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ENZIMAS
ENZIMAS
Sin enzima
Con enzima
• La Ea de la hidrólisis de la
urea baja de 30 a 11 kcal/mol
con la acción de las enzimas,
acelerando la reacción 1014
E+S • El aumento de temperatura
necesario para producir la
reacción no catalizada seria
de 529ºC
E+P
Tiempo de la reacción
ENZIMAS
● Las enzimas se unen a los reactivos
(sustratos) reduciendo la energía de
activación
Sustrato
Sitio activo
Enzima - Catalizador
● Tanto la enzima como el catalizador aceleran la
velocidad de una reacción química.
● Una enzima puede transformar 1000 moléculas
de sustrato/ segundo
● Las enzimas tienen 3 propiedades que los
catalizadores NO tienen
– Especificidad por el sustrato
– Se inactivan por desnaturalización
– Pueden ser reguladas
Las enzimas cumplen su papel catalítico gracias
a:
• Fijación estereoquímicamente complementaria
del substrato
• Transformación catalítica del mismo
Grupos
Número Enzyme Commission:
químicos
Enzyme EC 2.7.1.1 Enzimas
Comission Subgrupo
Grupo
EC 1.x ⇒ Oxidorreductasas
EC 2.x ⇒ Transferasas
EC 3.x ⇒ Hidrolasas
EC 4.x ⇒ Liasas
EC 5.x ⇒ Isomerasas
EC 6.x ⇒ Ligasas
Clasificación y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas
Catalizan reacciones de oxidorreducción, en que átomos de
oxigeno ó hidrogeno son trasladados entre moléculas:
AH2 + B A + BH2
Dador Aceptor
Nombre común:
Glucosa oxidasa
Clasificación y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas
Nomenclatura del subgrupo en oxidorreductasas:
EC 1.1.x - Deshidrogenasas
EC 1.2.x - Oxidasas
EC 1.3.x - Peroxidasas
EC 1.4.x - Oxigenasas
EC 1.5.x - Hidroxilasas
EC 1.6.x - Reductasas
etc.
Aplicaciones: Ensayos de diagnostico clínico (glucosa oxidasa y colesterol
oxidasa
Clasificación y nomenclatura
Grupo 2: Transferasas
Catalizan reacciones de transferencia de átomos ó
grupo de átomos entre moléculas:
A-X + B A + B-X
A-B A+B
Ejemplo
Nombre sistemático:
Histidina amonio-liasa (EC
4.3.1.3)
Nombre común:
Histidasa
Clasificación y nomenclatura
Grupo 5: Isomerasas
Catalizan reacciones de isomerización moleculares
A B
Ejemplo:
Glucosa isomerasa (EC
5.3.1.5)
Clasificación y nomenclatura
Grupo 6: Ligasas
Catalizan la unión de dos grupos químicos a expensas
de la hidrólisis de un nucleótido trifosfato (ATP, GTP, etc.).
Nombre sistémico:
G-L-glutamilo-L-cisteina:glicina
ligase
PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS
• pH
• Temperatura
• Cofactores
Efecto del pH sobre la actividad enzimática
Efecto del pH sobre la actividad enzimática
● Como la conformación de
las proteínas depende, de
sus cargas eléctricas, habrá
un pH en el cual la
conformación será la más
adecuada para la actividad
catalítica
Efecto de la temperatura sobre
actividad enzimática
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Sustrato
oxidado
Algunas enzimas requieren metales para mejorar su
actividad
CINÉTICA ENZIMÁTICA
1. La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas. Estos estudios proporcionan información
directa acerca del mecanismo de la reacción catalítica y de la
especifidad del enzima. No es necesario purificar o aislar la
enzima.
2. La medida se realiza siempre en las condiciones óptimas de pH,
temperatura, presencia de cofactores, y se utilizan concentraciones
saturantes de sustrato.
3. En estas condiciones, la velocidad de reacción observada es la
velocidad máxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien
midiendo la aparición de los productos o la desaparición de los
reactivos.
Complejo enzima-sustrato
● La cinética es el estudio de las velocidades de reacción y los
principios que permiten comprender como suceden las
reacciones.
● Michaelis y Menten (1913) realizaron estudios de
comportamiento enzimático, con un extracto de levaduras ricas
en invertasa, enzima que cataliza la hidrólisis de la sacarosa.
● Cuando la concentración de la enzima se mantuvo constante y
se hizo variar la cantidad de sustrato, lo que se observó fue una
relación hiperbólica entre la velocidad y la concentración del
sustrato:
k1 k3
E+S ES P+E
k2
Baja
concentración
de sustrato
ALTA
concentración
de sustrato
SATURACION
Una cinética hiperbólica implica un proceso saturante:
k+1 k+2
E+S ES E+P
k-1
Ecuación cinética de Michaelis-Menten
V o= Vmax[S]
Km + [S]
Relación entre Km y Vmax
Michaelis y Menten
Velocidad de la reacción (v) Vmax
Vmax/2
La Km es la concentración de sustrato
donde se obtiene la mitad de la Vmax
Vmax
Vmax/2
1/Vmax
-1/Km
Número o Índice de Recambio
● Velocidad a la cuál las moléculas de S se
convierten en producto por molécula de E,
cuando funciona a su Vmáx
● kcat = Vmáx / [E]
E+I EI
ES + I ESI
Características:
- Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente
exclusivas
- A muy altas concentraciones de substrato desaparece la
inhibición
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un análogo químico
del substrato.
- El inhibidor es tan específico como el substrato
Por tanto, en la inhibición competitiva,
1/Vmax
-1/Km
-1/(Km
Ácido Fólico y Sulfanilamida
● La sulfanilamida es un análogo estructural del
ácido p - aminobenzoico (PABA)
● PABA es el punto de partida para la síntesis de
ácido fólico en las bacterias
● El ácido fólico es una vitamina esencial para la
proliferación (división) bacteriana
● Sulfanilamida se usa en el tratamiento algunas
infecciones
Inhibidor No Competitivo
● Se une a un lugar diferente del sitio activo
la enzima
● Se une a la enzima libre y también al
complejo enzima-sustrato
● Por acción del inhibidor disminuye la Vmáx
pero el valor de Km no se altera
Inhibición NO competitiva
Inhibición acompetitiva
Inhibidor Acompetitivo
● Se une a un lugar diferente del sitio activo
de la enzima
● Se une sólo al complejo enzima-sustrato
● Los efectos que tiene: disminuye el valor de
Km y también el de Vmáx
Inhibidor Acompetitivo
El inhibidor Acompetitivo se une a la enzima en un sitio
diferente del sitio activo
Inhibición Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo
químico de la enzima, modificándola covalentemente
E+I E’
- A diferencia de la inhibición reversible, el efecto de los
inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuación
del inhibidor.
2. Organofosfóricos
3. Ligandos de metales
4. Metales pesados
Efectos de los inhibidores sobre
constantes cinéticas
* ALOSTERISMO
MODIFICACIONES
SOBRE LA ENZIMA
EXISTENTE
a) FOSFORILACIÓN
*REGULACIÓN COVALENTE
b) PROTEÓLISIS
ISOENZIMAS
MODIFICACIONES
* SÍNTESIS b) SÍNTESIS DE LA PROTEÍNA
PARA CAMBIAR LA
CANTIDAD DE EN EL RIBOSOMA
ENZIMA
ENZIMA
SITIO REGULADOR
Ligando o efector o regulador
alostérico
LA TRANSICIÓN DE T a R
VELOCIDAD
POR LA UNIÓN DE SU
SUSTRATO, TAMBIÉN
AUMENTA LA ACTIVIDAD
SUSTRATO
TRANSICIÓN DEL ESTADO T AL R EN LA HEMOGLOBINA
Eventos en la transición alostérica
Efector Unión a la enzima Inducción de
Alostérico (Sitio alostérico) Cambio conformacional
+ ó -
Transmisión a través
De la enzima hasta
El Sitio catalítico
MODIFICACIÓN EJEMPLO DE
PROTEÍNA
MODIFICADA
Fosforilación Piruvato cinasa
Acetilación Histonas
Miristilación Src
ADP-ribosilación RNA polimerasa
Farnesilación Ras Trombina
γ-Carboxilación Fibrinógeno
Sulfatación Ciclina
Ubiquitinación
Las cinasas o fosforilasas toman el Pi del ATP, al que hidrolizan
en ADP+Pi y este Pi es transferido a la enzima que es sustrato de la cinasa
ATP ADP+ Pi
CINASA o Pi
Sitio de
FOSFORILAS fosforilación
ENZIMA A Pi
DEFOSFORILA
DA ENZIMA FOSFORILADA
Pi
ACTIVA FOSFAT INACTIVA
ASA
COOH
COO-
+ NH2
PROCESAMIENTO
COOH
PRECURSOR
FORMA MADURA
(INACTIVO) O
(ACTIVA)
PROTEÍNA INMADURA
ZIMÓGENO
ISOFORMAS O ISOENZIMAS O ISOZIMAS
•Por eso, las isoenzimas son otras formas de expresar una actividad
enzimática regulada
Agricultura
Rhyzobium
Medicina
Transaminasas
Industria
Farmacéutica
Penicilina
RESUMEN
● Las enzimas son proteínas que catalizan las
reacciones biológicas
● Presentan especificidad por su sustrato
● Cada enzima presenta dos parámetros
importantes Vmax (saturación de la enzima)
y la Km (medida de la afinidad por el
sustrato)
RESUMEN
● La actividad enzimática puede ser inhibida, por
inhibidores competitivos (similares al sustrato)
o por inhibidores no competitivos.
● La temperatura y el pH afectan a la enzima en
su actividad catalítica.
● Algunas enzimas requieren de coenzimas y/o
cofactores para su actividad.
● La actividad de las enzimas es regulada a
través de mecanismos específicos como el
alosterismo o modificaciones covalentes