FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERAS: MEDICINA HUMANA Y ENFERMERÍA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

CURSO : BIOQUÍMICA
N° MESA :1
PROFESORA : Mercedes del Pilar Palomino
GRUPO : 3F - 3F2

INFORME DE PRÁCTICA

PRÁCTICA N°: 11
TÍTULO: DETERMINACIÓN DE CONCENTRACIÓN EN SUERO, TRIGLICÉRIDOS,
COLESTEROL HDL- C, LDL-C y VLDL-C

INTEGRANTES:

Apellidos Nombre N° de mesa Porcentaje de

participación

Arellano Huamani Sonia Nilva 03 100 %

Bejarano Gálvez Claudia Natalia 03 100 %

Parvina Guillén Arelly Eva 03 100 %

Román Portal Marlon Antonio 03 100 %

Romero Cieza Juan Antonio 03 100 %

HORARIO DE PRÁCTICA

FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: 15 de febrero de 2024

FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: 14 de febrero de 2024

LIMA, PERÚ
2024 - 0

1
 ÍNDICE

Página

I. INTRODUCCIÓN .................................................................... ¡Error! Marcador no definido.

II. OBJETIVOS .......................................................................... ¡Error! Marcador no definido.

III. MATERIALES Y MÉTODOS ................................................ ¡Error! Marcador no definido.

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL................................... ¡Error! Marcador no definido.

Determinación de colesterol total ..........................................¡Error! Marcador no definido.

Determinación de la concentración sérica de triglicéridos ..... ¡Error! Marcador no definido.

Determinación la concentración sérica de HDL-colesterol .... ¡Error! Marcador no definido.

V. RESULTADOS...................................................................... ¡Error! Marcador no definido.

VI. DISCUSIÓN......................................................................................................................10
.................................................................................................. ¡Error! Marcador no definido.

VII. CONCLUSIONES............................................................................................................10
.................................................................................................. ¡Error! Marcador no definido.

VII. RECOMENDACIONES...................................................................................................10
.................................................................................................. ¡Error! Marcador no definido.

VII. BIBLIOGRAFIAS............................................................................................................10
.................................................................................................. ¡Error! Marcador no definido.

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 I. INTRODUCCIÓN

II. OBJETIVOS

● Determinar los parámetros que conforman parte del perfil lipídico

● Interpretar los valores de los parámetros del perfil lipídico de acuerdo con
valores de referencia.

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III. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1 Materiales en la mesa de los estudiantes:

10 tubos de ensayo 13 x 100nm

1 gradilla

03 pipetas volumétrica de 5 ml

01 piseta con agua destilada

03 Propipeta

Temporizador

3.2 Materiales en la mesa central de la profesora.

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 Baño María 37 °C

1 Pipeta automática 100 - 1000

µL

1 pipeta automática 0.5 - 10 µL

Punteras descartables para

micropipetas

Cubetas de polietileno para

espectrofotómetro

5
 01 centrifuga

01 espectrofotómetro

Reactivo de colesterol HDL

precipitante

1 kit de triglicérido
(Estándar triglicéridos y reactivo
enzimático)

1 kit de colesterol
(Estándar colesterol y reactivo
enzimático)

01 suero comercial de
2ml Valtrol - N

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3.2 MÉTODO:

Métodos de determinación de colesterol - Colesterol Total (CHOD –PAP)

Fundamento del Método:

El colesterol se determina por acción de las enzimas Colesterol ester hidrolasa y
Colesterol oxidasa. La primera libera el colesterol de los ésteres de colesterol, y
la segunda oxida el colesterol libre produciéndose peróxido de hidrógeno, el cual
en presencia de la enzima peroxidasa reacciona con el sistema cromogénico
dando origen a un compuesto coloreado que absorbe a 505 nm.
Las reacciones que se producen son las siguientes:

Métodos de determinación de triglicéridos - TRIGLICÉRIDOS (GPO – PAP)

Fundamento del Método:

Los triglicéridos son hidrolizados por una lipasa específica liberando ácidos
grasos y glicerol. El glicerol es fosforilado por la enzima gliceroquinasa y
posteriormente, el glicerol-1-fosfato es oxidado a dihidroxiacetona fosfato por la
enzima glicerol-fosfato oxidasa, generándose peróxido de hidrógeno.
Posteriormente, en una reacción del tipo Trinder, el peróxido de hidrógeno
reacciona con 4- Aminoantipirina y el ácido 3,5-Dicloro-2-Hidroxi-bencensulfónico
para producir por medio de la enzima peroxidasa un compuesto coloreado en
cantidad proporcional a la concentración de triglicéridos presente en la muestra,
midiéndose la absorbancia a 520 nm.
Las reacciones que se producen son las siguientes:

7
 Métodos de determinación de Colesterol HDL

Fundamento del Método:

Precipitación selectivamente las lipoproteínas LDL y VLDL, quedando las HDL

en el sobrenadante.
El HDL-Colesterol del sobrenadante se determina por acción de las enzimas
Colesterol esterasa y Colesterol oxidasa. La primera libera el colesterol de los
ésteres de colesterol, y la segunda oxida el colesterol libre produciéndose
peróxido de hidrógeno, el cual en presencia de la enzima peroxidasa reacciona
con el sistema cromogénico dando origen a un compuesto coloreado que
absorbe a 505 nm.

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

A continuación, se describe las determinaciones:

a. Determinación la concentración sérica de colesterol

1. Se emplean 3 tubos de ensayo de 13 x 100 (blanco, estándar y muestra
problema)
2. Se coloca solo 10μL de calibrador al tubo estándar al tubo estándar y 10μL
de muestra al tubo muestra problema al tubo de muestra.

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 3. Luego a cada tubo se le agrega 1mL de reactivo (colesterol),
4. Después de este procedimiento, se mezcla y se incuba en baño maría por 5
minutos a 37°C, pasado el tiempo, se lleva al espectrofotómetro en cubetas
de polietileno a una lectura de 505nm, para luego registrar los resultados y
hallar la absorbancia y concentración del estándar del colesterol e
identificar si se encuentran en valores normales.

Tabla 1. Cantidades de sustancias que lleva cada tubo de ensayo

b. Determinación la concentración sérica de triglicéridos:

1. Se emplean 3 tubos de ensayo (blanco, estándar y muestra problema)

2. Agrega solo 10μL de calibrador al tubo estándar y 10μL de muestra al
tubo muestra problema.
3. A cada tubo se le agrega 1mL de reactivo (triglicérido).
4. Después de este procedimiento, se mezcla y se incuba en baño maría por
5 minutos a 37°C,
5. Se lleva al espectrofotómetro en cubetas de polietileno a una lectura de
520nm.
6. Luego registrar los resultados y hallar la absorbancia y concentración del
estándar de los triglicéridos e identificar si se encuentran en valores
normales.

Tabla 2. Cantidades de sustancias que lleva cada tubo de ensayo

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c. Determinación la concentración sérica de HDL-colesterol
Precipitación de lipoproteínas de baja densidad (VLDL-c y LDL-c)
TÉCNICA
1. Adicionar500 µL del reactivo precipitante en 1 tubo de ensayo
de 13 x 100
2. Adicionar 200 µL de suero
3. Mezclar (VORTEX) y incubar por 15 min a TA.
4. Centrifugar a 3000 rpm por 15 min, o por 3 min a 10000 rpm

Determinación de la concentración de HDL, a partir del sobrenadante. Para ello,

se usará el reactivo de trabajo de colesterol, lo que varía es la concentración del
estándar.
1. Se emplean 3 tubos de ensayo de 13 x 100 (blanco, estándar y muestra
problema)

10
2. Se coloca solo 10μL de calibrador al tubo estándar y 10μL de muestra al tubo
muestra problema.
3. Adicionar500 µL del reactivo precipitante

Tabla 3. Cantidades de sustancias que lleva cada tubo de ensayo

d. Estimación de colesterol LDL por la fórmula de Friedewald

El principio de esta estimación se basa en consideraciones teóricas. Debido a

que la VLDL transporta casi la totalidad de triglicéridos plasmáticos, el
colesterol asociado a VLDL se puede estimar razonablemente de la
proporción que existe de triglicéridos y colesterol en la molécula de VLDL, es
decir la relación de triglicéridos con respecto a colesterol (5:1). Teniendo
como fórmula:

Colesterol LDL = Colesterol Total – (Colesterol HDL + Colesterol VLDL)

Dónde: Colesterol VLDL = Triglicéridos/5

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IV. RESULTADOS

Luego de hallar los valores de absorbancia de la prueba para colesterol y

triglicéridos y HDL realizamos lo cálculos necesarios para obtener los
factores de calibración.
● Determinación de la concentración de colesterol total
Concentración de estándar: 200 mg/dl
Abs. del estándar: 1.244
Abs de la muestra problema: 0.733
Concentración de la muestra problema: ¿?

Remplazar:
Factor de calibracion = × 0.405
1.244

Factor de calibracion = 161

𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶. Colesterol de muestra problema= 161 x 0,733 = 118 mg/dL

Deseable: ≤ 200 mg/dL

Alto: 200-237 mg/dL
Muy alto: más de 240 mg/dL

● Determinación de la concentración sérica de triglicéridos:

Concentración de estándar: 200 mg/dl

Abs. del estándar: 0.301
Abs de la muestra problema: 0.160
Concentración de la muestra problema: ¿?

Remplazar:
Factor de calibracion =
0.301

Factor de calibracion = 664.5

𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶. Triglicéridos de la mx. prob (mg/dl) = 664.5 x 0,160= 106.3 mg/dL

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● Determinar la concentración sérica de HDL-colesterol.

Concentración del estándar: 75.5 mg/dL

Absorbancia del estándar: 1,161
Absorbancia de la Muestra problema: 0.234
Concentración de la Muestra problema: X

Remplazar:
Factor de calibracion = 76.5
1.161

Factor de calibracion = 65.89

𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶. HDL- 𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶 de muestra problema= 65.89 x 0,234 = 15.41 mg/dL

Intervalos Referenciales:

• Determinar La Concentración Sérica De - LDL Colesterol

UTILIZANDO EL MÉTODO DE FRIEDEWARD

Datos:
• Colesterol Total : 118 mg/dL
• Triglicéridos : 106.3 mg/dL
• HDL-c : 15.41 mg/dl
• LDL-c : ¿?
• VLDL-c : ¿?

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 𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇
𝑉𝑉𝑉𝑉𝑉𝑉𝑉𝑉 − 𝑐𝑐 = = ⋯ 𝑚𝑚𝑚𝑚/𝑑𝑑𝑑𝑑
5

106.3
𝑉𝑉𝑉𝑉𝐷𝐷𝐿𝐿 − 𝑐𝑐 = = 21.26 𝑚𝑚𝑚𝑚/𝑑𝑑𝑑𝑑
5

LDL-C (mg/dL)= COLESTEROL TOTAL(mg/dL)- HDL-C(mg/dL)–VLDL-

Colesterol

LDL-C (mg/dL) = 118 mg/dl - 15.41 mg/dl – 21.26 mg/dl -

LDL-C (mg/dL) = 81.33 mg/dl

RESULTADO FINAL:

• Colesterol Total : 118 mg/dL NORMAL

• Triglicéridos : 106.3 mg/dL NORMAL
• HDL-c : 15.41 mg/dl DISMINUIDO
• LDL-c : 81.33 mg/dl NORMAL
• VLDL-c : 21.26 mg/dl NORMAL

HDL-c : mayor a 45 mg/dL

LDL-c: menor a 130 mg/dL
VLDL-c: menor 30 mg/dL

V. DISCUSIÓN

En la práctica realizada se encontraron valores de colesterol dentro de los

valores de referencia lo que indica un buen estado de salud del paciente, al
igual que el de los analizados por las demás mesas del laboratorio, sin
embargo, hubo diferencias en los valores, no tan significativas, pero los
resultados de colesterol y triglicéridos están dentro de los valores normales.
(4)

14
 Se determinó la concentración de HDL-c en muestras de suero del paciente
es de 15.41 mg/dl siendo los valores promedio de HDL-c de mayor a 45
mg/dl. Un nivel bajo de colesterol HDL es una anomalía lipídica muy
frecuente y es uno de los factores de riesgo es cardiovascular, reducen el
HDL la enfermedad autoinmune como la artritis reumatoidea y a otros
trastornos inflamatorios articulares y el consumo de algunos medicamentos.
(5)

Los valores estimados por las fórmulas de Friedewald, Los métodos de

laboratorio usados son importantes al evaluar cuales pueden ser los valores
de perfil lipídico en especies con patrón HDL. En humanos, una especie
LDL, el método de Friedewald es ampliamente utilizado en los laboratorios
clínicos, considerándose como el método de referencia. (6)

VI. CONCLUSIONES

● Entonces según los resultados, llegamos a la conclusión que el colesterol

y los triglicéridos se encuentran en sus valores normales, presentando un
estado óptimo. Las lipoproteínas son importantes para el transporte de
colesterol y triglicéridos en la sangre, cada uno tiene un tipo de
lipoproteína preferencial, pero esto va depender de las propiedades que
posean por ejemplo de la densidad.
● Si en caso se obtiene una dislipidemia esto es causado por el incremento
de colesterol total y triglicéridos con la disminución del HDL-C. en la
practica el HDL no salió con valor bajo al valor referencial. Cuando ocurre
una alteración en el transporte de lípidos por las lipoproteínas es de suma
importancia, pues este va desempeñar un papel importante, ya que se
puede desarrollar lesiones ateroscleróticas
.

VII. RECOMENDACIONES

● Rotular clara y específicamente los tubos.

● Usar las puntas adecuadas para cada pipeta, no forzarlas
● Tener cuidado con el pipeteo, llevar la pipeta hasta el fondo de los tubos
para asegurar que se mezclen las sustancias y no solo se queden en las
paredes del tubo
● Tener mucha concentración al momento de usar los reactivos, para evitar
alteraciones en los resultados, ya que cada reactivo, y estándar son
específicos para cada prueba.
● De preferencia llevar todo el kit de prueba a la mesa, no frasco, por frasco.
● Después de centrifugar, el sobrenadante debe ser claro.

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 ● La fórmula para el cálculo del LDL-Colesterol es válida sólo en muestras
con concentraciones de triglicéridos inferior a 1000 mg/dl.

IX. REFERENCIAS
1. P´p´p
2. P+p+
3. opó
4. Ninatanta Ortiz J, Romaní Romaní F. Índice triglicéridos/colesterol de alta
densidad y perfil lipídico en adolescentes escolares de una región andina del
Perú. An Fac Med (Lima Peru : 1990) [Internet]. 2018;79(4):301. Disponible
en: http://dx.doi.org/10.15381/anales.v79i4.15634

5. Rodwell V, Bender David, Botham K, Kennelly P, Weil A. (2018). Harper

Bioquímica Ilustrada. Ed. McGraw Hill, 31 ed.

6. Investigación RS. Clasificación de las dislipidemias, una revisión bibliográfica

[Internet]. ▷ RSI - Revista Sanitaria de Investigación. 2021 [citado el 16 de febrero de
2024]. Disponible en: https://revistasanitariadeinvestigacion.com/clasificacion-de-las-
dislipidemias-una-revi

7.

VIII. ANEXO

Clasificación de Fredrickson

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