Biología Celular y Molecular

Departamento de Bioquímica

Enzimas

Carlos Robello
Recordatorio: Proteínas
 Enzimas

A. Propiedades generales de las enzimas

B. Principios fundamentales de su acción catalítica

C. Introducción a la cinética enzimática

D. Mecanismos de acción enzimáticos

E. Enzimas reguladoras
 Enzimas

A. Propiedades generales de las enzimas

B. Principios fundamentales de su acción catalítica

C. Introducción a la cinética enzimática

D. Mecanismos de acción enzimáticos

E. Enzimas reguladoras
A. Propiedades generales de las enzimas (I)

1. Son los catalizadores de las reacciones

químicas de los sistemas biológicos

2. Tienen gran poder catalítico

3. Poseen un elevado grado de especificidad

de sustrato

4. Funcionan en soluciones acuosas en

condiciones suaves de pH y temperatura
A. Propiedades generales de las enzimas (II)

5. La mayoría de las enzimas son proteínas:

• La función depende de la integridad de la

conformación proteica nativa

• Existen enzimas que son proteínas simples y otras

que requieren componentes químicos adicionales:

- Cofactores: - iones inorgánicos

- complejos orgánicos
coenzimas
grupos prostéticos

• Holoenzima / Apoenzima
A. Propiedades generales de las enzimas (III)

6. Las enzimas se clasifican según la reacción

catalizada:
• Nomenclatura:
- Número clasificatorio de 4 dígitos (E.C.)
- Nombre sistemático
- Nombre trivial

ATP + D-Glucosa ADP + D-Glucosa-fosfato

Número clasificatorio: E.C. 2.7.1.1.

2. Clase: Transferasa
7. Subclase: Fosfotransferasa
1. Fosfotransferasas con OH como aceptor
1. D-glucosa como aceptor del fosfato
Nombre sistemático: ATP:glucosa fosfotransferasa
Nombre trivial: hexoquinasa
 Enzimas

A. Propiedades generales de las enzimas

B. Principios fundamentales de su acción catalítica

C. Introducción a la cinética enzimática

D. Mecanismos de acción enzimáticos

E. Enzimas reguladores
B. Principios fundamentales de la acción
catalítica de las enzimas
¿ cómo funcionan las enzimas ?

• En condiciones fisiológicas las reacciones sin

catalizar tienden a ser lentas (estabilidad de
biomoléculas)

• Muchas reacciones bioquímicas suponen

situaciones poco probables

• Una enzima soluciona estos problemas

proporcionando un ambiente tridimensional
favorable a la reacción (sitio activo)
• El rasgo dis+n+vo de una reacción
enzimá+ca es que +ene lugar dentro de
un pequeño lugar de la enzima:
el si+o ac+vo
• La molécula fijada en el si+o ac+vo, sobre la que actúa
la enzima, se denomina sustrato, al que se unen
residuos de unión o de catálisis
 Las enzimas alteran las velocidades de reacción
pero no los equilibrios

(A) S P

(B) E + S ES EP E+P

(A) (B)
Las velocidades de reacción y los equilibrios
tienen definiciones termodinámicas precisas

• Equilibrio de reacción depende ΔG’o

• Velocidad de reacción depende de ΔG‡

[P]
S P Keq’ = ΔG’o = - RT ln Keq’
[S]

KT
V = k [S] k= e - ΔG‡ / RT
h
K = constante de Boltzmann
h = constante de Planck
Para que una enzima catalice una reacción su
si1o ac1vo ha de ser complementario al
estado de transición de la reacción
(Linus Pauling, 1946)
Las interacciones débiles entre enzima y sustrato
son óptimas en el estado de transición
En el estado de transición las interacciones entre la enzima y
el sustrato son óptimas
 La energía de fijación entre enzima y sustrato
proporciona especificidad de reacción y catálisis
Grupos catalíticos específicos contribuyen a la
catálisis
 Enzimas

A. Propiedades generales de las enzimas

B. Principios fundamentales de su acción catalítica

C. Introducción a la cinética enzimática

D. Mecanismos de acción enzimáticos

E. Enzimas reguladores
 El modelo de Michaelis-Menten (1913)

Leonor Michaelis Maud Menten

Postularon que la enzima se combina en primer

lugar con el sustrato, de forma reversible
El complejo se descompone en una reacción más
lenta, dando lugar al producto y enzima libre
La concentración de sustrato afecta la velocidad
de reacción catalizada por enzimas
Cinética del estado estacionario
Cinética del estado estacionario
La relación entre concentración de sustrato y
velocidad de reacción enzimática puede
expresarse de manera cuantitativa

Ecuación de Michaelis - Menten

Ecuación de Lineweaver -Burk
Km y Vmax son característicos para cada pareja
enzima-sustrato
El significado de Km y Vmax es único para
cada enzima

• El significado real de Km depende del mecanismo

de reacción
Si k2 es la limitante de reacción entonces
Km = k-1/k1 = Ks (o KD de ES)

• La Vmax de enzimas michaelianas es equivalente

a k2 [ET]
Si k2 es la limitante de reacción entonces
k2 = kcat o No de recambio
El Nº de recambio se define para una
unidad de tiempo definida, como el
número de moléculas de sustrato
convertidas en producto por una
molécula de enzima, cuando esta enzima
está saturada
Muchas enzimas catalizan reacciones con dos
o más sustratos
 INHIBIDORES REVERSIBLES

•Sustancias que producen un cambio de la capacidad

catalítica de la enzima pero su acción no es permanente, el
complejo [EI] se disocia rápidamente.

•La inhibición reversible puede ser:

COMPETITIVA

NO COMPETITIVA

ACOMPETITIVA
 Inhibición competitiva

KM aparente es mayor
que KM real
Vmáx no se modifica
 Inhibición mixta (no-competitiva)

KM aparente es igual que

KM real
Vmáx disminuye
Inhibición no-competitiva
INHIBIDORES REVERSIBLES NO COMPETITIVOS

• La unión S-E no esta afectada, porque el I se une a la E libre

o al [ES].

• Una vez formado el [ESI] la enzima se inactiva.

• El valor de Km no se modifica, pues el S reacciona con la E

igual que en ausencia del I.

• Ejemplos: reactivos que se unen a grupos –SH de cisteína,

indispensables para algunas enzimas, iones metálicos (Cu2+,
Hg2+ y Ag2+).

• Otros I se unen a los metales componentes de la E, por

ejemplo: cianuro se une fuertemente al Fe de los citocromos,
catalasas y así bloquean su actividad.
 Inhibición acompetitiva

KM /Vmáx se mantiene
constante
1- Ácido acetilsalicílico (Aspirina): inhibidor
de la enzima ciclooxigenasa que media la producción
de prostaglandinas.

2- Penicilina (Ampicilina): inhibidor de una

enzima transpeptidasa bacteriana que participa en
la síntesis de la pared celular de las bacterias
formada por peptidoglicanos.

3- Oseltamivir (Tamiflu): inhibidor de la enzima

neuraminidasa del virus de la influenza, que participa
en el corte de residuos de ácido síalico de la célula
infectada para poder despegarse e infectar otra célula.

4- Enalapril: inhibidor de la enzima convertidora de

angiotensina que regula la presión arterial.
Efecto del pH sobre la actividad enzimática
 Enzimas

A. Propiedades generales de las enzimas

B. Principios fundamentales de su acción catalítica

C. Introducción a la cinética enzimática

D. Mecanismos de acción enzimáticos

E. Enzimas reguladores
Mecanismo de acción de la quimotripsina
Cambio conformacional de la hexoquinasa
 Enzimas

A. Propiedades generales de las enzimas

B. Principios fundamentales de su acción catalítica

C. Introducción a la cinética enzimática

D. Mecanismos de acción enzimáticos

E. Enzimas reguladoras
Enzimas Constitutivas Compartimentalización
 Enzimas reguladoras

1. Enzimas alostéricas

• Son reguladas por unión no-covalente de

moduladores

• Constituyen excepciones a muchas reglas

generales
- efecto homotrópico (positivo o negativo)
- efecto heterotrópico (positivo o negativo)

• Hay dos modelos que explican el comportamiento

cinético de las enzimas alostéricas
- modelo simétrico (Monod)
- Modelo secuencial (Koshland)
 Enzimas reguladoras

2. Modulación covalente reversible

• Fosforilación

• Adenililación

• Uridililación

• ADP-ribosilación

• Metilación
Fosforilación / defosforilación
Activación de zimógenos
Activación de zimógenos