FACULTAD DE TECNOLOGÍA MÉDICA

ESCUELA DE LABORATORIO Y ANATOMÍA PATOLÓGICA

BACTERIOLOGÍA
Docentes:
Dr. Carlos Benites Azabache Alumno: Espinoza Palomino, Adrian.
Mg. David Lazón Año: 3er Año.

2020
Mg. Cesar Guerrero Barrantes
Prueba de
DNAsa
Prueba de DNAsa

 Es utilizado para identificar

estafilococos potencialmente
patógenos; manifiesta la
actividad de la
desoxirribonucleasa (DNAsa),
la cual es indicadora de su
patogenicidad.
Composicion:

Termonucleasa:
 Enzima
termoestable
 Actividad
endonucleasa.
 Staphylococus Escherichia coli
aureus

Fundamento: Luego de HCL 1M

 Se basa en la capacidad del

microorganismo de producir enzimas que
hidrolicen el ADN (rompen los enlaces
fosfodiéster).
 Para detectar la presencia de la enzima
(DNAsa), primero los organismos son
destruidos con calor y entonces la DNAsa
libre reacciona con el medio.
 Una vez realizada la actividad enzimática
será necesario evidenciarla mediante un
indicador, ya sea del propio cultivo (verde
de metilo o azul de toluidina O) o Aparición de halos No se evidencian los
agregando uno, (HCl 0.1M) y según el transparentes alrededor halos alrededor del
método se mostrará una decoloración del del área de crecimiento área de crecimiento
medio.
 Agar sin indicador
HCL 1M
 DNA no hidrolizado es
insoluble en HCl y se
precipita (opaco).
 Oligonucleótidos se
disuelven en el HCl y se ve
un área clara (halo
transparente).
Agar con indicador
Azul de toluidina O (TBO)
 Se forma un complejo con el
ADN, que cambia la estructura
cuando el ADN se hidroliza, lo
que resulta en un color rosado
brillante.
Agar con indicador
Verde de metilo
 Cuando se hidroliza el ADN,
el complejo se libera, aparece
unl halo claro alrededor de las
áreas donde hay presencia de
DNAsa.
Materiales:
Placa de petri con agar DNasa
 Peptona de soja
 Peptona de caseína
 Ácido desoxirribonucleico
 Cloruro sódico
 Con o sin indicador.
Microorganismo problema
HCl 0.1N
Pipeta pasteur
Asa de siembra de platino
Mechero bunsen
Estufa de cultivo.
 Procedimiento:
1. Preparar el agar DNA a utilizar.
2. Con la ayuda de un asa estéril, recoger varias
colonias de un cultivo.
3. Inocular el organismo de prueba y control en
cada área de prueba.
4. Incubar la placa a 35-37 ° C durante 24 horas.
5. Inundar la superficie de agar con una solución
0.1N HCL.
6. Permitir que el reactivo se absorba en la placa.
7. Observe el halo transparente característico.
 Usos:
 Se utiliza para determinar la capacidad de un organismo
para hidrolizar el ácido desoxirribonucleico.
 Se utiliza para diferenciar Staphylococcus aureus que
produce la enzima desoxirribonucleasa de otros
estafilococos que no producen DNAsa.
 Especialmente útil si el plasma no está disponible para
realizar la prueba de coagulasa o cuando el resultado de las
pruebas de coagulasa es difícil de interpretar.
 Identificación de bacterias con actividad DNAsa:

 Staphylococcus epidermidis Actividad DNasa (-).

 Staphylococcus aureus Actividad DNasa (+).
 Serratia marcescens Actividad DNasa (+).
Bibliografía:
Harris LG, Foster SJ, Richards RG. An introduction to
Staphylococcus aureus, and techniques for identifying
and quantifyings S.aureus adhesins in relations to
adhesion to biomaterials: Review. Eur Cells Mater. 2002
jul-dec; 4(2): 39-60.
BLAIR, E.B., EMERSON, J.J., TULL, A.H. 1967. Am. J.
Clin. Path. 47 : 30-39
2. SMITH, P.B., HANCOCK, G.A., RHODEN, D.L.
1969. Appl. Microbiol., 18 : 991-994.