Determinación de colesterol total mediante

el método CHOD-POD

Carrera: Química y Farmacia

Talca, 13 de Mayo, 2022

 INTRODUCCIÓN

‘’El colesterol es una sustancia cerosa y parecida a la grasa que se encuentra en todas las
células de su cuerpo. Su cuerpo necesita algo de colesterol para producir hormonas, vitamina
D y sustancias que le ayuden a digerir los alimentos’’ (Colesterol: MedlinePlus en español,
2020) “el colesterol forma parte de las membranas plasmáticas de las células eucariotas
siendo un componente esencial para su estabilidad estructural y funcional” (Fundamentos de
bioquímica metabólica, s. f.).

Fig. 1. Estructura química del colesterol. Tomado de Colesterol: Función Biológica e

implicaciones médicas. Por Maldonado, O., et al. 2012.

Es una molécula indispensable para la vida, el cual desempeña funciones estructurales y

metabólicas que son vitales para el ser humano.
Existen dos fuentes de donde proviene el colesterol, vía endógena y exógena. La fuente
endógena proviene del organismo, alcanzando un 50% del colesterol que se requiere el
cuerpo. Por otro lado, la vía exógena proviene de la dieta, consumo de alimentos de origen
animal principalmente, siendo absorbida la mitad de ello por las células del intestino
delgado.
La determinación del colesterol es una de las herramientas más importantes para el
diagnóstico y clasificación de lipemias. El aumento de colesterol es una de los principales
factores de riesgo cardiovascular.
Para determinar el colesterol total en este práctico usaremos el método CHOD-POD, el
colesterol presente generará una muestra coloreada donde su coloración dependerá de la
concentración de colesterol presente en las muestras que analizaremos. Este método consta de
tres etapas:
 ● 1° etapa: Hidrólisis de los ésteres de colesterol mediante colesterolasas, donde se
forma colesterol y ácidos grasos.
● 2° etapa: Oxidación mediante colesterol oxidasa como resultado se obtiene
4-colestenona y peróxido de hidrógeno.
● 3° etapa: Reducción del peróxido de hidrógeno formado anteriormente mediante una
peroxidasa obtenemos como resultado final quinonimina el cuál es el producto
coloreado y agua.

OBJETIVOS

● Determinar la concentración de colesterol en suero, mediante un método

espectrofotométrico
● Comparar los valores obtenidos con los rangos fisiológicos para verificar el método
● Determinar de forma cualitativa la presencia de colesterol por el método de
CHOD-POD.
 DESARROLLO

En clínica existen diversos métodos para determinar colesterol en una muestra; el método
directo, el método de Friedewald, el método de CHOD-POD, etc.

En el método directo: “Un detergente específico solubiliza el colesterol de las lipoproteínas

de alta densidad (HDL), las de muy baja densidad (LDL) y los quilomicrones. Los ésteres de
colesterol son hidrolizados por la colesterolesterasa y la colesteroloxidasa mediante una
reacción que no forma color. Un segundo detergente solubiliza el colesterol de las
lipoproteínas de baja densidad de la muestra y el colesterol LDL se cuantifica
espectrofotométricamente”. (Osorio José; Uribe-Velázquez Luis, 2011)

En el método de Friedewald: “el colesterol HDL es precipitado en presencia de ácido

fosfotúngstico y determinado mediante el método enzimático-colorimétrico aplicado para la
determinación del colesterol total en la muestra” (Osorio José, Uribe-Velázquez Luis, 2011)

Método CHOD-POD

Actualmente es el método más utilizado para la determinación total de colesterol. En este

método, el colesterol presente en la muestra origina un compuesto coleorado que responde a
la siguiente reacción:

Fig. 2. Reacción de CHOD-POD. Tomado de Determinación cuantitativa de colesterol. (p.1)

por Spinreact, S.A.U (2008)

Donde la intensidad del color formado es proporcional a la concentración de colesterol

presente en la muestra, es decir, cuanto mayor es la concentración, más intenso es el color
que se forma.

Factores que pueden causar interferencia

Dentro de los factores que pueden causar una interferencia en la determinación:
● “La calibración con el patrón acuoso puede dar lugar a errores sistemáticos en
métodos automáticos” (Spinreact, 2008)
● El uso inadecuado de los instrumentos como la pipeta, esta debe estar completamente
limpia y se deben usar puntas desechables limpias para proceder, ya que puede haber
microorganismos o suciedad que interfiera en la reacción
● “Los compuestos que poseen grupos químicos que pueden reaccionar en cierto grado
con los reactivos utilizados” Santandreu, et al. (2009)
● Factores ambientales como la temperatura y la luz, “los reactivos se deben mantener
protegidos de la luz y a bajas temperaturas” (Spinreact, 2008)
● “Si existe algún deterioro en los reactivos va a existir la presencia de partículas que no
deberían estar presentes, podría existir turbidez” (Spinreact, 2008)
● También puede que la cantidad medida espectrofotómetro de absorbancia del blanco a
la longitud de onda de 505 nm sea menor a 0,26 (Spinreact, 2008)

METODOLOGÍA

1. Se rotularon las cubetas de espectrofotómetro según corresponde la muestra a analizar

2. Se pipeteó en una cubeta de espectrofotómetro: Reactivos/cubeta Blanco Estándar Muestra
Reactivo CHOD-POD 1 ml 1ml 1ml Estándar - 10 µl - Muestra - - 10 µl

3. Se mezcló por pipeteo el reactivo con la muestra correspondiente

4. Se incubó 10 min a 15-25°C 5 y se leyó la absorbancia (A) a 505 nm del estándar y la
muestra, frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 60 minutos.
 RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Valores obtenidos de absorbancia:

MUESTRAS ABSORBANCIA

Muestra 1 0,026

Muestra 2 0,192

Se realizó el siguiente cálculo:

Absorbancia muestra
—————————— x [ ] estándar
Absorbancia estándar

Fig. 3. Fórmula para calcular colesterol en la muestra. Tomado de Determinación de

colesterol. (p. 5) por Guest, s. f

Al sustituir valores:

MUESTRA 1

0,026
——— x 200 = 18,98 mg/dl
0,274

MUESTRA 2

0,192
——— x 200 = 140,15 mg/dl
0,274
De acuerdo al método actual que se utiliza para la determinación de colesterol llamada
CHOD-POD, en la muestra 1 se tiñó de un color rosado muy pálido, lo que según el método
quiere decir que la concentración de colesterol que se encuentra en la muestra es muy baja, ya
que “La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de colesterol
presente en la muestra ensayada” (Determinación de colesterol, método CHOD- POD, s. f.).
Por otra parte la muestra 2 se tiñó de un color rosa más intenso en comparación con la
muestra 1, eso quiere decir que la muestra tiene una concentración de colesterol mayor a la
muestra 1.

Al analizar la absorbancia de la muestra 1 que dio como resultado 0,026, se puede analizar
que ese valor se encuentra fuera del límite cuantificable ”El límite instrumental de
cuantificación, se puede definir como la cantidad más pequeña de un analito que se pueda
cuantificar confiablemente por el instrumento” Determinación del límite instrumental (LDI) y
límite de cuantificación instrumental (LCI) en elementos de traza subterránea, s. f.
Este límite es establecido por el método elegido, y al ser este resultado menor del rango de
trabajo no se puede realizar ningún tipo de cambio para que esta muestra sea analizada de
forma eficiente. Solo se debería recurrir como equipo de trabajo a proponer un cambio de
método, en el cual si este resultado de absorbancia de la muestra 1 se encuentre dentro de los
rangos medibles.
Debido a que la muestra no resulta ser una muestra óptima de análisis, es que el resultado del
colesterol total en la muestra 1 nos dio muy bajo obteniendo como colesterol total de 18,98
mg/dl .

En cambio al analizar la muestra 2 que dio como resultado 140,14, se puede analizar que este
valor si se encuentra dentro del límite cuantificable del método elegido. Posterior a esto con
los valores obtenidos como colesterol total de la muestra 2, podemos asumir que se encuentra
dentro de los valores normales del colesterol, ya que su resultado obtenido es menor a 200
mg/dl.

CONCLUSIÓN
El método CHOD-POD es un procedimiento que presenta un desempeño bioquímico
adecuado y de bajo costo, el cual nos permite determinar de forma precisa el colesterol total.
Podemos inferir de las muestras trabajadas que en ambas hay presencia de colesterol pero
que la muestra 1 presentó una coloración muy leve producto de la baja concentración
presente, el cual además presentó un valor de absorbancia que se escapa de los límites de
cuantificación ya que fueron valores bajos, al momento de hacer una determinación
cuantitativa del colesterol da un valor de 18,98 mg/dl siendo este un valor muy bajo en
comparación con el rango normal. En cambio la muestra 2 presenta valores que sí entran
dentro de los límites de cuantificación, al realizar la determinación cuantitativa se obtiene un
valor de colesterol de 140,14 mg/dl, pudiendo inferir que está en un rango de valor normal de
colesterol, “el colesterol total es inferior a 200 mg/dl. Se habla de hipercolesterolemia cuando
se supera este valor. Por encima de 240 mg/dl, se duplica el riesgo de sufrir un infarto”
(Rodríguez, B). La prueba de colesterol es importante, puesto que dependiendo de los valores
que ésta indique es como se puede conocer el riesgo de padecer un ataque cardíaco o un
derrame cerebral.
El tiempo y la temperatura son importantes para que se desarrollen el total de las reacciones
acopladas por las 2 enzimas (CHOD y POD), por lo que es importante que se incube por 10
minutos a 15-25°C nuestra muestra. Siendo este uno de los pasos vitales para que resulte la
determinación de nuestro método de forma correcta.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 Colesterol: MedlinePlus en español. (2020, 27 de agosto). MedlinePlus - Health
Information from the National Library of Medicine.
https://medlineplus.gov/spanish/cholesterol.html

Determinación cuantitativa de colesterol. (s. f.). Insumédica.

https://www.insumedica.cl/wp-content/uploads/2019/03/Ficha-Técnica-COLESTEROL-CHO
D-POD.pdf

Determinación de colesterol, método CHOD- POD. (s. f.). IES JUAN DE ARÉJULA
– Un paso más allá de la educación.
https://iesjuandearejula.com/wp-content/uploads/2020/12/PRACTICA-No8.pdf

Fundamentos de bioquímica metabólica. (s. f.). Google Books.

https://books.google.cl/books?id=Iw_z2TPXvZgC&pg=PA129&dq=colesterol+bio
quimica&hl=es&sa=X&ved=2ahUKEwi_8-vB8t33AhXZCLkGHWM7ByEQ
6AF6BAgKEAI#v=onepage&q=colesterol%20bioquimica&f=false

Comparación de los métodos Directo y de Friedewald para la determinación de los

niveles de colesterol LDL en el equino. (2011, enero) http://www.scielo.org.co

Santandreu, et al. Interferencias Analíticas en Pacientes Oncológicos. (2009).

Guest. (s. f.). 8 Practica Determinación de Colesterol - PDF COFFEE.COM.

pdfcoffee.com. https://pdfcoffee.com/8-practica-determinacion-de-colesterol-4-pdf-free.html

Rodríguez, B. Colesterol. https://www.sabervivirtv.com/enfermedades/colesterol

Determinación del límite de detección instrumental (LDI) y límite de cuantificación

instrumental (LCI) en elementos traza de agua subterránea. (s. f.). SciELO Bolivia- Scientific
Electronic Library Online.
http://www.scielo.org.bo/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0250-54602007000100010

Colesterol: función biológica e implicaciones médicas. (s. f.). SciELO - Scientific

Electronic Library Online.
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1870-01952012000200002