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hay algunas confusiones acerca de dónde corresponde poner cada cosa. Observen las
indicaciones.

Trabajo Práctico N°2: Medios de Cultivos


Microbiología y Parasitología
Lic. en Nutrición

Cátedra de Microbiología y Parasitología.

Alumnas: Barbare Derecho Facundo, Caamaño Antonella, Herrero


Sofia, Morquecho Lucia, Reynoso Lourdes, Vannoni Mora.

Docentes: Gaggini Maria de los Angeles, Leyes Maria Veronica y


Meligeni Carlos Daniel.

Temas: Medios de cultivo.

Comisión 2- Grupo 2

Fecha de entrega: 19/6


APROBADO: Grupo, Les dejo comentarios para que vayan teniendo en cuenta en las
futuras entregas. Si bien organizan la información en las secciones que se solicita, todavía
hay algunas confusiones acerca de dónde corresponde poner cada cosa. Observen las
indicaciones.

Introducción √ Es correcto el contenido pero está incompleto. En esta parte de la


introducción deberían haber incluido la composición de los medios de cultivo y las
descripciones de los elementos nuevos y el autoclave con su respectiva fundamentación de
la necesidad de la esterilización.
En el estudio de la microbiología, el medio de cultivo juega un papel fundamental en
el crecimiento y desarrollo de los microorganismos que se desean estudiar. Un
medio de cultivo es una “sustancia o conjunto de sustancias de origen natural o
artificial, líquidos o sólidos, que se combinan de acuerdo a técnicas preestablecidas”
que proporcionan a los microorganismos que se desean cultivar de los nutrientes
necesarios para su crecimiento y desarrollo.
Es una parte esencial de estos que sean estériles, es decir, libre de cualquier
microorganismo que pueda interferir en la proliferación del microorganismo objetivo.
Para garantizar la esterilidad es necesario implementar medidas que eliminen o
reduzcan significativamente la carga microbiana presente en los instrumentos,
medios de cultivo, superficies de trabajo y otros materiales utilizados en los
experimentos microbiológicos. La garantía de la esterilidad en los experimentos
microbiológicos es esencial para obtener resultados confiables y reproducibles.
Además de la esterilidad, el medio de cultivo debe cumplir con otras características
que pueden ser decisivas la hora de su cultivo. El pH del medio debe ser adecuado
para el crecimiento de los microorganismos en estudio, la mayoría de las bacterias
tienden a crecer en un rango de pH cercano a la neutralidad, alrededor de pH 7.
Otro factor determinante resulta la presencia de oxígeno. Las bacterias aeróbicas
experimentan crecimiento en placas de agar y en la parte superior de medios
líquidos, mientras que algunas bacterias requieren una cierta concentración de
dióxido de carbono para crecer en placas. Por otro lado, las bacterias anaerobias
crecen en las capas más profundas de los medios líquidos utilizando vaselina como
aislante, y en placas de agar se desarrollan en recipientes especiales diseñados
para mantener condiciones anaeróbicas.
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hay algunas confusiones acerca de dónde corresponde poner cada cosa. Observen las
indicaciones.

Objetivos generales: √
● Definir medio de cultivo.
● Enunciar las principales características de los medios de cultivo, sus
componentes básicos y clasificación.
● Preparar medios de cultivo a partir del medio deshidratado.

Objetivos específicos: √
● Aprender a usar los nuevos elementos del laboratorio.
● Identificar qué tipo de cultivo utilizamos según la composición del mismo.
● Análisis de la composición del medio.
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Metodología para el preparado del medio de cultivo La Metodología se redacta de


manera continua, en tiempo verbal pasado y en modo impersonal. Ej: “Se esterilizó la zona
de trabajo y los utensilios con alcohol y llama del mechero. Se tomó el medio de cultivo
asignado por la docente, en este caso, el Agar TSI…”
1. Esterilización de la zona y utensilios de trabajo con alcohol y llama del
mechero.
2. Tomamos el medio de cultivo asignado por la docente, en nuestro caso Agar
TSI.
3. Pesamos en la balanza digital la cantidad necesaria (1,5 gr) con el vidrio de
reloj.
4. El polvo lo pasarlo con la cuchara al vaso de precipitado.
5. Colocamos en la probeta un volumen de 50 ml de agua destilada.
6. Luego disolvimos el agua destilada y el TSI con la cuchara hasta que no
quede nada de polvo flotando y trasvasamos al Erlenmeyer.
7. Calentamos en el trípode con la tela de amianto unos 5 minutos y luego
mezclamos (1-2 minutos según las instrucciones del medio de cultivo).
8. Retiramos el Erlenmeyer del trípode y dejamos enfriar el tiempo justo para
evitar la solidificación.
9. Con la pipeta descartable, distribuimos la preparación en los tubos de
hemólisis (4ml c/tubo).

Como instrucciones propias de la utilización del TSI encontramos “Suspender 62,5 g


del polvo en 1 litro de agua purificada. Dejar reposar 5 minutos. Mezclar bien,
calentar con agitación frecuente y hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total.
Distribuir en tubos, llevándolos con un volumen que ocupe hasta la tercera parte de
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los mismos. Esterilizar en autoclave a 121°C por 15 minutos. Enfriar y dejar
solidificar el agar en pico de flauta profundo.” (Laboratorios Britania S.A) √

Resultados
Falta título de imagen

Este es el título. →Tubos de hemólisis (4 ml p/tubo de agar TSI)


Debería ir en la parte superior con el siguiente formato: “Imagen N°1: Tubos de hemólisis
con 4ml de agar TSI por tubo. En esta parte inferior de la imagen va la fuente con el
siguiente formato: “Fuente: Elaboración propia”

Luego de realizar todos los pasos indicados y teniendo en consideración las


características del medio de cultivo que se nos asignó (agar TSI) observamos que el
agua destilada experimentó un cambio de color después de agregar el agar TSI y
calentarlo posteriormente con el mechero.
Entonces se puede lograr distinguir el pasaje de color de la capa de arriba, pasando
de color naranja (agar TSI) tornándose a un naranja rojizo, iniciándose así la etapa
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de solidificación la cual podremos observar más adelante y utilizaremos para la
realización de posteriores trabajos. √

Análisis
Resulta de importancia destacar que durante el desarrollo del trabajo se nos brindó
una explicación detallada por parte del docente sobre la preparación adecuada de
un medio de cultivo. Además, ampliamos nuestros conocimientos acerca de otros
elementos de laboratorio que son utilizados en conjunto con los ya empleados en
prácticas anteriores. Estos elementos incluyen: √

● Vaso de precipitado:

- Es un envase tubular que se usa para guardar y calentar soluciones.


Constituidas de vidrio (como en nuestro caso en el laboratorio) puede
ser de vidrio borosilicato fino, metal inoxidable o aluminio); el plástico
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(polietileno o polipropileno). Suelen tener fondos planos y un borde
alrededor de la parte superior.√

● Erlenmeyer:

- Su forma cónica es característica, además de su cuello cilíndrico, en el


fondo es plano. Principalmente se usa para calentar líquidos (mucho
tiempo) y de esta manera, se evitan el peligro de derrames y pérdidas
por evaporación. Puede utilizarse para hacer soluciones o para
mantener/contener. Se utiliza para medir productos químicos,
muestras, soluciones, para mezclar, calentar, enfriar, disolver,
precipitar, hervir (como en la destilación) o analizar. Es posible mezclar
su contenido por agitación sin el temor a un posible derrame. √
● Vidrio de reloj:

- Es una lámina de vidrio resistente, la cual tiene que ser estable para
contener líquidos, sólidos, para evaporar líquidos y poder pesarlos.
Posee forma circular cóncava-convexa.√
● Cuchara metálica:

- Son pequeños utensilios de acero inoxidable, utilizados para raspar,


transferir polvos, también químicos. Muchas veces también son
resistentes a los ácidos, bases, calor y disolventes. En un extremo
funcionan como espátula y en el otro como cuchara.√
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● Probeta:

- Instrumento volumétrico de vidrio o plástico que consiste en un cilindro


graduado, es decir, lleva grabada una escala por la parte exterior que
permite medir un volumen. Está formado por un tubo generalmente
transparente de unos centímetros de diámetro y tiene una graduación
desde 5 ml hasta el máximo de la probeta. En la parte inferior está
cerrado y posee una base de apoyo, mientras que la superior está
abierta (permite introducir el líquido a medir) y suele tener un pico
(permite verter el líquido medido). Su composición es de vidrio o de
plástico. La ventaja de ser de vidrio es que las mediciones van a ser
más exactas que una de plástico. √
● Pipeta de 10 ml:

- Es un instrumento volumétrico formado por un tubo transparente de


vidrio o plástico( descartables), que termina en una de sus puntas de
forma cónica, y tiene una graduación de distintos volúmenes. Permiten
la transferencia de un volumen de un recipiente a otro de forma
exacta. √
● Trípode:
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- Es un elemento de apoyo/sujetar los equipos de laboratorio y evitar
accidentes con productos peligrosos. Con este material es posible la
preparación de sustancias para calentar, utilizando el mechero. √

● Tela de amianto:

- Es una tela de alambre de forma cuadrangular con la parte central


recubierta de amianto o asbesto (material no inflamable). Se utiliza
para colocar los materiales que van a ser calentados. Es la encargada
de repartir la temperatura de manera uniforme cuando se calienta con
un mechero. Para esto se usa el trípode el cual sostiene la rejilla
mientras es calentada.√
● Balanza digital:

- Es un instrumento de pesaje de precisión que se utiliza para medir el


peso de sólidos y líquidos. Su material, de acero inoxidable√
● Campana de Durham:

- Sirve para determinar la producción de gases de microorganismos. Se


colocan con la abertura hacia abajo en tubos más grandes pudiendo
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observar así los gases emanados.√ la descripción es correcta pero la
imagen no corresponde a la campana que utilizaron ustedes

Rotulados:
El TSI (Triple Sugar Iron) es un medio de cultivo utilizado en microbiología para la
identificación y diferenciación de bacterias. Consiste en un medio sólido que
contiene tres azúcares (glucosa, lactosa y sacarosa) y hierro ferroso. En el medio de
cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para
el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono
fermentables. El agar es el agente solidificante.
El TSI se utiliza para determinar la capacidad de una bacteria para fermentar estos
azúcares y producir ácido y gas como subproductos, que se detectan por medio del
indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido.
Para la interpretación de los resultados el prospecto menciona
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Observar el color del medio de cultivo y la producción de gas.
1- Superficie alcalina/profundidad ácida (pico rojo/fondo amarillo): el
microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2- Superficie ácida/Profundidad ácida (pico amarillo/fondo amarillo): el
microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3- Superficie alcalina/Profundidad alcalina (pico rojo/fondo rojo): el
microorganismo es no fermentador de azúcares.
4- La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo indican que el
microorganismo produce gas.
5- El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido
sulfhídrico.” (Laboratorios Britania s.a)
La interpretación de los resultados del TSI puede proporcionar información sobre las
características metabólicas y la identificación preliminar de las bacterias. Es
entonces un medio de cultivo diferencial ya que nos permite diferenciar entre
fermentadores y no fermentadores, y selectivo ya que el sulfato de hierro y tiosulfato
de sodio actúan como inhibidores del crecimiento de bacterias gram positivas.
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Es crucial cumplir estrictamente con las normas de seguridad y esterilidad durante
todo el proceso de preparación del medio de cultivo. Esto implica utilizar técnicas
adecuadas de manejo de muestras y desinfección de superficies y utensilios. Una
herramienta presente en el laboratorio utilizada para la esterilización de los
materiales de laboratorio y medios de cultivo es el Autoclave. El mismo consiste en
una cámara de acero inoxidable resistente a altas temperaturas y presiones, con
una puerta hermética que permite el sellado hermético durante el proceso de
esterilización. El funcionamiento del autoclave se basa en la generación de vapor a
alta presión y temperatura.
Usualmente el autoclave se utiliza con un ciclo de 121ºC durante 30 minutos sin
vacío para la esterilización de material de riesgo biológico, realizando pruebas de
control de esterilidad en cada tratamiento para asegurar que la carga microbiológica
haya sido eliminada.

Etapas de Funcionamiento del Autoclave:

1. Puesta en Marcha: Se cierran las puertas herméticamente para que la


cámara quede sellada.

2. Expulsión de Aire: En esta fase se eliminará el aire contenido en la cámara


y se favorecerá a la eliminación posterior del aire dentro de los paquetes y de los
contenedores. Para ello se inyecta vapor en la cámara y se activa el sistema de
vacío.

3. Preparación: Para la extracción del aire de los productos y de la cámara, se


realiza una serie de fases (hasta cuatro) de inyección de vapor (de recámara a
cámara) seguidas de fases de vacío (prevacío), mediante el sistema de vacío,
para eliminar completamente el aire restante.

4. Calentamiento: Se introduce vapor en la cámara y en el interior de los


contenedores, hasta alcanzar la temperatura y presión de esterilización.

5. Esterilización: Se mantiene constante la temperatura y presión en la cámara


durante el correspondiente tiempo de esterilización.
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6. Desvalorización: El vapor de la cámara es eliminado por el sistema de vacío
y se produce un descenso de la presión.

7. Secado: Se inicia un vacío final, profundo y duradero. Se mantiene el vapor


en la recámara, para mantener caliente la cámara y ayudar a secar el producto a
fin de evitar todo tipo de contaminación bacteriana durante el transporte y el
almacenamiento.

8. Igualación: Entrada de aire atmosférico a la cámara, a través de un filtro de


aire estéril, para compensar la presión de la cámara (que estaba en depresión)
con la atmosférica. El vapor utilizado se condensa y se convierte en agua
transportándose a un depósito.

9. Finalización del Proceso: Se liberan las puertas para que puedan ser
abiertas.

Parámetros que hay que controlar en un Autoclave:

Presión de Vapor: El vapor será saturado y libre de impurezas utilizando agua


tratada. La pureza del vapor, la saturación y la disponibilidad del vapor son
importantes variables del proceso. De la calidad del vapor depende que la
esterilización sea efectiva o no. Estas impurezas pueden oxidar el instrumental.

Tiempo: Tiempo de exposición del producto o de la cámara a la temperatura de


esterilización. Es la duración de la fase de esterilización.

Temperatura: Temperatura a la que se mantiene la cámara durante la fase de


esterilización.

Es muy importante para la esterilización que el vapor sea limpio, es decir un vapor
formado a partir de agua filtrada y libre de sustancias contaminantes como el
cadmio, magnesio, plomo o cloro entre otras. También se necesita que sea puro,
esto quiere decir que la presencia de agua en forma líquida sea muy baja, se
considera cuando es menor al 3%. Para su efectividad el vapor tiene que estar en
contacto directo con el material a esterilizar (por lo que la carga de los elementos es
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muy importante), y crear el vacío efectivo con el fin de desplazar todo el aire
presente inicialmente en el autoclave y su sustitución por vapor.

La falta de esterilidad puede generar que microorganismos no deseados contaminen


el medio generando una competencia por nutrientes, afectando el crecimiento del
microorganismo de interés y dificultando su desarrollo adecuado. Al terminar con la
preparación, el medio de cultivo se presenta en un tubo de ensayo sellado
herméticamente, para mantenerlo esteril en su conservación.

Medios de cultivo utilizados en laboratorio:

Simmons Citrato Agar

Uso: Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a la


capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía.
Características del producto:
Medio de cultivo deshidratado: color amarillo-verdoso, homogéneo, libre
deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color verde.
Instrucciones:
Emplear 24,2 g por litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar con
agitación frecuente y llevar a ebullición durante 1 o 2 minutos para disolución total.
Distribuir en tubos y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. Enfriar y
solidificar en posición inclinada o cuando esté en 45 c ó 50 c trasvasar a placa.
Fórmula (en gramos por litro):
● Citrato de sodio…2.0
● Cloruro de sodio…5.0
● Fosfato dipotásico…1.0
● Fosfato monoamonico…1.0
● Sulfato de magnesio…0.2
● Azul de bromotimol…0.08
● Agar…15.0
pH FINAL: 6.9 ± 0.2
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Nutritivo Agar

Uso: Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el aislamiento y


recuento de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Su uso
está descrito en procedimientos para el análisis de alimentos, aguas y otros
materiales de importancia sanitaria.
Características del producto:
Medio de cultivo deshidratado: color beige claro, homogéneo, libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color ámbar claro ligeramente opalescente.
Suplementado con sangre: color rojo cereza.
Instrucciones:
Suspender 31 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Mezclar y dejar reposar 5
minutos. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 o 2 minutos hasta su
disolución total. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a
121°C durante 15 minutos.
Fórmula (en gramos por litro):
● Pluripeptona…5.0
● Extracto de carne…3.0
● Cloruro de sodio…8.0
● Agar…15.0
pH FINAL: 7.3 ± 0.2

SIM Medio

Uso:Medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de indol y de


sulfuro de hidrógeno por los microorganismos. Es útil para diferenciar miembros de
la familia Enterobacteriaceae.
Características del producto:
Medio de cultivo deshidratado: color beige, homogéneo, libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color ámbar.
Instrucciones:
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Suspender 30 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar 5 minutos. Calentar
con agitación frecuente y hervir durante un minuto para disolución total. Distribuir en
tubos y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
Fórmula (en gramos por litro):
● Tripteína…20.0
● Peptona…6.1
● Sulfato de hierro y amonio…0.2
● Tiosulfato de sodio…0.2
● Agar…3.5
pH FINAL: 7.3 ± 0.2

T.S.I. Agar (Triple Sugar Iron Agar)

Uso:Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, en


base a la fermentación de los hidratos de carbono glucosa, lactosa y sacarosa y a la
producción de ácido sulfhídrico.
Características del producto:
Medio de cultivo deshidratado: color beige claro, homogéneo, libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color rojo.
Instrucciones:
Suspender 62,5 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Dejar reposar 5 minutos.
Mezclar bien, calentar con agitación frecuente y hervir 1 o 2 minutos hasta
disolución total. Distribuir en tubos, llenándolos con un volumen que ocupe hasta la
tercera parte de los mismos. Esterilizar en autoclave a 121°C por 15 minutos. Enfriar
y dejar solidificar el agar en pico de flauta profundo.
Fórmula (en gramos por litro):
● Extracto de carne…3.0
● Pluripeptona…20.0
● Cloruro de sodio…5.0
● Lactosa…10.0
● Sacarosa…10.0
● Glucosa…1.0
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● Sulfato de hierro y amonio…0.2
● Tiosulfato de sodio…0.2
● Rojo de fenol…0.025
● Agar…13.0
pH FINAL: 7.3 ± 0.2
Desde el inicio de esta sección hasta acá, todo este material teórico debe ir en la
introducción.

En el laboratorio encontramos los que se conocen como Sim medio, Tsi AGAR,
Nutritivo Agar y el Agar Citrato de Simmons.
Según las etiquetas, como resultado del empleo de los polvos se obtienen cultivos
con un pH final de 7,3 , el único caso diferente es el del Agar Citrato de Simmons
que va a poseer un pH final de 6,9. A pesar de esta diferencia, aún contamos con
medios de cultivo con pH cercanos a la neutralidad, obteniéndose por medio de los
componentes que los conforman.
En el caso del nutritivo Agar está constituido por pluripeptona, extracto de carne,
cloruro de sodio y agar, obteniéndose así un pH final de 7,3. En cambio, el Sim
medio, está formado por Tripteina,peptona, sulfato de hierro y amonio, tiosulfato de
sodio y agar. Otro de los medios estudiados fue el T.S.I Agar, el cual contiene
extracto de carne, pluripeptona, cloruro de sodio,lactosa, sacarosa, glucosa, sulfato
de hierro y tiosulfato de sodio.√

Conclusión √
Mediante este trabajo fue posible describir la forma correcta de llevar a cabo el uso
de agar para la realización de medios de cultivo, que precauciones se deben tener
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para tratar con los mismos y las características de los elementos de laboratorio que
se utilizan en estos procesos.
Por otro lado se pudieron diferenciar los distintos elementos que los
microorganismos precisan para su correcto desarrollo (macroelementos si son
requeridos en grandes cantidades y microelementos si lo son en pequeñas
cantidades) además de las condiciones específicas que presentan ciertos medios
de cultivos para que la proliferación de los microorganismos sea óptima. Entre
estas condiciones se podrían nombrar un pH acorde, un contenido de agua en el
sustrato correcto o, en el caso de algunas bacterias, la disponibilidad de CO2 para
generar tensión y que el desarrollo en la placa sea el esperado.
Además, se diferenciaron los tipos de medio de cultivo disponibles para la
realización de estudios sobre estos, pudiendo dividirse así según su composición,
según su uso, y según su estado. Muy bien esta conclusión. Expone los objetivos
alcanzados y da el cierre al informe.√
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Bibliografía La Bibliografía no está citada según las normas ISO 690 como se solicita.
Revisen en internet las normas. En el caso de los sitios web, el formato y la información
necesaria contiene: AUTOR, Año de publicación. Título del artículo/post. En: Título de la
web/blog en cursiva [en línea]. Disponible en: URL del recurso [consulta: fecha de consulta].

BritaniaLab (www.britanialab.com):
T.S.I Agar. [en línea]. [Accedido el 14 de junio de 2023].

TP Laboratorio químico, materiales e instrumentos de un laboratorio químico,


Autoclave de laboratorio.

Materiales de laboratorio hoy (www.materialesdelaboratoriohoy.us):

Vaso de precipitado. [en línea]. [Accedido el 15 de junio de 2023].

Erlenmeyer. [en línea]. [Accedido el 15 de junio de 2023].

Cuchara metalica. [en línea]. [Accedido el 15 de junio de 2023].

Kit Lab, UNICEN (www.kitlab.exa.unicen.edu.ar):

Pipeta Graduada. [en línea]. [Accedido el 15 de junio de 2023].

Tela de amianto. [en línea]. [Accedido el 15 de junio de 2023].

Trípode. [en línea]. [Accedido el 15 de junio de 2023].

Probeta. [en línea]. [Accedido el 15 de junio de 2023].

Vidrio de Reloj. [en línea]. [Accedido el 15 de junio de 2023].

Micro Weighing Solutions (www.mws.ltd.uk):

Balanza digital. [en línea]. [Accedido el 15 de junio de 2023].

Reference, Science and Technology (www.reference.com):


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Campana de Durham. [en línea]. [Accedido el 15 de junio de 2023].

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