ENZIMAS

Blgo. José Antonio Valeriano

Zapana
Las enzimas son proteínas
 Catalizan reacciones químicas necesarias
para la sobrevivencia celular
 Sin las enzimas los procesos biológicos
serían tan lentos que las células no podrían
existir.
 Las enzimas pueden actuar dentro de la
célula , fuera de ésta, y en el tubo de ensayo.

E + S ESEP  E + P

E E E E
La enzima disminuye la energía de
activación
Sin enzima
Con enzima

• La Ea de la hidrólisis de la urea
baja de 30 a 11 kcal/mol con la
E+S acción de las enzimas, acelerando
la reacción 1014 x
• El aumento de temperatura
necesario para producir la reacción
E+P no catalizada seria de 529ºC
Tiempo de la reacción
Enzima - Catalizador
 Tanto la enzima como el catalizador
aceleran la velocidad de una reacción
química.
 Una enzima puede transformar 1000
moléculas de sustrato/ segundo
 Las enzimas tienen 3 propiedades que los
catalizadores NO tienen
• Especificidad por el sustrato
• Se inactivan por desnaturación
• Pueden ser reguladas
 Las enzimas se unen a los reactivos
(sustratos) reduciendo la energía de
activación

 Cada enzima tiene una forma única

con un sitio o centro activo en el que
se une al sustrato

 Después de la reacción, enzimas y

productos se separan.

 Las moléculas enzimáticas no han

cambiado después de participar en la
reacción
Las enzimas cumplen su papel catalítico gracias a:
• Fijación estereoquímicamente complementaria
del substrato
• Transformación catalítica del mismo

En ambas funciones participan:

• Cadenas laterales de los aminoácidos

• Grupos o moléculas no proteicas:
 Grupos prostéticos
 Iones metálicos
 Cofactores
Los siguientes hechos:
 Especificidad de la reacción enzimática
 Carácter heterogéneo de la catálisis enzimática

Nos llevan a postular la existencia de un Centro

Activo en la molécula de enzima, capaz de:

 Fijar específicamente al substrato

 Transformarlo catalíticamente.
Enzima

Sustrato

Sitio activo
 La unión del sustrato es muy
específica

 Complementariedad geométrica
 Complementariedad de cargas, uniones
iónicas
 Modelos:
 Encaje inducido
 Llave – cerradura.
 Estado de transición
Teorías de la acción enzimática, 1
Modelo de Llave y Cerradura (Emil Fischer)

Substrato y enzima se acoplan de forma estereospecífica,

de la misma manera que una llave se ajusta a su
cerradura.

Modelo aceptado durante mucho tiempo; hoy se

considera insuficiente al no explicar algunos fenómenos
de la inhibición enzimática
Teorías de la acción enzimática, 2
Modelo de Ajuste Inducido (Koshland)

Tanto la enzima como el substrato sufren una alteración

en su estructura por el hecho físico de la unión.

Está mucho más de acuerdo con todos los datos

experimentales conocidos hasta el momento.
Teorías de la acción enzimática, 3
Estabilización del Estado de Transición

La teoría del Ajuste Inducido se amplía en la actualidad

definiendo la acción enzimática como

Según lo cual, el Centro Activo enzimático es en realidad

complementario no al substrato o al producto, sino al
estado de transición entre ambos.
Una enzima puede unir dos sustratos
en su sitio activo
 Clasificación y
nomenclatura de enzimas
 Clasificación y nomenclatura
Nombre sistemático: Grupo transferido

ATP: hexosa fosfotransferasa

Donador Aceptor Tipo de reacción catalizada

Grupos
Número Enzyme Commission:
químicos
Enzyme EC 2.7.1.1 Enzimas
Comission Subgrupo
Grupo

Nombre común (sustrato+”asa”): Hexokinasa

Clasificación y nomenclatura

Clasificación de enzimas por Grupos

EC 1.x  Oxidorreductasas
EC 2.x  Transferasas
EC 3.x  Hidrolasas
EC 4.x  Liasas
EC 5.x  Isomerasas
EC 6.x  Ligasas
 Clasificación y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas
Catalizan reacciones de oxidorreducción, en que átomos de
oxigeno ó hidrogeno son trasladados entre moléculas:

Ared + Box Aox + Bred

AH2 + B A + BH2

En las reacciones redox, siempre tienen que estar presentes a

la vez el aceptor y el dador electrónico.
 Clasificación y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas

Nombre: Dador:Aceptor oxidorreductasa

b-D-Glucosa : O2 1-oxidorreductasa EC 1.1.3.4

Dador Aceptor

Nombre común:
Glucosa oxidasa
 Clasificación y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas
Nomenclatura del subgrupo en oxidorreductasas:
EC 1.1.x - Deshidrogenasas
EC 1.2.x - Oxidasas
EC 1.3.x - Peroxidasas
EC 1.4.x - Oxigenasas
EC 1.5.x - Hidroxilasas
EC 1.6.x - Reductasas
etc.
Aplicaciones: Ensayos de diagnostico clínico (glucosa oxidasa y colesterol oxidasa
Deslignificación ó Bioblanqueamiento
 Clasificación y nomenclatura
Grupo 2: Transferasas
Catalizan reacciones de transferencia de átomos ó
grupo de átomos entre moléculas:

A-X + B A + B-X

Dador: Aceptor Grupo transferido - transferasa

ATP: D-Hexosa Fosfotransferasa EC 2.7.1.1

Nombre común: hexokinasa
 Clasificación y nomenclatura
Grupo 2: Transferasas
Clasificación de subgrupo de las transferasas:
EC 2.1.x - Grupos monocarbonados
EC 2.2.x - Grupos aldehido o ceto
EC 2.3.x - Aciltransferasas
EC 2.4.x - Glicosiltransferasas
EC 2.5.x - Alquil- o Ariltransferasas
EC 2.6.x - Grupos nitrogenados
EC 2.7.x - Grupos fosfato
EC 2.8.x - Grupos sulfato
EC 2.9.x - Grupos selenio
Aplicaciones: Síntesis de oligosacáridos
 Clasificación y nomenclatura
Grupo 3: Hidrolasas
Catalizan reacciones de hidrólisis y también su reverso. Son
las más comunes en el dominio de la tecnología enzimática:

A-B + H2O A-OH + H-B

No se suelen utilizar nombres sistemáticos en las

hidrolasas. Muchas de ellas conservan el nombre
Primitivo. Ejemplo: Quimosina EC 3.4.23.4.
 Clasificación y nomenclatura
Grupo 3: Hidrolasas
Clasificación de las hidrolasas:
3.1.-.- Esterasas (carboxilesterasas, fosfoesterasas, sulfoesterasas)
3.2.-.- Glicosidasas
3.3.-.- Éter hidrolasas
3.4.-.- Péptido hidrolasas
3.5.-.- Acil anhídrido hidrolasas
etc.
Aplicaciones: Lipasas → Síntesis de tensioactivos
Proteasas → Fabrico de quesos
Glicosidasas → Clarificación de jugos; liberación de aromas en los
vinos; aplicaciones textiles
 Clasificación y nomenclatura
Grupo 3: Hidrolasas
Caso particular  Péptido hidrolasas: clasificación común (no
sistemática)

I. Según la situación del enlace atacado:

- Exopeptidasas (extremos de la cadena) (Peptidasas)
- Endopeptidasas (interior de la cadena) (Proteinasas)
II. Según el mecanismo catalítico:
- Serin proteinasas
- Tiol proteinasas
- Aspartil proteinasas
- Metaloproteinasas
 Clasificación y nomenclatura
Grupo 4: Liasas
Catalizan reacciones reversibles de remoción de grupo de
átomos del sustrato (este grupo no incluye las hidrolasas):

A-B A+B
Ejemplo
Nombre sistemático:
Histidina amonio-liasa (EC 4.3.1.3)

Nombre común:
Histidasa
 Clasificación y nomenclatura
Grupo 4: Liasas
Clasificación de las liasas:
4.1.x - Actúan sobre enlaces C-C
4.2.x - Actúan sobre enlaces C-O
4.3.x - Actúan sobre enlaces C-N
4.4.x - Actúan sobre enlaces C-S
4.5.x - Actúan sobre enlaces C-Haluro (S-, Cl-, Br-, I- At-)
4.6.x - Actúan sobre enlaces P-O
4.99.x - Otras liases
Aplicaciones: Pectato liasa – Remueve los compuestos indeseables (ceras,
pectinas, proteínas) en fibras en la industria textil – “bioscouring”
 Clasificación y nomenclatura
Grupo 5: Isomerasas
Catalizan reacciones de isomerización moleculares

A B
Ejemplo:
Glucosa isomerasa (EC 5.3.1.5)
 Clasificación y nomenclatura
Grupo 5: Isomerasas
Clasificación de las isomerasas:

5.1.x - Rasemasas y Epimerasas

5.2.x - cis-Trans-Isomerasas
5.3.x - Oxidoreductasas Intramolecular
5.4.x - Transferasas Intramoleculares (mutases)
5.5.x - Liasas Intramoleculares
5.99.x - Otras Isomerasas
 Clasificación y nomenclatura
Grupo 6: Ligasas
Catalizan la unión de dos grupos químicos a expensas
de la hidrólisis de un nucleótido trifosfato (ATP, GTP, etc.).

A + B + ATP A-B + ADP + Pi

Ejemplo: Glutationa sintasa (EC 6.2.2.3)

Nombre sistémico:
G-L-glutamilo-L-cisteina:glicina ligase
 Clasificación y nomenclatura
Grupo 6: Ligasas
Clasificación de las ligasas:

6.1.x - Forman enlaces C-O

6.2.x - Forman enlaces C-S
6.3.x - Forman enlaces C-N
6.4.x - Forman enlaces C-C
6.5.x - Forman enlaces ésteres fosfóricos
6.6.x - Actúan sobre enlaces N-metal
Cinética Enzimática
 Cinética Enzimática
 La cinética enzimática es el análisis cuantitativo del efecto
de cada uno de los factores que intervienen en la actividad
enzimática, que se evalúa a través de la velocidad de la
reacción catalizada.
 Las variables más importantes son:
• Concentración de enzima, sustratos y productos
(incluyendo inhibidores y/o activadores)
• pH
• Temperatura
 Ella está basada en la medición de la velocidad de reacción. Así en la reacción:

E
S P

 Se tendrá:
dp ds
v 
dt dt
 Como se observa en la figura, la velocidad de reacción (pendiente) disminuye
continuamente a partir de un valor máximo inicial. Esto se puede deber a:
 Desaturación de la enzima con sustrato, por disminución de la
concentración del sustrato
 Inactivación de la enzima por su inherente inestabilidad
 Inhibición por el producto
 Desplazamiento del equilibrio, si la reacción es reversible
Baja
concentración
de sustrato

ALTA
concentración
de sustrato
SATURACION
 Efecto de la concentración de substrato

. . . .
v
.
.
.
.
[s]
 Concepto de velocidad inicial

d[P]
[ ] v = dt , t 0
p

t
Una cinética hiperbólica implica un proceso saturante:

Hay un número limitado de sitios en la enzima

para fijar substrato; una vez que están ocupados
todos, por mucho que aumente la concentración
de substrato, la velocidad permanecerá constante
tendiendo a un valor asintótico

k+1 k+2
E+S ES E+P
k-1
El sistema de ecuaciones diferenciales que describe la dinámica
del sistema
k+1 k+2
E+S ES E+P
k-1

Sistema No admite solución analítica.

- Simulaciones numéricas
- Hipótesis que lo simplifiquen
 Hipótesis de Michaelis - Menten
k+1 k+2
E+S ES E+P
k-1
- La primera parte del mecanismo,

k+1
E+S ES
k-1
Tiene lugar mucho más rápidamente que la segunda:

k+2
ES E+P
 Hipótesis de
Michaelis-Menten
 E  S  es e0  xs
Km   
Equilibrio rápido  ES  x x

e0 s
x
Km  s
Vmax s
v  k 2 x v
k 2 e0 s Km  s
v
Km  s

k 2 e0  Vmax
 Hipótesis de estado estacionario
Según veíamos en la simulación numérica, hay un tiempo
relativamente prolongado en el curso de la reacción en el
que la variación de complejo [ES] es prácticamente igual
a cero:
dx/dt = k+1es - (k-1 + k+2) x = 0

A partir de esta expresión podemos llegar a obtener una

expresión que nos da la velocidad para la concentración
de substrato
  0  k 1es   k 1  k 2  x
dx
dt

k1es  k1 e0  xs   k1  k2  x

e0 s e0 s
x
k 1  k 2
 Vmax s
s
Km  s
v
k 1
Km  s
v  k 2 x Hipótesis de
estado estacionario

k 2 e0  Vmax
 A partir de las suposiciones de Michaelis-Menten y
Estado estacionario, llegamos a la ecuación

Vmax * s
v=
Km + s

La única diferencia radica en el significado de Km:

Km = k-1/k+1 en mecanismo de M.M.

Km = (k-1 + k+2)/k+1 en mecanismo de E.E.

Significado de la constante Km
1. Constante de equilibrio de disociación del complejo ES
(en condiciones de equilibrio rápido)

2. Medida inversa de la afinidad de la enzima por el substrato

(en condiciones de equilibrio rápido)

3. Mide la función de fijación (en cond.de equilibrio rápido)

4. Concentración de substrato para la que la velocidad se hace

igual a la mitad de la máxima (s0.5)

5. Se define para una pareja enzima-substrato

6. Se mide en unidades de concentración

Significado de la constante Vmax = k+2 e0

1. Velocidad asintótica para s

2. Directamente proporcional a la concentración de

enzima (hoy se prefiere caracterizar a la enzima
por k+2)

3. Mide función de transformación catalítica

4. Se expresa en unidades de velocidad

 Relación entre Km y Vmax
Michaelis y Menten
Velocidad de la reacción (v) Vmax

Vmax/2

Km Concentración de Sustrato [S]

La Km es la concentración de sustrato
donde se obtiene la mitad de la Vmax
 Vmax

Velocidad de la reacción (v)

Vmax/2

Km Concentración de Sustrato [S]

A mayor Km, menor es la afinidad de la enzima por el sustrato

A menor Km mayor es la afinidad de la enzima por el sustrato
 Representación directa

v
100
Vmax
80

60

40

20

s
0
0 20 40 60 80 100

Km
 Representación recíproca doble
(Lineweaver - Burk)
Representación Lineweaver-Burke
0.04

1/v
0.03

1/Vmax
0.02

1 Km 1 1
-1/Km   
0.01
v Vmx s Vmx

0.00
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6

1/s
 Representación s -s/v
(Eadie - Hofstee)
Representación Hanes
1.2

s/v
1.0

0.8

0.6

s 1 Km
0.4
 s
-Km v Vmx Vmx
0.2

0.0
-20 0 20 40 60 80 100 120

s
 Representación de Eadie-Hofstee
Representación v/s - v
(Wong - Hanes)
Vmax

v 100

v
v   Km   Vmx
80 s

60

40

20

v/s
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Métodos de linealización para determinación
parámetros cinéticos

Método Eje Y Eje X Intercepto Intercepto Pendiente

Eje Y Eje x
Lineweaver- 1/v 1/s 1/V -1/K K/V
Burke

Hanes s/v s K/V -K 1/V

Eadie- v v/s V V/K -K

Hofstee
Definición Actividad Enzimática

 Es el número de moles de sustrato que

reaccionan para formar producto, por mol de
enzima y por unidad de tiempo. Esto supone
que la enzima está plenamente saturada con
sustrato y por tanto que la reacción se efectúa
con su máxima rapidez
 El índice de recambio muestra la eficiencia
impresionante de la catálisis enzimática
 A fin de normalizar la medición de la actividad, se ocupa el valor de
la velocidad inicial de reacción, donde eses factores son
despreciables. Así,

 dp   ds 
a  vt 0      
 dt t 0  dt t 0

 Esta velocidad inicial no se espera que sea observada en un proceso

enzimático donde, debido a los elevados tiempos de operación, es
razonable suponer que esos factores ejercerán su influencia.
Cálculo de Actividad Enzimática

 La velocidad de reacción catalizada por 0,1ml

de una dilución 1:100 de Fosfatasa Alcalina es
0,3umoles / min. de producto. ¿Cuál es su
actividad enzimática?
 0,1ml-------- 0,3umoles producto / min.
1,0ml------------3,0umoles producto / min.
dil 1:100-------------300umoles producto / min.
Respuesta: 300U/ml
Número o Índice de Recambio

 Es útil definir una constante de velocidad más

general, k cat , para describir la velocidad
limitante de cualquier reacción enzimática a
saturación
 kcat x Et= Vmáx
 V0 = k cat x Et x [S] / KM + [S];
 Kcat es una constante de velocidad de 1er
orden con unidades de tiempo-1, también
llamada Número de Recambio
 Efecto del pH en la ENZIMA

Cada enzima tiene un pH óptimo para su actividad

El pH afecta las interacciones iónicas
Efecto del pH

1. Sobre la fijación del substrato al centro activo:

- Grupos disociables de la enzima
- Grupos disociables del substrato

2. Sobre la transformación catalítica del substrato

3. Sobre la estructura de la proteína enzimática

En el efecto de la temperatura hay dos componentes:

1. Aceleración de la reacción según la ecuación

de Arrhenius

k = A exp (-Ea/RT)

2. Desnaturalización térmica de la proteína

Efecto de la temperatura en la ENZIMA
Aumento de la Desnaturación
velocidad por calor

15º 40º 75º

Temperatura

Cada enzima tiene una temperatura óptima.

ORGANISMOS TERMÓFILOS

 Son organismos que viven a altas tº y realizan

sus reacciones enzimáticas a estas altas tº
 Ejemplos son los que viven en las aguas
termales
 Es tema de investigación el aislamiento de las
enzimas de estos organismos para desarrollar
procesos industriales en condiciones más
extremas
 Coenzimas

 Las coenzimas son pequeñas moléculas

orgánicas, que se unen a la enzima.
 Las coenzimas colaboran en la reacción
enzimática recibiendo transitoriamente
algún grupo químico: H+ , OH, CH3 .
 La enzima sin la coenzima recibe el nombre
de APOENZIMA
El NAD es una coenzima aceptora de H

Sustrato
oxidado
Algunas enzimas requieren metales para
mejorar su actividad
Isoenzimas o Isozimas
 Son formas moleculares diferentes de una
misma enzima
 Catalizan la misma reacción
 Ejemplo: Lactato deshidrogenasa
 Lactato + NAD ==== Piruvato + NADH
 M4, M3H1, M2H2, M1H3 y H4
 Se diferencian por su movilidad electroforética
 Usadas en clínica: sueros normales y sueros
con alguna patología
 Así esta actividad corresponde al máximo potencial
catalítico que las enzimas poseen para un determinado
conjunto de condiciones ambientales. Luego, estas
deben ser consideradas en las expresiones matemáticas
representativas del proceso enzimático.
 Existen situaciones (sustratos heterogéneos) donde la
velocidad inicial de reacción no es representativa del real
potencial catalítico de la enzima.
 Se asume que la velocidad inicial de reacción es
proporcional a la concentración de proteína enzimática.
Inhibición enzimática
Inhibidor:
Efector que hace disminuir la actividad enzimática, a través de
interacciones con el centro activo u otros centros específicos
(alostéricos).

Esta definición excluye todos aquellos agentes que inactivan a

la enzima a través de desnaturalización de la molécula enzimática

De esta forma, habrá dos tipos de inhibidores:

I. Isostéricos: ejercen su acción sobre el centro activo

II. Alostéricos: ejercen su acción sobre otra parte de la

molécula, causando un cambio conformacional con
repercusión negativa en la actividad enzimática.
Inhibición enzimática
isostérica
Los inhibidores isostéricos pueden ser de dos tipos:

1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima libre,

con el complejo enzima-substrato o con ambos:

E+I EI

ES + I ESI

2. Inhibidor irreversible: modifica químicamente a la enzima:

E+I E’
Inhibición reversible

(a) El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre,

impidiendo la fijación del substrato: Inhibición Competitiva

(b) El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo

haga o no el substrato; el inhibidor, por tanto, no impide la
fijación del substrato a la enzima, pero sí impide la acción
catalítica: Inhibición No Competitiva

(c) El inhibidor se fija únicamente al complejo enzima-substrato

una vez formado, impidiendo la acción catalítica; este tipo
se conoce como Inhibición Anticompetitiva
Inhibición Competitiva
Inhibidores Competitivos

 Compiten con el sustrato por el sitio

activo de la enzima
 Se une solo a la enzima libre
 V máx no se altera y K M cambia
 Inhibición competitiva

Al aumentar la cantidad
de SUSTRATO el
inhibidor competitivo es
desplazado y se forma
producto
 S
E ES E+P
I
Se define una constante de [E] [I]
equilibrio de disociación del Ki =
EI inhibidor: [EI]

Características:
- Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente exclusivas
- A muy altas concentraciones de substrato desaparece la inhibición
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un análogo químico del
substrato.
- El inhibidor es tan específico como el substrato
En condiciones de equilibrio rápido, llamando y a la concentración
del complejo EI, para la inhibición competitiva obtenemos el siste-
ma de ecuaciones

(e0  x  y ) s
Km 
x De donde
(e0  x  y )i
Ki 
y Vmx s
v
Que resuelto para x nos da  i 
e0 s Km  1    s
x  Ki 
 i 
Km  1    s
 Ki 
Por tanto, en la inhibición competitiva,

1. El efecto cinético del inhibidor es el aumento aparente de la

Km, que aparece multiplicada por el factor (1 + i/Ki)

2. La Vmax no aparece modificada; para concentraciones muy

altas del substrato, v = Vmax, igual que en ausencia de inhibidor

3. Cuanto más pequeño sea el valor de Ki mayor será la potencia

del inhibidor competitivo.
 Sin inhibidor

Con inhibidor

El inhibidor competitivo
aumenta la Km

Km Km
Sin con
inhibidor inhibidor
Inhibición competitiva - Representación recíproca doble

0.07
1/v
0.06

0.05

0.04

0.03
1/Vmax
0.02

-1/Km 0.01

1/s
0.00
-0.3 -0.2 -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

-1/(Km(1 + i/Ki))
Ejemplo Inhibidor Competitivo

 Ácido succínico + FAD == ácido

fumárico + FADH2
 El inhibidor competitivo es el ácido
malónico
 Es un análogo estructuralmente
parecido al ácido succínico
Ácido Fólico y Sulfanilamida
 La sulfanilamida es un análogo estructural
del ácido p - aminobenzoico (PABA)
 PABA es el punto de partida para la síntesis
de ácido fólico en las bacterias
 El ácido fólico es una vitamina esencial para
la proliferación (división) bacteriana
 Sulfanilamida se usa en el tratamiento
algunas infecciones
Metotrexato y Dihidrofolato
 El ácido fólico en sus formas de dihidro y
tetrahidrofolato es coenzima de la reacción
catalizada por la dihidrofolato reductasa
 Esta reacción es parte del metabolismo de
los nucleótidos para la síntesis de DNA
 Metotrexato se usa en la terapia de algunos
cánceres, inhibiendo la síntesis de DNA
 Inhibidor competitivo
su estructura es similar a la del sustrato

No se forma producto
Inhibición No Competitiva
Inhibidor No Competitivo

 Se une a un lugar diferente del sitio

activo la enzima
 Se une a la enzima libre y también al
complejo enzima-sustrato
 Por acción del inhibidor disminuye la Vm
pero el valor de Km no se altera
Inhibición NO competitiva
 Inhibidor NO competitivo
El inhibidor NO competitivo se une a la enzima en un
sitio diferente del sitio activo
 S
E ES E+P
I I
Inhibición
S No Competitiva

EI ESI

El inhibidor se fija indistintamente a la enzima libre E

y al complejo enzima-substrato ES; ni el complejo EI
ni el complejo ESI son productivos
 Inhibición
Anticompetitiva o
Incompetitiva
Inhibidor Incompetitivo
En este tipo de inhibición el inhibidor se enlaza al centro
activo pero solo después de que el sustrato lo haya hecho y,
por tanto, inhibidor y sustrato no compiten. De esta manera,
aunque todo el sustrato esté saturando la enzima y toda la
enzima esté como complejo ES, el inhibidor puede
enlazarse produciendo un complejo inactivo ESI.

Como I solo se une a ES estimula la formación de ES y, por

tanto, incrementa la unión del sustrato a la enzima,
disminuyendo Km . Sin embargo, el complejo ESI no
conduce a productos y Vm disminuye.
Inhibidor Incompetitivo

 Se une a un lugar diferente del sitio

activo de la enzima
 Se une sólo al complejo enzima-sustrato
 Los efectos que tiene: disminuye el valor
de Km y también el de Vmáx
 S
E ES E+P
I
Inhibición
Anticompetitiva
ESI

El inhibidor sólo puede fijarse al complejo ES;

el complejo ESI no es productivo
 Determinación de parámetros cinéticos de
inhibición

Modelo Kap Vap

Inh comp Km(1+i/Ki) Vm

Inh no comp total Km Vm/(1+i/Ki)

Inh anticomp Km/(1+i/Ki) Vm/(1+i/Ki)

Inhibición Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo
químico de la enzima, modificándola covalentemente

- Su acción no se describe por una constante de equilibrio Ki,

sino por una constante de velocidad ki:

E+I E’
- A diferencia de la inhibición reversible, el efecto de los
inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuación
del inhibidor.

- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente

tóxicos.
Inhibidores Irreversibles

 Producen inactivación permanente de la

actividad enzimática
 Se interfiere con el normal desarrollo de
una reacción o vía metabólica
 Ejemplos: p-cloromercuribenzoato,
yodoacetato, diisopropilfluorfosfato
Algunos tipos de inhibidores irreversibles

1. Reactivos de grupos -SH

2. Organofosfóricos

3. Ligandos de metales

4. Metales pesados
Inhibición enzimática
alosterica
Enzimas Alostéricas
 Son enzimas cuya estructura proteica está formada
de varias subunidades
 No se rigen por la cinética de M - M
 Además del sitio o centro activo tienen sitios
alostéricos o de regulación
 Sitio activo/sustratos;
 Sitio alostérico/moduladores o reguladores
 La relación entre la velocidad de reacción y la
concentración de sustrato sigue cinética sigmoídea
 Enzimas alostéricas
 Las enzimas alostéricas
presentan estructura
cuaternaria.
 Tienen diferentes sitios
activos, unen mas de una
molécula de sustrato
 La unión del sustrato es
cooperativa
 la curva de velocidad
presenta una forma
sigmoidal
Concepto de Cooperatividad
 La unión de los sustratos al sitio activo de
una subunidad produce un cambio
conformacional que por contacto físico se
transmite a las subunidades vecinas,
facilitando las interacciones
 Modelos de unión: secuencial y concertado
 Ejemplos: unión Hb-O2, enzimas alostéricas
y sus sustratos
Moduladores Alostéricos

 También reciben el nombre de efectores

y pueden ser positivos o negativos
 Se unen al sitio alostérico que puede
estar en la misma subunidad que tiene
al sitio activo o en las subunidades
regulatorias
 Su unión produce un cambio
conformacional que afecta al sitio activo
Aspartato Transcarbamilasa

 Ác L-asp + Carbamil-P === Carbamil-

asp + Pi . Primera reacción en la síntesis
de pirimidinas
 Efector positivo: CTP
Efector negativo: ATP
 Tiene dos subunidades catalíticas para
los sustratos y tres subunidades
regulatorias para los efectores
RESUMEN

 Las enzimas son proteínas que catalizan

las reacciones biológicas
 Presentan especificidad por su sustrato
 Cada enzima presenta dos parámetros
importantes Vmax (saturación de la
enzima) y la Km (medida de la afinidad
por el sustrato)
RESUMEN

 La actividad enzimática puede ser

inhibida, por inhibidores competitivos
(similares al sustrato) o por inhibidores
no competitivos.
 La temperatura y el pH afectan a la
enzima en su actividad catalítica.
 Algunas enzimas requieren de
coenzimas y/o cofactores para su
actividad.