Purificacin de la enzima inulinasa de Kluyveromyces
marxianus a travs de dos mtodos cromatogrficos
Integrantes:
Adrin olivas
Gabriela bravo
Gerardo san Martin
Itzel Martnez
Juan Snchez
Nelly Valtierra
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
En la bsqueda de edulcorantes como alternativa en la industria de alimentos, se
encuentra la inulinasa que genera un poder edulcorante de 1.5 a 2 veces mayor que la
sacarosa.
De ah el inters por producirla y purificarla a partir de cultivos microbianos.
MARCO TERICO
Kluyveromyces marxianus Morfologa
Clula: Reproduccin por brotacin, forma
Gnero / Especie: Kluyveromyces m. esferoidal, ovoide, tamao 4-8 Mm.
(Saccharomyces vanudennii,
Kluyveromyces vanudenni. Colonia: Redonda abultada, cremosa-
parda, plana extendida.
Clasificacin: Ascomycota
Espora: Esferoidales hasta media luna.
Fermentacin: Glucosa, sacarosa, fructosa Esporas maduras glbulos lipdicos.
soporta altas temperaturas.
(Kourkoutas y col. 2002)
INULINASAS
Fructano: Polisacrido almacenado en muchas plantas que consiste en una cadena lineal
de enlaces (2-1) fructosil-fructosa.
La inulinasa es una enzima caracterizada por hidrolizar la inulina en fructosa
(prcticamente pura).
Produccin de fructosa a nivel industrial.
Se han aislado enzimas con actividad fructosidasa
(inulinasa) a partir de plantas, bacterias, hongos y levaduras
(Castillo, A., Chamy, R. 2010)
(Zavala, M.)
FUENTES VEGETALES DE INULINA HIDRLISIS ENZIMTICA DE LA
Fuente Parte
comestibl
Contenido
de slidos
Contenido de
inulina (peso
INULINA: INULINASAS
e secos hmedo)
Cebolla Bulbo 6 12 2-6 -1,2-fructan-fructanohidrolasa
Alcachofa lleva a la formacin de fructosa y glucosa
de Tubrculo 19 25 14- 19
Jerusaln
Achicoria Raz 20 25 15 20
Poro Bulbo 15 20 3 10
Ajo Bulbo 40 45 9 16
Pltano Fruto 24 26 0.3 0.7
Centeno Cereal 88 - 90 0.5 1
Cebada Cereal - 0.5 1.5
Bardana Raz 21 25 3.5 4
Yuca Raz 13 31 3 19
Salsif Raz 20 - 22 4 - 11
(Ricca y col. 2007) (Zhenming y col 2009)
Recientementes estudios sobre la Produccin de Inulina
produccin de inulinasas por
fermentacin de Kluyveromyces marxianus El extracto de levadura es la mejor
en diferentes extractos revelan a los fuente de nitrgeno para K. marxianus
mejores productores, siendo el moho para la produccin de esta enzima
Aspergillus niger y algunas levaduras (Zavala, M.).
como K. marxianus (Castillo, A., Chamy, R.
2010). La temperatura ptima para una mayor
actividad se encuentra ente 30 y 40C
Las levaduras presentan la ventaja de (Zavala, M.).
tener una mayor velocidad de
generacin celular y adaptabilidad La aireacin y la fermentacin son
sobre los mohos (Castillo, A., Chamy, R. factores crticos (Castillo, A., Chamy, R.
2010) 2010).
CML: Cultivo en medio lquido (Tovar, 2009)
CMS: Cultivo en medio solido (Tovar, 2009)
FUNDAMENTO DE TCNICAS
CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO
En unas condiciones determinadas sern
retenidas en la columna las muestras que
contengan una carga complementaria a la
de la matriz del gel, siendo eludidas las
restantes.
Para eluir las muestras retenidas se puede
variar la carga inica del solvente o su pH
de forma que se alcance el p.i. de la
muestra de inters o el de la matriz,
neutralizando de este modo la fuerza que FASES DEL INTERCAMBIO IONICO
retiene a la muestra en la columna.
[Link]
ANTECEDENTES
Se han publicado diferentes trabajos
sobre la purificacin de la inulinasa de
K. marxianus por CII.
Snyder y Phaff (1960) emplearon
este mtodo.
Rouwenhorts et. al. (1990)
encontraron que que la CII fue
suficiente para purificar la enzima
intracelular, pero una etapa
adicional de filtracin en gel fue
necesaria para la purificacin de la FASES DEL INTERCAMBIO IONICO
enzima extracelular.
CROMATOGRAFA POR FIJACIN EN GEL
Principio
No requiere la unin de la protena, se reduce
la posibilidad de perder o inactivar la enzima.
Separa las protenas de acuerdo a su tamao.
Eleccin de matriz
a) Tamao de la protena (si no se conoce se
utiliza una matriz amplia)
b) Velocidad de flujo (Flujo rpido proceso
rpido)
Solucin amortiguadora
a) Preservar la actividad de la protena
b) Impedir interacciones especficas protena
protena, protena matriz. Strayer, 2007
ELEMENTOS DE
BIOSEGURIDAD 1
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Acceso - smbolo
Proteccin personal
Procedimientos
Zonas de trabajo del
laboratorio
Diseo e instalaciones
del laboratorio
(OMS, 2005)
REFERENCIAS
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