“Año de la unidad, la paz y el desarrollo”

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

PRÁCTICA N° 3

CURSO:

Microbiología y Parasitología

ACIÓN GRAM

ESTUDIANTES:

• Argomedo Marquina Cielo Nicole

• Bardales Plasencia Anapaula Nicole
• Chavez Pajares Jeferson Joel
• Espinoza Pardo Michelly Tatiany
• Nieto Tello Claudia Andrea

DOCENTE:

DIANA VIRGINIA MORILLOS CARRASCO

TRUJILLO - PERÚ

2023
 INDICE
I. OBJETIVOS

II. MATERIALES

III. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

Pruebas bioquímicas para Staphylococcus y Streptococcus

Prueba de la catalasa

Fermentación del manitol

Prueba de la coagulasa

IV. CONCLUSIONES:

V. EVALUACIÓN

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

 I. OBJETIVOS:

1. Reconocer las características morfológicas y de cultivo de los agentes microbianosque causan

infecciones de piel: Staphylococcus, Streptococcus pyogenes y hongosdermatofitos:
Trichophyton mentagrophytes, Microsporum canis.

2. Ejecutar e interpretar las pruebas que se utilizan en la identificación de los

agentesmicrobianos que causan infecciones de pie.

II. MATERIALES:

Cultivos de dermatofitos Trichophyton mentagrophytes y Microsporum canis en 6 placas con agar

Sabouraud. (material externo)

Trichophyton mentagrophytes

Es un complejo de hongos dermatofitos que

provoca micosis superficiales.

Microsporum canis

Es un género de hongos causantes de la tiña

de la cabeza, tiña corporis, (dermatofitosis)
entre otras micosis.
 Cultivos de Streptococcus pyogenes en 6 placas con agar sangre. (material externo)

Streptococcus pyogenes

Streptococcus pyogenes o estreptococo

beta-hemolítico del grupo A o estreptococo
del grupo A, es una bacteria Gram-positiva
que crece en cadenas de cuatro a diez
células

Cultivo de Staphylococcus aureus en 6 placas con agar Manitol Salado y/o agar Sangre.
(material externo)

Staphylococcus aureus

Conocido como estafilococo áureo o

estafilococo dorado, es una bacteria
anaerobia facultativa, grampositiva,
productora de coagulasa, catalasa, inmóvil
y no esporulada

Tubos con plasma Citratado (1 mL) y 3

pipetas graduadas de 1 mL estériles.
Reactivo de peróxido de hidrógeno.
Azul de Lactofenol
KOH 20%

1 asas bacteriológicas, 1 mecheros.

6 microscopios.
Láminas portaobjetos.
 III. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:

Punto 1: Se observaron las placas de agar sangre de Staphylococcus Aureus, beta

hemolítico, colonias de color blanquecino, sus colonias reaccionaron a él. Luego se colocó un

poco de la muestra del porta objeto, para así poder observarlo en el respectivo microscopio.

Y observamos Sthaphylococcus en cadenas cortas

Punto 2: Luego observamos las placas en agar de streptococcus pyogenes como

resultado colocándolo al tras luz se observamos un alfa hemolítico, también vemos

que da lugar a colonias color blanca lo que se observa básicamente es una alfa

hemolisis y con la ayuda del microscopio, se evidencio cocos Gram positivos, en

racimos de color morado, en su pared celular expresa el antígeno grupo A.

Punto 3: Asi mismo observamos las placas de cultivo Dermatófitos: Trichophyton

rubrum y Microsporum canis, en agar sabouran la cual podemos observar sus colonias
de un color cremoso anaranjado y la parte de adentro color amarillo.
 Trichophyton rubrum

Hongo filamentoso con microconidios

piriformes(de 3-5,5 x 2-3,5 um), sesiles sobre
las hifas formando racimos. Macroconidios
muy escasos(de 40-55 x 6-7,5 um). Abundan
las clmidosporas intercalares, presencia de
hifas en raqueta y ausencia de filamentos
espirales. Crece bien en la maypria de los
medios de cultivo comunes. Suele formar dos
tipos de colonias: unas rojizas en anverso y
reverso y las otras blancas con el reverso de
color rojizo(pigmento rojo frecuente).

Microsporum canis:

Este hongo presenta colonias algodonosas o

pulvumentosas, de color blanco o parduzco. Las
macroconidas son de mayor tamaño(40-150 x 8-
15 um) que las de Trychophyton; Son
puntiagudas en ambos extremo y con pared
celular gruesa, equinulada. Son tambien
frecuentes en micelio en raqueta, las hifas
pactíneas, los órganos nodulares y las
clamisporas.
 PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA STAPHYLOCOCCUS Y STREPTOCOCCUS:

1. Diferenciamos al medio de cultivo Agar sangre

En este medio de cultivo, diferenciaremos los tipos de hemolisis que realizaran las
bacyterias Streptococcus pyogenos y Sthapylococcus aureus.

AGAR SANGRE:

Considerado un medio de cultivo para el aislamiento de una alta gama de microrganismos y para poder
observar el proceso de la hemolisis, siendo este medio de cultivo nutritivo para el crecimiento de los
microrganismos, luego debemos interpretar los resultados basándonos en las características de las
colonias formadoras y observar el proceso de hemolisis:
• Hemolisis alfa: Lisis parcial de glóbulos blancos donde observaremos un halo de color verdoso,
debido a la degradación parcial del grupo hemo y globina, siendo la primera un producto de la
formación de la biliverdina, este proceso oxidativo de la hemoglobina a metahemoglobina
evidencian una hemolisis parcial.
• Hemolisis beta: Aquí se da una lisis total de los glóbulos rojos (eritrocitos), esto se puede
evidenciar tras la formación de un halo claro brillante en torno a las colonias de los
microorganismos
• Hemolisis gamma: Ausencia de la destrucción (lisis) de los eritrocitos

PROCEDIMIENTO:

01 Procedemos a sacar una muestra de

sangre
02 Al obtener la muestra para separar el
plasma se centrifuga

03 Con una pipeta con cuidado sacamos

1 ml de plasma a un tubo
04 De la colonia de cultivo, disolvemos
en el plasma

05 Dejamos incubar de 4 – 24 horas

06 Observamos si se formó el coágulo

- “Staphylococcus aureus”

1. Considerado un beta hemolítico, porque en la imagen

podremos observar un halo de color transparente
brilloso alrededor de las colonias en forma de racimos
de uvas
2. La lisis de los glóbulos rojos donde se da la liberación de
los componentes intracelulares de eritrocitos por acción
de la esfingomielinasa presentes en la pared celular de
la bacteria quien dará inicio al proceso de hemolisis por
la ruptura de la pared celular de la bacteria.
3. Bacteria gram +
 - “Streptococcus Pyogenes”

1. Considerada un alfa hemolítico, ya que se puede

observar un halo verdoso, esto nos indica que existe
una lisis parcial de los glóbulos rojos
2. Este proceso se lleva a cabo gracias a las proteínas
presentes en este tipo de bacterias las cuales son la
estreptolisina S, O (hemolisina y leucocidina)
3. Bacteria gram +

2. Diferenciamos al medio de cultivo Agar manitol salado:

AGAR MANITOL SALADO:

Es un medio selectivo y diferencial para el crecimiento de staphylococcus (bacterias que se agrupan
en racimos de uvas, también consideradas gram +)
Componentes que promueven el crecimiento bacteriano:
- Extracto de carne
- Peptona
- Tripteina

Carbohidrato fermentable:
- Manitol

Inhibidor del crecimiento de las bacterias que no pertenecen al género de staphylococcus

- NaCl muy fermentado

Indicador de Ph por la fermentación (producen ácidos que cambian el Ph):

- Rojo de fenol

--→ Luego realizaremos la prueba coagulasa, diferenciando las bacterias coagulasas positivas y
negativas entre el Staphylococcus aureus y epidermidis
 PRUEBA DE LA COAGULASA

Es una prueba que se utiliza para determinar o diferenciar los diferentes tipos de Staphylococcus,
dependiendo de la muestra donde se siembre
Por otro lado también sabemos que la coagulasa es una proteína enzimática encargada de procesar y
convertir el fibrinógeno en fibrina. Obtendremos esta enzima en las bacterias que posean en su pared
celular a esta proteína adherida a su pared celular, la otra forma de obtención de esta enzima será por de
manera libre en el medio de cultivo (caldo)
Los staphylococcus son bacterias gram positivas, que contienen enzimas tales como la coagulasa y
catalasa, mencionando a las más importantes ya que durante esta práctica nos servirá para diferenciarlas
En muestra de Agar manitol salado:
- Coagulasa positiva (+) -→ Staphylococcus aureus
- Coagulasa (-)-→ Staphylococcus epidermidis

Los staphylococcus que son coagulasas positivas presentan esta enzima como mecanismo de acción de
defensa, ya que esta proteína es parecida a la enzima biológica que coagula el plasma. Donde se unirá a
la protrombina e inicia la formación de fibrina, como mecanismo de defensa.

PROCEDIMIENTO:

Sembrar en la placa en los cuatro

01
cuadrantes
C1

02
Dejar incubada C3 C2

C4

Observar el cambio
03

4 cuadrantes
 - “Staphylococcus aureus”

1. Considerado Staphylococcus coagulasa positiva, ya que

fermentan al manitol y producen ácidos que cambian el Ph
por debajo de 6.8, convirtiéndola en un ph acido
2. Por el cambio conformacional del Ph cambiaran de color
rojo a color amarillo
3. Staphylococcus patogénico (causa enfermedad)
4. Colonias de color amarillo rodeadas o no de un halo
amarillo
5. Fermentación de carbohidratos (Ácido láctico)
6. Forma una capa de fibrina sobre el absceso, para
protegerse de la fagocitosis (durante el proceso de la
activación del complemento)

- “Staphylococcus epidermidis”

1. Son coagulasas negativas ya que no fermentan al

manitol por ende no existirá un cambio de Ph, y este
seguirá en un Ph ligeramente alcalino (indicador de ph)
aproximadamente el 8.2
2. Como el Ph no ha sufrido modificación no existirá la
transición de color rojo - amarillo
3. Sthaphylococcus no patogénico
4. Colonias de color rojas rodeadas o no de halo rojizo –
purpura
5. No presenta fermentación de carbohidratos (Ácido
láctico)
6. No es un mecanismo de acción del proceso de
fagocitosis, la formación de una capa de fibrina
3. Prueba de la catalasa:

La catalasa es una enzima que cataliza la descomposición el peróxido de hidrógeno en aguay oxígeno.
Se encuentra presente en la mayoría de los microorganismos aeróbicos y anaeróbicos facultativos,
excluyendo los estreptococos.
La prueba se considera positiva cuando se produce una efervescencia rápida con desprendimiento de
burbujas: la enzima catalasa convierte el peróxido de hidrógeno enagua y oxígeno molecular. Esta
prueba se emplea para diferenciar los géneros Micrococcus y Staphylococcus (catalasa positiva) del
género Streptococcus (catalasa negativa)

Procedimiento:

H202 H2O + O2

Catalasa

01 Rotulamos el nombre de las

bacterias en las láminas

02
Colocamos dos gotas de
peróxido de hidrógeno en
ambas láminas
 Luego colocamos una colonia
03
bacteriana y se observa la
reacción

Añadir disolución al 3 5
04
y esperar 15-20segundos

Burbujas: catalasa positiva

Sin burbujas: catalasa negativa
Con burbujas: catalasa positiva

Resultados:

Como resultado obtuvimos que el Staphylococcus es una bacteria Catalasa positiva y

las bacterias de género Streptococcus son catalasa negativa

Catalasa +

Catalasa -
III. OBSERVACIÓN:

MUESTRA: “Staphylococcus aureus”

AUMENTO: 100x
COLORACION: Tinción Gram

INTERPRETACIÓN:

En la muestra microscópica se logra observar a la bacteria

Staphylococcus aureus, esta pertenece a la morfología coco, es
decir presenta una forma esférica y se puede apreciar que hay
cocos en agrupaciones irregulares o en racimo.
Gram +
El agar manitol salado incluye en su composición el indicador de
pH: rojo fenol. Este indicador es de color rojo a pH 8,2 y cambia
a amarillo a pH por debajo de 6,8, características de

MUESTRA: “Streptococcus pyogenes”

AUMENTO: 100x
COLORACION: Tinción Gram

INTERPRETACIÓN:

Se observan colonias blancas o grises, de 1 a 2 mm de diámetro.

En agar sangre se observa lisis completa (β Hemólisis) debido a
la capacidad de la bacteria para degradar eritrocitos. En raras
ocasiones es posible aislar cepas que no expresen hemolisina,
Gram +
debido a esto se produce una hemólisis parcial (alfa hemólisis)
Las que producen en grandes cantidades ácido hialurónico
capsular, crecen con la apariencia de una gota de agua en la
placa, pero esto ocurre también de forma excepcional. Por lo
general, las cepas menos mucosas asumen un aspecto arrugado
denominado mate, mientras que las colonias pequeñas y opacas
que carecen de cápsula y proteína M detectable se denominan
brillantes.2
IV. CONCLUSIONES:

1. La prueba de la catalasa nos fue útil para diferenciar entre Staphylococcus y

Streptococcus. Si la muestra producía burbujas de oxígeno al entrar en contacto con
peróxido de hidrógeno, se podía concluir que es Staphylococcus, ya que este género
de bacterias produce la enzima catalasa. Por otro lado, si no se observaban burbujas,
se puede inferir que se trata de Streptococcus, ya que estas bacterias no producen
catalasa.

2. La fermentación del manitol es una prueba bioquímica que permite diferenciar entre
distintas especies de Staphylococcus. Si una muestra es capaz de fermentar el manitol,
produciendo un cambio de color en el medio de cultivo, se puede concluir que
pertenece a una especie de Staphylococcus patógena, como Staphylococcus aureus.
En cambio, si no se produce fermentación y no hay cambio de color, es probable que
la muestra sea de una especie no patógena de Staphylococcus.

3. La prueba de la coagulasa es una herramienta importante para identificar

Staphylococcus aureus. Si una muestra presenta coagulación del plasma en presencia
de plasma citratado, se puede concluir que es Staphylococcus aureus, ya que esta
especie produce la enzima coagulasa. Por el contrario, si no se produce coagulación,
es probable que la muestra sea de otra especie de Staphylococcus o de otro género
bacteriano, como Streptococcus, que no produce coagulasa.
V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. Propuesta de una modificación en la formulación del medio agar manitol salado

utilizado en el aislamiento de estafilococos de importancia clínica. Sld.cu.
Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0375-
07602004000300004
2. Streptococcus pyogenes Resistente A Los Macrólidos. Seimc.org. [citado el 26 de

abril de 2023]. Disponible en:

https://seimc.org/contenidos/ccs/revisionestematicas/bacteriologia/fenotm.pdf