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Chem Basic
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GENÉTICO
Replicación ADN
El ADN es la macromolécula depositaria de la información
genética.
Proteína
CARACTERÍSTICAS DEL PROCESO DE
REPLICACIÓN DEL ADN
1)LA REPLICACIÓN DEL ADN ESTÁ
COORDINADA CON EL CICLO DE CRECIMIENTO
Y DIVISIÓN CELULAR.
2)LA REPLICACIÓN ES SEMICONSERVATIVA
Según Watson y Crick las dos cadenas del ADN son
complementarias y cada una actúa como molde para
la síntesis de la hebra complementaria, da lugar a dos
moléculas de ADN duplohelicoidal idénticas al ADN
original, de modo que cada ADN contiene una hebra
vieja y una nueva.
Este postulado fue confirmado por Stahl en 1957:
cultivaron durante varias generaciones E. colicon N15,
de modo que todos los componentes nitrogenados de
la célula contendrían N15 y por tanto al centrifugar en
gradiente con cloruro de cesio tendrían mayor
densidad de sedimentación el ADN marcado con N15
y no con N 14. Posteriormente transfieren las
bacterias al ADN con un medio con N14, se extrae el
ADN, se centrifuga en gradiente de cesio y se obtiene
una banda con densidad de centrifugación intermEdia
que corresponde al ADN híbrido. Tras una segunda
generación se repitió el experimento y se aisló el ADN
y se centrifugó en gradiente de clouro de cesio
obteniéndose una banda a medio caminno y una
banda a elevado nivel o ADN ligero.
3) LA REPLICACIÓN COMIENZA EN UN PUNTO
DE ORIGEN Y ES BIDIRECCIONAL:
Se plantean a nivel de replicación una serie de
interrogantes:
- ¿Se desenrrollan totalmente las cadenas de
ADN parental para que cada una sea replicada?
- ¿Dónde comienza la replicación: en sitios al
azar o en un punto único?
- Si se inicia en un punto ¿se da en una
dirección o en ambas?
- John Cairns proporcionó la primero indicación de que
la preplicación es un proceso altamente coordinado en
el que las dos hebras parentales se desenrrollan y se
replican simultáneamente.
- Esta hipótesis se confirmó aislando y examinando el
cromosoma de E. coli (bacteria que vive en nuestro
intestino grueso y contienen un cromosoma circular y
puede contener otros ADN en forma de plásmidos, que
pueden contener más de una copia de 3 a 100 genes y
pueden contener más de una copia una misma célula.
- Cairns cultivó E. coli durante una generación o 1,5
generaciones en un medio con timidina tritiada. En la
primera generación originó una progenie que contenía
una hebra marcada radioactivamente y otra hebra no.
La primera generación obtuvo bacterias y mediante
autorradiografía examinó el ADN, su radioactividad
reveló el cromosoma entero y la segunda revelaba
ADN incorporado de novo. Al analizar la película
fotográfica observó un nuevo lazo en forma de letra
griega tedta. La zona de intersección entre las dos
zonas responsables y no replicadas se llama horquilla
de replicación.
- Para explicar si era mono o bidireccional se observó
que la mayor radioactividad se sitaba en las dos
horquillas de replicación, lo que indicaba que la
replicación era bidireccional.
- Otros experimentos indicaron que la replicación se
iniciaba en un punto único denominado OriC u origen
de repliación. Es un gen de 245 pb con cuatro
secuencias repetidas.
4) La síntesis de ADN transcurre en dirección
5´ 3´ y es semidiscontinua
Las cadenas de ADN siempre son sintetizadas en la dirección
5´ 3´, siendo el 3´OH libre el punto de elongación del ADN.
Debido a que las cadenas de ADN son antiparalelas, la
cadena que actúa de molde es leída del extremo 3´ al 5´.
Si la síntesis transcurre siempre en la dirección 5´ 3´,
¿cómo pueden sintetizarse simultáneamente las dos
cadenas? Si las dos cadenas fuesen sintetizadas
continuamente a medida que avanza la horquilla de
replicación, una tendría que se sintetizada en dirección 3´
5´. Este problema fue resuelto por Reiji Okazaki y col en la
década de 1960, al descubrir que una de las cadenas es
sintetizada en forma de trozos cortos, denominados
fragmentos de Okazaki. Este trabajo condujo a la conclusión
de que una de las cadenas es sintetizada de forma continua y
la otra discontinua (Figura 4). La cadena continua o cadena
conductora es aquella cuya síntesis en dirección 5´ 3´
transcurre en la misma dirección que el movimiento de la
horquilla de replicación. La cadena discontinua o cadena
rezagada es aquella cuya síntesis en dirección 5´ 3´
transcurre en dirección opuesta a la dirección del movimiento
de la horquilla. Como veremos más adelante, la síntesis de la
hebra conductora y rezagada están estrechamente
coordinadas.
5) EL ADN ES SINTETIZADO POR LAS
ADN POLIMERASAS
PROCESO GLOBAL DE REPLICACIÓN EN
PROCARIOTAS