universidad de Cartagena

Crecimiento Microbiano.

Facultad de Ciencias e Ingeniería

Programa de Ingeniería de
Alimentos
Microbiología General.
1. Estudiantes de Ing. de Alimentos.
 Crecimiento Microbiano.

El crecimiento microbiano se refiere al crecimiento

poblacional, no al aumento de tamaño de los microorganismos.

Para cuantificar el crecimiento, se necesita saber la velocidad

de crecimiento tomando en consideración el cambio en el
número de células por unidad de tiempo.

A través de la velocidad de crecimiento de un cultivo, se

conoce cuantas generaciones van.

Al tiempo necesario que le toma a un microorganismo

duplicar su población se le conoce como: tiempo de
generación.
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Fisión binaria.

Fragmentación.
Diversas formas de crecimiento

Gemación.
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Recuento en cámara de Petroff-Hauser.

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Recuento en placas.
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Recuento sobre filtros de membrana

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Técnicas para el cultivo de microorganismos.

Para efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseñado diversos

métodos que permiten cultivarlos bajo condicione artificiales, en los que es
posible cultivarlos bajo condiciones experimentales y manejar un solo tipo de
microorganismo.

Una de las técnicas más usadas en el laboratorio de microbiología consiste en

transferir una muestra microbiológica de un ambiente determinado a un medio
de cultivo, lo que permite obtener cultivos microbianos.
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Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el desarrollo

de éste en medios de cultivo y condiciones de laboratorio controladas. La
población de microorganismos desarrollada en un medio se denomina cultivo.
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Clasificación de los medios de cultivo basándose en su composición química

Medios sintéticos.
Llevan fuente de carbono, fuente de nitrógeno, sales que suplan iones (P, K, Mg,
Fe, Ca)

Medios complejos.
Estos medios llevan ingredientes como extracto de levadura, peptona, etc.
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Medios de enriquecimiento.
Son medios complejos (normalmente) con
aditivos adicionales para favorecer el crecimiento de determina dos
microorganismos (particularmente heterótrofos exigentes).Ejemplo: adicción de
sangre, suero o extractos de tejidos de animales y plantas.

Medios electivos
Son aquellos que favorecen por su diseño el crecimiento específico de un
microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad
para el aislamiento de microorganismos a partir de una población microbiana
mixta.
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Agar.

Es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus
requerimientos nutricionales. No contiene inhibidores del desarrollo
bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrógeno para el
desarrollo bacteriano.
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Cultivo axénico o puro.

Cuando éste contiene una sola especie de microorganismo,   proveniente de una sola
célula.
Los cultivos axénicos son muy raros en la naturaleza. En los medios naturales -por
ejemplo, en el suelo, agua, o en el cuerpo humano-existen cultivos mixtos.

Cultivo Mixto.

viven muchos microorganismos y diferentes especies de forma conjunta.

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Técnicas de siembra.
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Estría múltiple.
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Técnica de los cuatro cuadrantes.

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Siembra por agotamiento o en superficie.

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Lecturas en los cultivos.

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Pruebas bioquímicas en los microorganismos.

Prueba de la catalasa.
Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra el la
mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen
citocromo. La principal excepción es Streptococcus.
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Método del portaobjetos:

Con el asa de siembra recoger el centro de una colonia pura de 18-24 horas y
colocar sobre un portaobjetos limpio de vidrio.
Agregar con gotero o pipeta Pasteur una gota de H 2O2 al 30% sobre el
microorganismo sin mezclarlo con el cultivo.
Observar la formación inmediata de burbujas (resultado positivo).
Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante.
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Prueba del Citrato.

Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar
citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como
única fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una
alcalinización del medio. 
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Se cultiva el microorganismo en agar citrato de Simmons. Este medio contiene

citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono y de nitrógeno.
Sólo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este
medio y liberarán iones amonio lo que, junto con la eliminación del citrato
(ácido), generará una fuerte basificación del medio que será aparente por un
cambio de color del indicador de pH, de verde a azul.
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Prueba de la fenilalalina.

Esta prueba determina la capacidad de un organismo para desaminar el

aminoácido fenilalanina en ácido fenilpirúvico por su actividad enzimática de
fenilalanina desaminasa, con la consiguiente acidez resultante.
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Se cultiva el microorganismo en agar fenilalanina sembrando la superficie del

slant con abundante inóculo e incubando durante 12-16 horas. Seguidamente se
añade 0,2ml de una solución de cloruro férrico al 10% de manera que inunde
todo el crecimiento. La presencia de ácido fenilpirúvico (prueba positiva) se
manifiesta por la aparición de un color característico verde oscuro o verde-
azulado.
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Prueba de la lactosa.
Esta prueba se usa para diferenciar entre las enterobacterias en general y el
grupo de las coliformes. Se trata por tanto de una prueba de gran importancia
debido a que los coliformes se utilizan como organismos indicadores de
contaminación fecal en análisis, sobre todo, de aguas.
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En agar McConkey las bacterias Gram positivas ven inhibido su crecimiento

debido a la presencia de sales biliares y cristal violeta y sólo crecerán las
enterobacterias, pero entre ellas las que fermenten la lactosa (coliformes)
liberarán productos ácidos que producirán un cambio de pH que se detectará
gracias al rojo neutro. Las colonias lactosa (+) aparecerán de color rojo o violeta
contrastando con la coloración amarillenta de las colonias lactosa (-).
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Muchas
gracias por su
atención.!!!

No es más sabio aquel que sabe muchas cosas

sino aquel que hace muchas cosas con lo poco
que sabe.