COCOS

GRAM
POSITIVOS

Staphylococcus Streptoccocus
y
Micrococcus Enterococcus

Catalasa
B. Staphylococcus A. Streptoccocus
Micrococcus Enterococcus
(positivo) (negativo)
 Tenemos la tincion de gramm que dara positivo a los
microorganismo que tengan una envoltura formada por
un 90porciento de peptidoglicano , estad daran un color
violeta azulado como se ven en las fotos.

 La prueba de la catalaza consiste en exponer el

microorganismo al peróxido de hidrógeno, y si da
positivo vizualisandose el bulbujeo es porque pudo
descomponer el peroxido de hidrogeno en agua y
oxigeno

*Aerobios y anaerobios facultativos q destoxifican el peroxido de hidrogeno

2HO2 H2O + 2 O2

*Cuidado en tomar colonias para evitar contaminacion

 Furazolidona R
S
R Bacitracina S
S Lisosafina
R

- Oxidasa
modificada
+

Staphylococcus Micrococcus
 Furezolidona Esta prueba se realiza como un procedimiento de sensibilidad en disco que puede
compararse en el comercio. Los estafilococos se inhiben por la acción de la furazolidona y muestran zonas
de inhibición de 15 mm o más, mientras que los micrococos y las especies relacionadas son resistentes y
muestran zonas de 6 mm a 9 mm.

 Bacitracina; Se prepara una superficie de cultivo en una placa de agar de Mueller-Hinton o de agar
sangre y se coloca un disco diferencial de bacitracina en el inóculo. Después de una incubación de toda la
noche, se miden los tamaños de zonas de inhibición. Los estafilococos son resistentes y creecen en el
borde del disco, mientras que los micrococos y las especies relacionadas son sensibles y producen zonas
de inhibición de 10 mm o mayores. Imagen solo micrococcus que es sensible

 La lisostafina es una endopeptidasa que cliva los puentes de pentaglicina presentes en la pared de lo
estafilococos, por eso el género Staphylococcus es sensible a su acción.

 Oxidasa modificada:
Esta prueba está disponible en el mercado. Se usan discos de papel de filtro impregnados reactivo oxidasa
en dimetil sulfóxido. Este último vuelve a las células permeables a los reactivos. Se extrae una colonia del
medio de desarrollo con un palillo aplicador y se frota en el disco. La aparición de color violeta es una
prueba positiva. La prueba es negativa cuando no hay color en ese lapso. Las especies de Micrococcus, y
Macrococcus son oxidasa positivas. Todas las especies de Staphylococcus son oxidasa negativa.

 Oxidasa modificada : Discos de papel filtros impergnados en reactivo de oxidasa en dimetil sulfofido.
Este ultimo vuelve a las celulas permeables a los reactivos, entonces al frotar una colonia en el disco…
Prueba positiva: un cambio de color azul o azul púrpura en 2 minutos.
Prueba negativa: sin cambio de color
Control de calidad:Positivo: Micrococcus luteus. Negativo: Staphylococcus aureus.
 + Coagulasa -
+ Aglutinación en latex -

+
DNAsa -

+ Agar manito sal -

S. epidermidis
S. saprophyticus
Staphylococcus aureus S lugdunensis
S. intermedius
S. haemolyticus
 Prueba de la coagulasa en tubo:Para detectar coagulasa libre o estraxelular, se forma un complejo
con un factor de plasma, y este complejo convierte el fibrinogeno a fibrina, por lo tanto formándose
el coagulo.

 Prueba de la coagulasa en placa: Llamada tambien factor de agregacion, que esta en la pared
celular y transforma el fibrinógeno en fibrina de forma directa, asi formando el coagulo.
 *Plasma de conejo o humano, tubo EDTA

 La aglutinación con partículas de látex: consiste en una lámina donde se unen partículas inertes de
látex a un antígeno presente en una muestra o en el microorganismo aislado desde un cultivo,
mediante fuerzas eléctricas intramoleculares o uniones covalentes. La aglutinación de estas
partículas ocurre cuando existe interacción entre el antígeno y el anticuerpo específico.

 Dnasa : Se utiliza un medio que contiene ADN y unindicador de HCL (0,1 N) si esque no se observa
a simple vista. Si el microorganismo tiene la capacidad de despolimerizar o digerir el ADN (Dnasa
termostable que hidrolisa ADN), Cambiara la estructura del agar, formando un tipo de halo
alrrededor de la colonia .
 *Figure -1: DNA Hydrolysis test A. Positive; Staphylococcus aureus B. Positive; Serratia

marcescens  C. Negative: Staphylococcus epidermidis

 Agar manito sal S. aureus puede fermentar el manitol. El medio usado es agar manitol sal. La
elevada concentración salina inhibe el desarrollo de otros microorganismos y permite el crecimiento
selectivo de los estafilococos. S. aureus y este puede ser detectado por la presencia de una zona
amarilla alrededor de las colonias, lo que indica la producción de ácido a partir del manitol.
 S. saprophyticus R
Novobiocina

S. epidermidis
S lugdunensis
S. intermedius
S. haemolyticus
PYR

- +

S lugdunensis
S. epidermidis
S. intermedius
S. haemolyticus
Sensibilidad a la novobiocina para la identificación de Staphylococcus
saprophyticus. Un disco de papel con una carga de 5 microgramos permite
diferenciar Staphylococcus saprophiticus que es resistente,
de Staphylococcus epidermidis y coagulasas negativos que son sensibles.
Las cepas resistentes a la novobiocina mostrarán zonas de inhibición que
miden de 6 mm a 12 mm; las cepas sensibles mostrarán zonas de 16 mm a
27 mm.

PYR: La prueba se realiza con caldo PYR inoculado hasta aproximarse a la

turbidez estandar de McFarland. Despues de 2 horas de incubacion a se
agrega el reactivo PYR. La aparicion de color rojo dentro de los 2 minutos
constituye una prueba positiva, y es negativa si aparece amarillo, naranja o
rosa. La hidrolisis de PYR también se encuentra en algunos de los sistemas
de equipos comerciales para la identificación de estafilococos. S. aureus y
S. epidermidis son PYR negativos, mientras que S. haemolyticus, S.
intermedius, S. lugdunensis y son PYR positivos.
 Ormitina (MIO)
+ -

S. lugdunensis S. intermedius
S. haemolyticus

Ureasa

- +

S. haemolyticus S. intermedius

Colonies Staphylococcus haemolyticus on the chocolate agar medium.

- +
PRUEBA DE ORNITINA DESCARBOXILASA (ODC) La prueba de ODC es la más
útil para confirmar la identidad de S. lugdunensis, porque esta especie es la única ornitina
descarboxilasa positiva. En un tubo con base de descarboxilasa y uno con base y agregado
de ornitina se introducen inóculos abundantes y se cubren con aceite mineral estéril. En la
incubación a 35 °C ambos tubos se tornarán de gris pálido a amarillo a medida que se
fermenta la glucosa, tras lo cual la ornitina en el tubo de prueba se descarboxila; como
resultado, el caldo ornitina se vuelve violeta. El tubo con base sola permanecerá amarillo
y el tubo con ornitina permanecerá amarillo si no se produce ODC. Aunque las pruebas
más positivas se pueden detectar dentro de las 6 a 8 horas, la prueba se lee después de las
24 horas de incubación. Esta prueba no está incluida en la mayoría de los equipos
comerciales para la identificación de estafilococos y debe considerarse una prueba
adicional.

PRUEBA UREASA; Se pone el microorganismo S. haemolyticus con un medio de

cultivo de Agar urea de Christensen. Si el microorganismo posee la enzima ureasa el
medio de cultivo se alcaliniza y cambia de color mediante el indicador que lleva
incorporado. Normalmente este indicador es el rojo fenol. Algunos estafilococos son
ureasa positivos, incluidos S. epidermidis, S. intermedius y la mayoria de las cepas de S.
saprophyticus. Para esta prueba se puede usar el caldo ureasa comun o el cultivo inclinado
de agar urea. Cualquiera de ellos se inocula y se incuba a 35 °C durante 18-24 horas. Un
cambio en el indicador rojo de fenol de amarillo a rosa/rojo es una prueba positiva.
Stapilococus haemolyticus

Staphylococcus haemolyticus Es integrante de la microbiota normal de la piel en humanos, primates y animales domésticos. hasta hace poco no
era muy mencionada. Sin embargo, esta especie ha tomado importancia, debido a que ha sido aislada de gran variedad de muestras clínicas. En
los últimos tiempos se ha estudiado su gran capacidad para adquirir resistencia a los antibióticos de uso común en los hospitales.

Macroscópicamente las colonias sobre agar sangre son de color blanco crema y producen ß-hemólisis alrededor de la colonia.

Esto ha aumentado las cifras de infecciones nosocomiales y con ello la tasa de morbilidad y mortalidad.
En algunos centros de salud, se han aislado cepas endémicas causante de bacteriemias en unidades de cuidado intensivo. En algunos centros de
salud, se han aislado cepas endémicas causante de bacteriemias en unidades de cuidado intensivo.

Estas infecciones se dan probablemente por la contaminación de materiales protésicos tales como válvulas cardíacas, injerto vasculares,
marcapasos, implantes de bombas intracraneales, mallas, prótesis mamarias, articulares o de pene.

También por la contaminación de dispositivos médicos como catéteres venosos, derivación de LCR, catéteres de diálisis peritoneal, catéter
urinario, material de suturas, entre otras.

Afecta a pacientes inmunosuprimidos, especialmente a los neutropénicos y a recién nacidos. Sin embargo, las infecciones por Staphylococcus
haemolyticus pueden ser de origen nosocomial o de origen comunitario. Es decir, es viable en ambos ambientes.

Patologías
Entre las patologías que Staphylococcus haemolitycus origina se encuentran: Bacteriemia, infección de heridas, pie diabético, osteomielitis,
infección oftálmica post quirúrgica, endocarditis, meningitis.

Tratamiento
En las infecciones de catéteres venosos debe considerarse la posibilidad de retirarlo, si esto no es posible entonces se debe sellar.
Concomitantemente a ello se debe administrar antibioticoterapia con vacomicina, linezolid o daptomicina. El uso de cloxacilina está restringido
a cepas que sean sensibles a la meticilina.
En el caso de infecciones de prótesis, se debe administrar un tratamiento prolongado, asociando rifampicina y una fluorquinolona o linezolid.
Este tratamiento casi siempre evita la necesidad de extraer la prótesis. Sin embargo, si la infección no cede se debe proceder a retirarla.
En meningitis y la endoftalmitis postquirúrgica puede tratarse con linezolid .