CURSO: INMUNOLOGIA- PRÁCTICA

CICLO: IV
DOCENTES RESPONSABLES DE PRÁCTICA:
• AYDA LILIANA REYES RUÍZ
SEMESTRE: 2022-II • NOHELIA MELIZA HERNANDEZ APARCANA
• CÉSAR AUGUSTO MENDOZA YÁÑEZ
 UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN
BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE
LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE
MEDICINA HUMANA
“Dr. Wilfredo Erwin Gardini Tuesta”

ACREDITADA POR SINEACE

RE ACREDITADA INTERNACIONALMENTE
POR RIEV

PRACTICA N° 03
IDENTIFICACIÓN DE PROTEINAS SERICAS UTILIZANDO ELECTROFORESIS

Objetivos:
• Determinar la presencia de proteínas séricas presentes en una muestra
de sangre periférica humana mediante electroforesis
• Observar el patrón electroforético del plasma sanguíneo
• Relacionar el perfil electroforético con diversas enfermedades
ELECTROFORESIS DE PROTEINAS SERICAS

MARCO TEORICO

La electroforesis de proteínas séricas es un método que permite separas las proteínas

del plasma humano en fracciones.
La prueba consiste en aplicar el suero de un paciente en un gel y someterlo a un
campo eléctrico. Las proteínas del suero recorren diferentes distancias, en razón del
tamaño y peso molecular, formando fracciones o bandas.
En este tipo de muestras es posible identificar a albúmina, alfa-1-globulina,
Alfa-2-globulina, beta globulina y gammglobulina, siendo posible estimar su
concentración posteriormente.
El patrón electroforético de estas proteínas brinda información importante para el
médico, auxiliando en el diagnóstico de múltiples enfermedades como el mieloma
múltiple, cirrosis, diversos procesos inflamatorios, neoplásicos, infecciosos o de
naturaleza inmune
PATRON ELECTROFORETICO EN PLASMA
PERFIL ELECTROFORÉTICO:
 ELEMENTOS NECESARIOS PARAUNA
ELECTROFORESIS
Para realizar una electroforesis se requiere
de una serie de elementos
ELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA
ELECTROFORESIS EN ACETATO DE CELULOSA
 ELECTROFORESIS DE PROTEINAS SERICAS EN
ACETATO DE CELULOSA
Materiales: Preparación de reactivos
• Fuente de alimentación 0-300vOLTIOS - Tampón de electroforesis (Tris):
• Una cubeta de electroforesis con puentes Mezclar los 100 ml del tampón Tris Hippurate
• Aplicador semimicro con 4 depósitos concentrado con 1000 ml de agua destilada (se puede
• Micropipetas preparar menos cantidad respetando siempre las
• Cubetas proporciones).
• Agitador - Líquido decolorante (Ácido cítrico):
• Estufa - Disolver 1 paquete de ácido cítrico en 1000ml de
Reactivos: agua desionizada.
• Tiras de acetato de celulosa (Cellogel) - Agitar hasta que el polvo se disuelva
• Disolución tampón completamente
• Tiras Mylar (soportes para transparentar
• Líquido colorante (Rojo Ponceau
• Líquido decolorante (ácido cítrico)
• Solución transparentadora
Muestra:
• Suero o plasma
Preparación de la muestra: Pipetear 30 microlitros de
muestra en las salientes del aplicador
 PROCEDIMIENTO
1 2
1. Tomar una tira de Cellogel y sumergirla en una
cubeta que contenga 100 ml de tampón. Agitar en el
agitador de bandeja durante 10 – 15 minutos.
2. Sacar la tira de la cubeta (el tampón se recupera) y
retirar el exceso de tampón poniéndola entre 2
láminas de papel de filtro.
3. Posicionar la tira Cellogel sobre el puente con la cara
porosa hacia arriba, las tiras vienen con un corte en
una de sus esquinas, ese corte debe estar en la parte
inferior derecha del operador.
4. Introducir el puente en el interior de la cubeta.
5. Cargar el aplicador múltiple con 30 ul del suero en
cada muesca.
6. Bajar el aplicador sobre las muescas varias veces
para que se cargue correctamente.
7. Descargar las muestras sobre un papel de filtro
situado en la mesa (se desecha esta primera tanda).
 PROCEDIMIENTO
1
8. Volver a cargar las muestras de nuevo y descargar las
muestras sobre la tira de acetato de celulosa.
9. La siembra se hace a 2 cm del cátodo (polo (-)).
Mantener pulsado el aplicador durante 10 segundos
para cerciorarnos que la muestra penetre en la tira.
10. Rellenar completamente los 2 compartimentos de la
cubeta con tampón de electroforesis.
2
11. Se enciende la fuente de alimentación y se aplican
200 V (voltaje constante) durante 35 minutos
12. Transcurrido el tiempo se desconecta la fuente de la
red y se saca la tira Cellogel del puente.
13. Se traslada la tira cortándole ambos extremos
(dejamos sólo la parte donde se encuentra el suero ya
fraccionado) a un recipiente con el líquido colorante 3
(Rojo Ponceau).
14. Agitar durante 5 minutos. Posteriormente recuperar
el Rojo Ponceau a su frasco y lavar suavemente con agua
destilada para retirar el exceso de colorante.
 4
2
PROCEDIMIENTO 1

15. Pasar la tira al recipiente con líquido

decolorante (Ácido Cítrico), agitar y hacer
sucesivos lavados hasta que quede el fondo
completamente blanco. en este momento ya se
visualizan perfectamente las fracciones.
16. Para transparentar se introduce la tira en la
disolución transparentadora. Agitar durante 1
minuto.
17. Colocar la tira de Cellogel sobre un papel
Mylar. Cortar los bordes y retirar el exceso de
disolución evitando la aparición de burbujas. La
disolución transparentadora se recupera. 3
18. Colocar la película en el interior de una estufa
a 80ºC durante 10 minutos para completar la
transparentización.
19. Sacar de la estufa y dejar enfriar.
20. Escanear la película y realizar la densitometría
con el programa informático Scion. 5
 CUESTIONARIO
1. ¿CUALES SON LOS PRINCIPIOS DE LAS PRUEBAS DE
INMUNOELECTROFORESIS?

2. ¿CUALES SON LOS VALORES NORMALES DE LAS PROTEINAS SERICAS

EN EL ADULTO?

3. ¿CUALES SON LAS CONDICIONES ASOCIADAS CON NIVELES

ANORMALES DE GLOBULINA Y ALBUMINA?
https://www.youtube.com/watch?v=NL1usCc0n38 Electroforesis en ADN en gel de agarosa
4.18m
VIDEO TUTORIAL

https://www.youtube.com/watch?v=_8xftsCIwYo ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS

https://www.youtube.com/watch?v=_8xftsCIwYo Electroforesis
https://www.youtube.com/watch?v=ALPi5GUyR1E ELECTROFORESIS DE de proteinasSERICAS
PROTEÍNAS
EN TIRAS DE ACETATO DE CELULOSAA
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Salazar A, Sandoval A, Armendariz J. Biología Molecular.
Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud. 1ra.
Ed. Mexico D.F: MacGraw Hill:2013

Lomonte, B. (2007) Manual de Métodos Inmunológicos, 138

pp. Universidad de Costa Rica.
Acceso libre en: http://www.icp.ucr.ac.cr/~blomonte/
GRACIAS