Escuela Secundaria General No.

4 “Cuauhtémoc”

1º B

Biología Ciencias 1

Replicación del ADN

Ancheyta López Aldo Abrahán #3

Estrada Ocampo Daira Naomi #13
Gálvez López Paola Jazmín #17
Gonzales Villalobos Sofia Beatriz #21
Ordoñez Esquivel Diana Laura #34
Orozco López Danna Paola #35

27 de abril de 2018
 Replicación del ADN
El proceso de replicación de ADN es el mecanismo que permite al
ADN duplicarse (es decir, sintetizar una copia idéntica). De esta
manera de una molécula de ADN única, se obtienen dos o más
"réplicas" de la primera. Esta duplicación del material genético se
produce de acuerdo con un mecanismo semiconservador, lo que
indica que los dos polímeros complementarios del ADN original, al
separarse, sirven de molde cada una para la síntesis de una nueva
cadena complementaria de la cadena molde, de forma que cada
nueva doble hélice contiene una de las cadenas del ADN original.
Gracias a la complementación entre las bases que forman la
secuencia de cada una de las cadenas, el ADN tiene la importante
propiedad de reproducirse idénticamente, lo que permite que la
información genética se transmita de una célula madre a las células
hijas y es la base de la herencia del material genético.
La molécula de ADN se abre como una cremallera, por ruptura de los
puentes de hidrógeno entre las bases complementarias en puntos
determinados: los orígenes de replicación. Las proteínas iniciadoras
reconocen secuencias de nucleótidos específicas en esos puntos y
facilitan la fijación de otras proteínas que permitirán la separación de
las dos hebras de ADN formándose una horquilla de replicación. Un
gran número de enzimas y proteínas intervienen en el mecanismo
molecular de la replicación, formando el llamado complejo de
replicación o replisoma. Estas proteínas y enzimas son homólogas en
eucariotas y arqueas, pero difieren en bacterias.

Características generales del ADN

Es una cadena molecular, quiere decir que es una sustancia
constituida por distintos tipos de moléculas sencillas ligadas entre sí
para así ir formando cadenas.
Es bastante largo y extremadamente delgado. Si aumentáramos cien
veces el tamaño del núcleo celular alcanzaría el tamaño de la punta de
un alfiler, mientras que el ADN plegado en ese mismo núcleo
alcanzaría la longitud de un campo de fútbol.
Hay cuatro tipos de eslabones, esos son las moléculas denominadas
nucleótidos en la cadena. Sus nombres son: ácido adenílico (adenina),
ácido guanílico (guanina), ácido citidílico (citosina) y ácido timidílico
(timina) y las abreviaturas, A, G, C, T, para cada una.

Semiconservadora

Tres posibles modelos de replicación. a) Conservadora, b) Dispersora,

c) Semiconservadora (mecanismo real).
En cada una de las moléculas hijas se conserva una de las cadenas
originales, y por eso se dice que la replicación del ADN es semi
conservadora. Hasta que finalmente se pudo demostrar que la
replicación es semiconservadora, se consideraron tres posibles
modelos para el mecanismo de la replicación:

 Semiconservadora (modelo correcto). En cada una de las

moléculas hijas se conserva una de las cadenas originales.
 Conservadora. Se sintetiza una molécula totalmente nueva, copia
de la original.
 Dispersora, o dispersante. Las cadenas hijas constan de
fragmentos de la cadena antigua y fragmentos de la nueva.
 Experimento de Meselson y Stahl.
El experimento de Meselson y Stahl en 1958 permitió demostrar que
el mecanismo real se ajusta a la hipótesis de replicación
semiconservadora. Para ello se hicieron crecer células de Escherichia
coli en presencia de nitrógeno-15, un isótopo del nitrógeno más
pesado de lo habitual. En consecuencia, el isótopo se incorporó a las
cadenas de ADN que se iban sintetizando, haciéndolas más pesadas.
Una vez conseguido el primer objetivo, las células fueron transferidas
a un medio que contenía nitrógeno-14, es decir, un medio más ligero,
donde continuaron su crecimiento (división celular, que requiere la
replicación del ADN). Se purificó el ADN y se analizó mediante
una centrifugación en gradiente de cloruro de cesio, en donde hay
más densidad en el fondo del tubo que en la parte media del mismo.
En la primera generación (figura 2.b) se obtuvo una única banda de
ADN con densidad intermedia. En la segunda generación (figura 2.c)
se obtuvieron dos bandas, una con densidad ligera y otra con
densidad intermedia o híbrida. En la tercera generación se obtuvieron
dos bandas, una ligera (con una abundancia del 75 %) y otra
intermedia (con el 25 % restante).
La banda intermedia o híbrida representa una molécula de ADN que
contiene una cadena pesada (original) y otra ligera (recién sintetizada).
Las cadenas ligeras representan una molécula de ADN en la que las
dos cadenas han sido sintetizadas (no existían aún cuando las células
se pusieron en presencia de nitrógeno-15).
El hecho de que cada vez haya más moléculas ligeras y se mantenga
el número de moléculas intermedias demuestra que la replicación del
ADN es semiconservadora. Si fuera conservadora, aparecería siempre
una banda pesada y el resto ligeras (figuras 1.a, 1.b, 1.c) . Si fuera
dispersante sólo aparecerían bandas híbridas de densidad intermedia
en todas las generaciones.

Secuencial y bidireccional desde puntos fijos

Los orígenes de replicación son los puntos fijos a partir de los cuales
se lleva cabo la replicación, que avanza de forma secuencial formando
estructuras con forma de horquilla. Por otro lado, la replicación se lleva
a cabo bidireccionalmente, es decir, a partir de cada origen se
sintetizan las dos cadenas en ambos sentidos.
El origen de replicación
La cantidad de ADN que se puede sintetizar a partir de un único origen
de replicación se denomina replicón o unidad funcional de replicación.
El genoma bacteriano es un replicón único circular. En organismos
eucarióticos, la replicación del ADN se inicia en múltiples orígenes a la
vez (hay uno cada 20 kb aproximadamente), es decir, hay varios
replicones.

Los experimentos realizados por Cairns (1963)

con bacterias Escherichia coli permitieron determinar la existencia de
ese punto fijo u origen de replicación a partir del cual el genoma
empezaba a replicarse. Los experimentos consistían en mantener un
cultivo de E. coli creciendo en un medio que contenía timidina tritiada
(timina marcada con tritio), de forma que el ADN quedara marcado
radiactivamente pudiendo efectuarse una autorradiografía. A
continuación se observaba al microscopio. Los resultados indicaban
que la replicación en E. coli se iniciaba en un punto concreto (OriC).
 Secuencialidad
Sueoka y Yoshikawa (1963) realizaron estudios genéticos de
complementación de mutaciones que permitieron determinar que
desde los orígenes la replicación avanza de forma secuencial.
Trabajaron con Bacillus subtilis porque era posible obtener cultivos
sincronizados de forma que todas las células del cultivo estuvieran en
la misma fase del ciclo celular. El método consistía en la conjugación
bacteriana de cepas silvestres con cepas mutantes incapaces de
sintetizar determinados aminoácidos. Conociendo la localización de
los genes que codifican las proteínas implicadas en la síntesis de los
diferentes aminoácidos en el cromosoma bacteriano, y haciendo
crecer las bacterias receptoras en un "medio mínimo" (donde sólo
pudiesen crecer las que hubieran recibido alguno de estos genes), al
extraer ADN a diferentes tiempos se observó que, tras la última
extracción aparecía con mayor frecuencia el gen implicado en la
síntesis de uno de los aminoácidos (el correspondiente a la "posición
1"), que el gen adyacente implicado en la síntesis de otro aminoácido
("posición 2"). De la misma forma, el gen que ocupaba la "posición 3"
aparecía con menor frecuencia que el que ocupaba la "posición 2", y
así sucesivamente.
Como los primeros genes en replicarse en la bacteria donadora serían
los primeros en transferirse, el experimento permitió demostrar, a partir
de las frecuencias relativas de los diferentes genes en las bacterias
receptoras, que la replicación sigue un orden (es secuencial).
La replicación avanza en forma de horquilla
Debido a que en la célula ambas cadenas de la doble hélice de ADN
se duplican al mismo tiempo, éstas deben separarse para que cada
una de ellas sirva de molde para la síntesis de una nueva cadena. Por
eso, la replicación avanza con una estructura en forma
de horquilla formándose una burbuja u ojo de replicación (también
llamada estructura θ cuando el ADN es circular debido a la similaridad
entre la letra griega y la forma que adopta el cromosoma bacteriano en
estados intermedios de replicación, no obstante pudiendo aparecer
estructuras alternativas),3 que avanza en dirección a la región de ADN
no duplicado dejando atrás los dos moldes de ADN de cadena simple
donde se está produciendo la replicación.
 Bidireccionalidad
El movimiento de la horquilla es bidireccional en la mayoría de los
casos, es decir, a partir de un punto se sintetizan las dos cadenas en
ambos sentidos. Esto ocurre en la mayoría de los organismos, pero se
dan excepciones en algunos procariontes debido a que los
mecanismos de replicación que tienen lugar dependen de la propia
estructura de su material hereditario (si el ADN es circular, lineal,
bicatenario o monocatenario). Así, en casos particulares como el ADN
mitocondrial, algunos plásmidos y algunos genomas monocatenarios
de fagos pequeños, la replicación se da unidireccionalmente pudiendo
haber uno o dos orígenes de replicación

Distinción entre la replicación unidireccional y la

bidireccional mediante el recuento de copias
de genes marcadores. O es el origen de
replicación y A, B, C, D, E son genes marcadores.

En la mayoría de los casos la replicación es bidireccional.

No obstante, la replicación se puede considerar, de forma general,
bidireccional.
La evidencia experimental del crecimiento bidireccional de la hebra de
ADN viene dada por una técnica basada en el marcaje radiactivo del
ADN usando timidina marcada con tritio. Primero se añade timidina sin
marcar y luego marcada con tritio; siguiendo el rastro de tritio se
observa hacia dónde se ha replicado la molécula de ADN. 3 También se
puede, mediante el recuento de copias de genes marcadores,
determinar si la replicación es unidireccional o bidireccional. Otras
técnicas se basan en medir la distancia desde los ojos de replicación
hasta los extremos de un ADN lineal (o circular convertido en lineal
mediante enzimas de restricción).

Semidiscontinua

La replicación es semidiscontinua.
La replicación siempre se produce en sentido 5' → 3', siendo el
extremo 3'-OH libre el punto a partir del cual se produce la elongación
del ADN. Esto plantea un problema, y es que las cadenas tienen que
crecer simultáneamente a pesar de que son antiparalelas, es decir,
que cada cadena tiene el extremo 5' enfrentado con el extremo 3' de la
otra cadena. Por ello, una de las cadenas debería ser sintetizada en
dirección 3' → 5'.
Este problema lo resolvieron los científicos japoneses Reiji
Okazaki y Tsuneko Okazaki en la década de 1960, al descubrir que
una de las nuevas cadenas de ADN se sintetiza en forma de trozos
cortos que, en su honor, se denominan fragmentos de Okazaki. Su
longitud suele variar entre 1000 y 2000 nucleótidos en las bacterias y
entre 100 y 400 nucleótidos en eucariontes.
La cadena que se sintetiza en el mismo sentido que avanza
la horquilla de replicación se denomina hebra adelantada (en
inglés, leading strand, que a veces se traduce por líder o conductora) y
se sintetiza de forma continua por la ADN polimerasa, mientras que la
que se sintetiza en sentido contrario al avance se denomina hebra
rezagada o retrasada (en inglés, lagging strand), cuya síntesis se
realiza de forma discontinua teniendo que esperar a que la horquilla de
replicación avance para disponer de una cierta longitud de ADN
molde.
ADN Polimerasas
Estructura en 3D de un ADN polimerasa.
La ADN polimerasa es la enzima que cataliza la síntesis de la nueva
cadena de ADN a partir de desoxirribonucleótidos y de la molécula de
ADN plantilla o molde que es la que será replicada. La enzima copia la
cadena de nucleótidos de forma complementaria (A por T, C por G)
para dar a cada célula hija una copia del ADN durante la replicación.

Modo de operación
En cada horquilla de replicación, la ADN polimerasa y otras enzimas
sintetizan dos nuevas cadenas de ADN que son complementarias
respecto a las 2 cadenas originales. Durante este proceso, la ADN
polimerasa reconoce una base nucleotídica no apareada de la cadena
original y la combina con un nucleótido libre que tiene la base
complementaria correcta. Luego, la ADN polimerasa cataliza la
formación de nuevos enlaces covalentes que ligan el fosfato del
nucleótido libre entrante con el azúcar del nucleótido previamente
agregado en la cadena hija en crecimiento. De esta forma, la ADN
polimerasa sintetiza el esqueleto de azúcar-fosfato de la cadena hija.

Función correctora exonucleasa 3' → 5' de las ADN polimerasas.

Las ADN polimerasas también realizan otras funciones durante el
proceso de replicación. Además de participar en la elongación,
desempeñan una función correctora y reparadora gracias a su
actividad exonucleasa 3', que les confiere la capacidad de degradar el
ADN partiendo de un extremo de éste. Es importante que existan
estos mecanismos de corrección ya que de lo contrario los errores
producidos durante la copia del ADN darían lugar a mutaciones.
Proceso general

 La helicasa rompe los puentes de hidrógeno de la doble hélice,

abriendo las dos hebras, permitiendo el avance de la horquilla de
replicación.
 La topoisomerasa relaja la tensión provocada por el
superenrollamiento del ADN al abrirse las dos hebras.
 Las proteínas SSB estabilizan las cadenas abiertas y las mantienen
separadas una de otra.
 El cebador fragmentos de ARN que se unen a la cadena molde por
puentes de hidrógeno para que la ADN polimerasa III reconozca
donde debe unirse para empezar a añadir nucleótidos.
 La ADN polimerasa III sintetiza la cadena complementaria de forma
continua en la hebra adelantada y de forma discontínua en la hebra
rezagada, ya que solo puede sintetizar en dirección 3'→ 5'.
 La ADN polimerasa I reemplaza los cebadores de ARN por
nucleótidos de ADN.
 La ARN primasa sintetiza el cebador de ARN necesario para la
síntesis de la cadena complementaria a la cadena rezagada.
 La ADN ligasa une los fragmentos de Okazaki.
El proceso se puede dividir en 3
fases: iniciación, elongación y terminación.
 Iniciación
Mediante consumo de ATP en dirección a la horquilla de replicación,
es decir, en dirección 3' → 5' en la hebra rezagada y 5' → 3' en la
hebra adelantada, la helicasa actúa rompiendo los puentes de
hidrógeno que mantienen unida la doble hélice. El siguiente conjunto
de proteínas reclutadas son las denominadas proteínas SSB
encargadas de la estabilización del ADN monocatenario generado por
la acción de las helicasas, impidiendo así que el ADN se renaturalice o
forme de nuevo la doble hélice, de manera que pueda servir de molde.
Estas proteínas se unen de forma cooperativa, por lo que su unión al
DNA conforme avanza la helicasa es rápida. Por otro lado, conforme
las helicasas van avanzando se van
generando superenrollamientos en la doble cadena de ADN por
delante de la horquilla y si éstos no fueran eliminados, llegado a un
punto el replisoma ya no podría seguir avanzando.
Las topoisomerasas son las enzimas encargadas de eliminar los
superenrollamientos cortando una o las dos cadenas de ADN y
pasándolas a través de la rotura realizada.

Elongación

Enzimas que participan en la replicación de E.

coli: helicasa, proteínas SSB, topoisomerasa, ARN primasa,
Holoenzima ADN Pol III.
En el siguiente paso, el ADN Pol III cataliza la síntesis de las nuevas
cadenas añadiendo nucleótidos sobre el molde. Esta síntesis se da
bidireccionalmente desde cada origen, con dos horquillas de
replicación que avanzan en sentido opuesto. Cuando el avance de dos
horquillas adyacentes las lleva a encontrarse, es decir, cuando dos
burbujas se tocan, se fusionan, y cuando todas se han fusionado todo
el cromosoma ha quedado replicado.
Puesto que el ADN Pol III necesita de un extremo 3'-OH libre, es
necesario que un ARN primasa catalice la formación de un fragmento
corto específico de ARN llamado cebador, que determinará el punto
por donde la ADN polimerasa comienza a añadir nucleótidos. Así,
durante la síntesis, en cada horquilla de replicación se van formando
dos copias nuevas a partir del cebador sintetizado en cada una de las
dos hebras de ADN que se separaron en la fase de iniciación, pero
debido a la unidireccionalidad de la actividad polimerasa de la ADN
Pol III, que sólo es capaz de sintetizar en sentido 5´ → 3', la
replicación sólo puede ser continua en la hebra adelantada; en la
hebra rezagada es discontinua, dando lugar a los fragmentos de
Okazaki.
La mitad del dímero de la ºADN Pol III sintetiza la hebra adelantada y
la otra mitad la hebra rezagada. 3 La elongación de la hebra rezagada
ocurre por medio del modelo del trombón.
Hebra rezagada: síntesis de cebadores, unión de fragmentos de
Okazaki y eliminación de los cebador