FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERAS: MEDICINA HUMANA Y ENFERMERÍA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

CURSO: Bioquímica

PROFESOR: Mercedes del Pilar Palomino

INFORME DE PRÁCTICA N 2

TÍTULO: Determinación de proteína totales y fraccionadas.

INTEGRANTES:

Apellidos Nombre N° de mesa Porcentaje de participación

Arellano Huamani Sonia Nilva 03 100 %

Bejarano Galvez Claudia Natalia 03 100 %

Parvina Guillén Arelly Eva 03 100 %

Román Portal Marlon Antonio 03 100 %

Romero Cieza Juan Antonio 03 100 %

HORARIO PRÁCTICA

FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: 11 de enero del 2024

FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: 13 de enero del 2024

LIMA – PERÚ

2024
 ÍNDICE

Página

1. INTRODUCCIÓN……………………………………………………….….3

2. OBJETIVOS………………………………………………………………..4

3. MATERIALES………………………………………………………………4

4. MÉTODOS………………………………………………………………….7

5. RESULTADOS……………………………………………………………..9

6. DISCUSIÓN………………………………………………………………..12

7. CONCLUSIONES……………………………………………………….…13

8. RECOMENDACIONES……………………………………………………14

9. REFERENCIAS…………………………………………………………….14
I. Introducción:

En el organismo humano, existen mecanismos por los cuales la célula está en contacto
directo con el medio externo para que realice sus intercambios metabólicos. Uno de estos es
la sangre que actúa como un sistema de transporte y distribución de nutrientes,
suministrando a los tejidos los nutrientes esenciales y extrayendo los productos
residuales.(6)

La sangre está formada por una solución acuosa que contiene plasma, se trata del
componente líquido de la sangre en el que están suspendidas células sanguíneas como los
glóbulos rojos o eritrocitos (Transporte de oxígeno), glóbulos blancos o leucocitos
(Defensa, combatir infecciones y asistir al proceso inmunológico; tipos: linfocitos,
monocitos, eosinófilos, basófilos y neutrófilos) y plaquetas o trombocitos (Coagulación
sanguínea). Algunos de estos componentes desempeñan importantes roles en la defensa del
organismo contras las agresiones externas y también en la reparación de tejidos
lesionados.(6).

Las proteínas plasmáticas pueden clasificarse en dos grupos: las que son sintetizadas en el
hígado (albúmina) y la inmunoglobulina (producida por linfocitos) generalmente como
parte de la respuesta inmunológica. Están presentes en todas las células y en los distintos
líquidos corporales y tienen la habilidad de fijarse a ciertos ligandos con una afinidad y
especificidad elevadas(6).

La albúmina puede fijarse de forma débil e inespecífica a cationes di y trivalentes (p. ej.
Cu+2, Fe+3), la principal proteína plasmática, siendo la mayor fracción proteica del plasma
aproximadamente el 50%, donde normalmente se encuentra a una concentración de 35 a 45
g/L, responsable del transporte de ácidos grasos hidrófobos, hormonas esteroideas,
bilirrubina y fármacos. Su principal función es servir como reserva de proteínas en el estado
de depleción nutricional y como regulador osmótico.(6)

La prueba de determinación de la concentración de albúmina es un proceso donde se

combina con el verde de bromocresol a pH ligeramente ácido, produciéndose un cambio de
color del indicador, de amarillo verdoso a verde azulado proporcional a la concentración de
albúmina presente en la muestra ensayada.(7)(8)(9)(10)

La prueba del biuret se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los
grupos NH de los enlaces peptídicos en medio básico. 1Cu2+ se acompleja con 4 NH. La
intensidad de la coloración es directamente proporcional a la cantidad de proteínas (enlaces
peptídicos). La reacción dada cuando se añade el reactivo de biuret a una solución que
contiene albumina, los iones de cobre (II) en el reactivo se coordinan con los enlaces
peptídicos de la albumina, formando un complejo de coordinación de color violeta. Este
cambio de color es una indicación de la presencia de proteínas en la muestra.(11)
II. Objetivos
● Determinar y calcular el nivel de concentración de las proteínas plasmáticas totales
en el suero sanguíneo.
● Determinar y calcular el nivel de concentración de albúmina y globulinas en el suero
sanguíneo.
● Interpretar los resultados obtenidos en la determinación de proteínas, albúminas y
globulinas.

III. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

Materiales y reactivos:

tubos de ensayo 13 x 100mm

Pipeta automática de 1000 μL

Pipeta de 20 μL

Puntas descartables para micropipetas

Gradilla
 Temporizador

Espectrofotómetro

Cubetas de polietileno

Reactivo líquido para la determinación

proteínas en suero o plasma

Reactivo líquido para la determinación

Albúmina en suero o plasma
 suero control liofilizado-normal

MÉTODOS

EXPERIMENTO N° 01: PROTEÍNA TOTAL (BIURET)

La determinación de las proteínas totales se realiza utilizando iones cúpricos que en medio
alcalino reacciona con las proteínas formando compuestos de coordinación de color
violeta, cuyo pico de máxima absorción es de 540 nm y su intensidad es proporcional a la
concentración de proteínas.

Procedimiento experimental:

1. En tres tubos de ensayo de 13x100 identificados B (Blanco), M (muestra), St (Estándar)

2. Adicionar los volúmenes en cada tubo de ensayo de acuerdo con lo descrito en la tabla
que se muestra a continuación:
B M St

Agua destilada (µL) 20 - -

Suero o plasma (µL) - 20 -

Estándar de proteínas (µL) - - 20

Reactivo EDTA/Cu (mL) 1 1 1

. Incubar durante 15 minutos a 37°C y leer en el espectrofotómetro a 540 nm.

3. Obtenidas las absorbancias a 540 nm determinar la concentración de proteínas totales

por la fórmula de factor de calibración:

Factor de calibración= Concentración del estándar

Absorbancia a 660 nm

4. Interpretar el valor obtenido de la muestra de acuerdo con los valores de referencia

EXPERIMENTO N° 02: ALBÚMINA (BCG)

La albúmina se combina con el verde de bromocresol a pH ligeramente ácido,

produciéndose un cambio de color del indicador, de amarillo verdoso a verde azulado
proporcional a la concentración de albúmina presente en la muestra ensayada.

Procedimiento experimental:
1. En tres tubos de ensayo de 13x100 identificados B (Blanco), M (muestra), ST
(Estándar)

2. Adicionar los volúmenes en cada tubo de ensayo de acuerdo con lo descrito en la tabla
que se muestra a continuación:

B M St

Suero o plasma (µL) - 10 -

Estándar de albúmina (µL) - - 10

Reactivo BCF (mL) 1 1 1

3. Colocar los tubos en una gradilla a temperatura ambiente durante 10 minutos y leer en
el espectrofotómetro a 625 nm.

4. Obtenidas las absorbancias a 540 nm determinar la concentración de proteínas totales

por la fórmula de factor de calibración:

Factor de calibración= Concentración del estándar

Absorbancia a 660 nm

5. Interpretar el valor obtenido de la muestra de acuerdo con los valores de referencia

RANGOS DE REFERENCIA
Cada laboratorio debe establecer sus propios rangos de referencia en función de la
población de pacientes. Los rangos de referencia que se enumeran a continuación
están tomados de la bibliografía existente. 3.5 a 5.0 g/dl.

IV. RESULTADOS:
Para obtener la cuantificación de proteínas totales y albúmina es necesario utilizar una
fórmula la cual arroja los resultados según los datos de cada muestra. Concentración de
proteínas totales:
Tabla 1. Fórmula usada para cuantificar Proteínas totales y albúmina

PRIMER EXPERIMENTO: Determinación de proteínas plasmáticas total por el

Método de Biuret

PROTEÍNAS Concentración Estándar = 5,6 g/dL

Tubo de Ensayo Absorbancia (Abs)

Blanco 0,014
 Estándar (St) 0,671

Muestra Problema (MP) 0,770

DONDE:
Factor de calibración= Concentración del estándar = 5,6 / (0.6 71) =8.345
Absorbancia a 540 nm
Concentración de proteínas = Absorbancia de la muestra x factor
0,770 x 8,345 = 6, 42 g/dL

INTERVALOS DE REFERENCIA (IR) PROTEÍNAS TOTALES : 6.0 – 8.3 g/dL

Aquí se puede observar que en este caso al hallar la determinación de proteínas séricas
totales salió 6,42 g/dL ,lo cuál nos indicaría que está en el rango normal.

Ya que si este resultado hubiera estado arriba del IR, podría darse una hiperproteinemia; o
caso contrario de un resultado por debajo del IR vendría a darse una hipoproteinemia.

En este caso el valor resultante se encuentra en los rangos normales y adecuados.

SEGUNDO EXPERIMENTO: Determinación de la concentración de albúmina

ALBÚMINA

Concentración Estándar = 3.12 g/dL

Tubo de Ensayo Absorbancia (Abs)

Blanco 0.014

Estándar (St) 0.557

Muestra Problema (MP) 1.008

DONDE:
Factor de calibración= Concentración del estándar = 3.12 / (0.557) =5.601
Absorbancia a 540 nm
 Concentración de proteínas = Absorbancia de la muestra x factor
1,008 x 5,601 = 5, 64 g/dL

INTERVALOS DE REFERENCIA (IR) ALBÚMINAS: 3.0 - 5 g/dL

Este sería un caso de hiperalbuminemia, ya que el resultado fue por encima del rango
normal.

Cálculo de globulinas

Globulinas = Conc. PT - Conc. Albúmina = (6.42-5.64)g/dL= 0.78 g/dL

INTERVALOS DE REFERENCIA: 2.0-3.5 g/dL (IC)

Acá resultó un nivel bajo de globulinas.

Relación albúmina/Globulina

Rango : 1.2-2.2 (IC)

R A/G = Conc. Alb/Conc Glob R A/G =5.64 g/dL/0.78 g/dl = 4.86 g/dL

El nivel resultante según el rango de R A/G ,se trata de un valor muy alto para el rango de
referencia normal.

V. DISCUSIÓN:
● Las proteínas totales en un análisis clínico representan la suma de todas las proteínas
presentes en el suero sanguíneo, incluyendo albúmina y globulinas. La medición de
proteínas totales es crucial para evaluar la salud y función del hígado, ya que el
hígado sintetiza la mayoría de las proteínas plasmáticas. Cambios en los niveles de
proteínas totales pueden indicar condiciones hepáticas, problemas nutricionales,
desórdenes de la sangre o enfermedades renales. Además, la relación entre las
proteínas totales y los diferentes tipos de proteínas en la sangre proporciona
información valiosa sobre el estado de salud y puede ser utilizado en el diagnóstico y
seguimiento de diversas enfermedades. (12)
● La cuantificación de proteínas mediante el reactivo de Biuret, se basa en la
formación de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de los enlaces
peptídicos en medio básico. 1Cu2+ se acompleja con 4NH. La intensidad de
coloración es directamente proporcional a la cantidad de proteínas (enlaces
peptídicos) y la reacción es bastante específica, de manera que pocas sustancias
interfieren. La sensibilidad del método es muy baja y sólo se recomienda para la
cuantificación de proteínas en preparados muy concentrados (por ejemplo en
suero).(13)
● En este caso obtuvimos para el primer experimento de determinación de proteínas
plasmáticas total por el Método de Biuret un valor de 6, 42 g/dL ,el cuál se
encontraría en un rango normal.
● Para el siguiente caso en el segundo experimento de determinación de la
concentración de albúmina dió un valor de 5, 64 g/dL ,el cuál se encontraría por
encima del rango normal.

Es por ello que podemos confirmar que hay hiperalbuminemia.

La "hiperalbuminemia" es una condición caracterizada por niveles altos de albúmina

en la sangre. La albúmina es la proteína más abundante en el plasma sanguíneo y
desempeña diversas funciones esenciales, como el mantenimiento de la presión
osmótica, el transporte de sustancias y la regulación del equilibrio de líquidos. (14)

Este diagnóstico apoya la posible presencia de mieloma múltiple, necrosis celular

por obstrucción tisular, hepatitis viral y/o enfermedad febril aguda.
 ● En el cálculo de globulinas se obtuvo 0.78 g/dL ,él cual vendría a llegar a un nivel
bajo del rango normal ,por lo que puede ser signo de enfermedades con punto de
afección principal en el hígado o parte de los riñones.

Las globulinas son una clase de proteínas en la sangre que incluye diversas
subclases, como las inmunoglobulinas (anticuerpos) y otras proteínas relacionadas
con la respuesta inmunológica y la defensa del organismo contra infecciones y
agentes extraños. La hiperglobulinemia puede ser causada por diferentes
condiciones, como infecciones crónicas, trastornos autoinmunes, enfermedades
hepáticas, mieloma múltiple (un tipo de cáncer de médula ósea) u otras condiciones
inflamatorias o inmunológicas. La evaluación de los niveles de globulinas, así como
de otras proteínas sanguíneas, es parte de los análisis clínicos y puede ayudar a los
médicos a diagnosticar y monitorear diversas enfermedades y trastornos. El
tratamiento de la hiperglobulinemia generalmente se centra en abordar la causa
subyacente de la elevación de globulinas y puede variar según la condición
específica del paciente. (15)

● Para el siguiente cálculo de relación albúmina/Globulina llegó a un 4.86 g/dL ,un

valor alto del rango normal.

Por lo cuál se podría llegar a correlacionar con trastornos que pueden involucrarse
por un caso de deshidratación (niveles elevados de albúmina, por falta de agua);
leucemia (producción deficiente de globulina); inmunodeficiencia, por ejemplo, VIH
o trastornos genéticos (producción deficiente de globulina); o por interacciones
farmacológicas.

Cabe resaltar que una relación A/G alterada puede indicar desequilibrios en la
síntesis hepática de proteínas, inflamación crónica, condiciones autoinmunes o
trastornos renales. Por ejemplo; un A/G bajo podría sugerir una mayor presencia de
globulinas, como en infecciones o enfermedades inflamatorias, mientras que un A/G
elevado podría asociarse con problemas hepáticos o desórdenes autoinmunes.

VI. CONCLUSIONES:
 ➢ Al obtener los resultados de cada cuantificación según lo obtenido de cada muestra
se pudo confirmar que varían los resultados reportados de manera manual (en el
espectrofotómetro) a diferencia de un equipo automatizado. Gracias a estos
experimentos de igual manera se pudieron identificar la cuantificación de proteínas
totales y albúmina. Como médicos, es importante conocer los valores de referencia y
cómo obtener estos mismos valores para reconocer el estado del paciente,
recordando que sirven únicamente como control y no como diagnóstico diferencial.
➢ Se pudo identificar la concentración de albúmina y globulinas en el VALTROL-N
Suero Control Normal a través de la fórmula dada del factor de calibración y así
identificándose en los intervalos de referencia para hallar el diagnóstico del caso.
➢ Hemos logrado interpretar los resultados obtenidos correlacionando a una búsqueda
del diagnóstico del paciente según el caso presentado.

VII. RECOMENDACIONES:

●Para ingresar al laboratorio se debe usar guantes, mascarilla y una redecilla que
luego serán desechadas antes de salir del laboratorio.
●Calibrar siempre el espectrofotómetro a una absorbancia igual a cero después de
emplear la prueba en blanco.
●Se recomienda que se tomen apuntes durante cada procedimiento que se dé para
realizar el informe de laboratorio al culminar la clase.
● Tener presente que la parte lisa de las cubetas de polietileno deben coincidir con la
posición del foco del espectrofotómetro.
●Mantener siempre el espacio donde se va a realizar el procedimiento para evitar la
contaminación de los reactivos y alteraciones en los resultados.
●Tener en cuenta el rango de la pipeta automática al momento de medir el volumen
deseado.
●Llevar el reactivo a la temperatura que se realizará el ensayo. Las pipetas a utilizar
deben estar limpias y libres de residuos para no contaminar el reactivo.
 ANEXOS

(Agregado según lo indicado en la última página del ppt del presente curso)

Anexo 1 . HIPOPROTEINEMIA déficit de proteínas

Caso del síndrome nefrótico

Anexo 2 . HIPOPROTEINEMIA déficit de proteínas

 Síndrome nefrótico

Anexo 3 . HIPERPROTEINEMIA Síntomas

Deshidratación

Anexo 4 . HIPERPROTEINEMIA altos niveles de proteínas en sangre

 Enfermedad de Addison

Anexo 5 . HIPERPROTEINEMIA altos niveles de proteínas en sangre

Cetoacidosis diabética

VIII. Referencia bibliográficas:

1. Proteínas Totales y Fraccionadas - Multilab - Qué es, precio, preparación. (s/f).
Proteínas Totales y Fraccionadas - Multilab - Qué es, precio, preparación.
Recuperado el 14 de septiembre de 2023, de

2. https://www.multilab.com.pe/examen/451/proteinas-totales-y-fraccionadas

3. Navarro, M., Salazar, J., Salazar, Y. Zarkovic, G. (2022). Manual de prácticas de

laboratorio. Bioquímica. Universidad Científica del Sur.

4. Fauci S, Braunwald E, Kasper DL, et al, eds. Harrison's Principles of Internal

Medicine. 20th ed. McGraw-Hill Education; 2018.

5. Nelson, D. L., & Cox, M. M. Lehninger Pinciples of Biochemistry (Seventh

Edition) [Libro electrónico]. W.H Freeman Macmillan Learnin;2017.

6. Determinación de proteínas totales y albúmina en pobladores de ambos sexos del

Centro Cívico La Esperanza - Trujillo durante el mes de Mayo del 2011

7. Gendler S. Uric acid. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
Toronto. Princeton 1984; 1268-1273 and 425.

8. Rodkey F L. Clin Chem 1965; 11: 478-487.

9. Webster D. Clin Chem. 1974: Acta 53: 109-115.

10. Doumas BT Clin Chem. 1971: Acta 31: 87-96.

11. Bradford MM (1976): A rapid and sensitive method for the quantitation of
microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.
Anal Biochem. 72: 248-254.

12. Google.es. [citado el 14 de enero de 2024]. Disponible en:

https://scholar.google.es/scholar?hl=es&as_sdt=0%2C5&q=determinación+de+pr
oteínas+totales+bioquímica+&btnG=#d=gs_qabs&t=1705200964220&u=%23p%
3Dqe7lQNKLQJoJ

13. Vidriales C, Luis J. Interferencias analíticas en bioquímica clinica.

Universidad de Granada. Disponible en: http://hdl.handle.net/10481/55838
14. Saucedo-Moreno Eric M., Fernández-Rivera Enrique, Ricárdez-García José
A.. Hipoalbuminemia como predictor de mortalidad en sepsis de origen
abdominal. Cir. cir. [revista en la Internet]. 2020 Ago [citado 2024 Ene 14] ;
88( 4 ): 481-484. Disponible en:
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2444-
054X2020000400481&lng=es. Epub 08-Nov-2021.
https://doi.org/10.24875/ciru.20001712.

15. Carmona MF, Eisik PJ, Coppola M, Mandrile A, Caruso V, Romero J et al .

Plasmocitosis Cutánea, reporte de caso. Rev. argent. dermatol. [Internet]. 2021
Jun [citado 2024 Ene 14] ; 102( 2 ): 41-50. Disponible en:
http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1851-
300X2021000200041&lng=es.

16. Researchgate.net. [cited 2024 Jan 14]. Available from:

https://www.researchgate.net/profile/Nyurky-
Matheus/publication/264623378_Relacion_albuminaglobulinas_plasmaticas_en_t
res_epocas_del_ano_en_vacas_raza_Carora_del_estado_Lara_Venezuela/links/53
e99e3a0cf28f342f413593/Relacion-albuminaglobulinas-plasmaticas-en-tres-
epocas-del-ano-en-vacas-raza-Carora-del-estado-Lara-Venezuela.pdf