Práctica número 4: Extracción de ADN

Asignatura: Biología Molecular y Genética

Licenciatura de Medicina.
Fecha de entrega: 24 de septiembre del 2023
Nombre de la alumna: E.Maritza Nieves Arce
Docente: MCBM. Mariana Alvarado Serrano

Resumen
En resumen, la extracción de ADN es un proceso fundamental en biología molecular
y genética con amplias aplicaciones. A pesar de su importancia, enfrenta desafíos
como la contaminación cruzada y la fragmentación del ADN. Este estudio busca
abordar estos problemas mediante una metodología que extrae ADN genómico de
líneas celulares con métodos químicos. Aunque se logró la extracción, no se logró
su purificación completa. Para mejorar la calidad de las muestras, se requieren
ajustes en los procedimientos. Esta práctica contribuye significativamente al
aprendizaje y formación de estudiantes en biología molecular y es esencial para la
investigación científica y biomédica.

Introducción exploraremos los principios

La extracción de ADN es un proceso
fundamental en la biología molecular y
la genética que permite aislar y
purificar el material genético contenido
en las células de un organismo. Este
procedimiento es esencial en una
amplia variedad de aplicaciones
científicas y técnicas, desde la
investigación básica hasta la medicina
forense y la ingeniería genética.
El ADN, o ácido desoxirribonucleico,
es la molécula que contiene la
información genética que determina
las características y funciones de un
ser vivo. Extraer ADN de una muestra
biológica, ya sea de células humanas,
bacterias, plantas o cualquier otro
organismo, es el primer paso crucial
para estudiarlo y comprender su
estructura y función. En esta práctica,
fundamentales de la extracción de
ADN, los diferentes métodos
utilizados, además de las técnicas que
se utilizaron para realizar la
extracción.
Planteamiento del Problema-
La preparación de ADN es una etapa
crítica en la investigación biológica y
molecular, fundamental para una
variedad de aplicaciones, desde
diagnósticos médicos hasta estudios
genómicos. Sin embargo, este
proceso no está exento de desafíos
que pueden afectar la calidad y la
integridad de los resultados. En este
ensayo, exploramos los problemas
comunes en la preparación de ADN y
las soluciones disponibles para
abordarlos.
Contaminación Cruzada:
Uno de los problemas más recurrentes
en la preparación de ADN es la
contaminación cruzada. Puede ocurrir
cuando se manipulan múltiples
muestras en un laboratorio o cuando
los reactivos no están debidamente
controlados. Esta contaminación
puede resultar en resultados erróneos
y confusión en la interpretación de los
datos.
Solución: Para evitar la contaminación
cruzada, los laboratorios deben
implementar rigurosos procedimientos
de limpieza y usar pipetas y puntas
estériles. Además, la segregación de
áreas de trabajo y la aplicación de
protocolos de control de calidad
pueden minimizar este problema.
Fragmentación del ADN:
La fragmentación del ADN es un
problema común en la preparación,
especialmente cuando se trabaja con
muestras antiguas o mal procesadas.
La degradación del ADN puede
dificultar la amplificación por PCR o la
secuenciación, lo que afecta
negativamente la calidad de los
resultados.
Justificación
La práctica de laboratorio sobre
extracción de ADN genómico a
través de métodos químicos es una
actividad educativa esencial que
brinda a los estudiantes la
oportunidad de comprender los
conceptos fundamentales de la
biología molecular, desarrollar
habilidades técnicas, promover el
pensamiento crítico y prepararse
para futuras investigaciones en
este campo. Esta experiencia
práctica enriquecedora contribuye
significativamente al aprendizaje y
la formación de los estudiantes en
biología molecular.
Objetivos
General: Extraer DNA genómico de
líneas celulares a través de métodos
químicos
Específico: El objetivo específico de
este estudio consiste en desarrollar y
aplicar un protocolo de extracción de
ADN genómico a partir de líneas
celulares utilizando métodos químicos,
con el propósito de obtener muestras
de alta calidad y pureza que sean
adecuadas para análisis moleculares
posteriores.
Hipótesis
Se espera que la extracción de ADN
genómico de líneas celulares
mediante métodos químicos resulte en
la obtención de muestras de ADN de
alta pureza y calidad, lo que permitirá
su uso efectivo en análisis
moleculares subsiguientes. Además,
se anticipa que la optimización de los
protocolos químicos de extracción
permitirá una mayor eficiencia en el
proceso y una reducción en la
variabilidad de los resultados, lo que
facilitará la investigación científica y
biomédica que depende de la
disponibilidad de material genético de
calidad.
Metodología
Preparación solución de lisis: para
esta solución se utilizó tris-base 1M,
NaCl 2.5M y EDTA 0.5M a una 1:1:1
para preparar 1 ml de buffer de lisis
por lo que se mezcló 330 microlitros
de cada una de estas soluciones.
Preparación fenol-cloroformo: en una
relación 25:1 para preparar 1 ml de
fenol- cloroformo y alcohol isomilico;
donde el mililitro se repartía en 50
partes del fenol y cloroformo(
1𝑚𝑙
= 0. 02𝑚𝑙 ), siendo 0.02ml;
50 𝑝𝑎𝑟𝑡𝑒𝑠
por lo que de las 25 partes de fenol se PCL(fenol-cloroformo/alcohol
tomaron 0.5ml ( isoamílico) después de agregarlo a los
(25 𝑝𝑎𝑟𝑡𝑒𝑠
𝑓𝑒𝑛𝑜𝑙 )(0. 02𝑚𝑙) = 0. 5𝑚𝑙) y de las tres tubos eppendorf se colocaron en
el termo thermomixer el cual no cuenta
otras 24 partes del cloroformo
con agitación y se tienen que hacer
resultando en 0.48 ml (
manual, se colocaba por dos minutos
(24 𝑝𝑎𝑟𝑡𝑒𝑠
𝑐𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑜𝑟𝑚𝑜 )(0. 02𝑚𝑙) = 0. 48𝑚𝑙). y se sacaba para aguitar manualmente
Para terminar conar con la última parte por 10 minutos
de alcohol isomilico resultando en Se extrajo el sobre radiante y se
0.02ml ( 1 ( 𝑝𝑎𝑟𝑡𝑒𝑠
𝐴𝐼 )(0. 02𝑚𝑙) = 0. 02𝑚𝑙). colocaron en distintos tubos
eppendorf, después se le añadieron
Extraccion de ADN: De la caja Petri
20 microlitros de NaCl 2.5M a cada
con la muestra a analizar, se raspó y
uno de los tubos eppendorf para poder
repartió la muestra en 3 tubos
llevarlo a una concentración final de
eppendorf con 1.5ml de agua destilada
0.1M.
a modo de medio de cultivo, pero para
Se centrifugaron los tres tubos
lograr romper las placas de la muestra
eppendorf a 900 rpm por 5 minutos
se utilizó el vórtex hasta lograr una
mezcla homogénea.
Se centirifugó a 1000 rpm durante un
Resultados
minuto., al no ser suficiente, se volvio
a centrifugar a 2000 rpm durante 2 min
Se añadieron 100 microlitros de SDS
al 20% para luego incubar en agitación
a 42 C a falta de un thermomix se
utilizó un termostat en el cual se
sacaba la muestra cada 3-4 minutos
para revolverlo y se devolvió a la
máquina, esto durante 35 minutos.
Centrifugamos los 3 tubos eppendorf a
1000 rpm por 1 minuto, se volvió a
centrifugar a 2000 rpm por 1 minuto.
Después de la centrifugación el
sobrenadante que salió de los 3 tubos imagen # 1, en la imagen se puede ver
eppendorf se retiró para dejar el un tubo eppendorf el cual a se le retiró
precipitado que salió, a esto se le el sobrenadante, esto se respeito con
agregó 1 ml de buffer de lisis a cada las otras dos muestras que se tratan
tubo ( se volvieron hacer 2 ml de de hongo y bacteria
buffer de lisis porque solo habia 1 ml)
después de agregar el buffer se
incubó por 10 minutos a 4°C.
Después de que salió de la agitación
se le añadió con una micropipeta 1000
microlitros de

imagen #2, se puede observar un
termomixer, el cual tiene en su interior
las muestras en tubos eppendorf de
bacterias y hongos, este se encuentra
a una temperatura de 4°C y por un tipo
infinito, ya que el tiempo se fue
midiendo en una hora específica de
1:29 pm hasta la 1:39
Se logró la extracción de ADN, pero
no su purificación
Conclusión
En conclusión, la extracción de ADN
es un procedimiento esencial en la
biología molecular y la genética que
permite aislar y purificar el material
genético contenido en las células de
un organismo. A través de este
proceso, se obtiene ADN de alta
calidad que puede ser utilizado en una
amplia variedad de aplicaciones
científicas y técnicas, desde
investigaciones básicas hasta
medicina forense e ingeniería
genética.
Sin embargo, en la preparación de
ADN, se pueden presentar desafíos
como la contaminación cruzada y la
fragmentación del ADN. La
contaminación cruzada puede afectar
la integridad de los resultados,
mientras que la fragmentación del
ADN puede dificultar su uso en
técnicas posteriores como la PCR o la
secuenciación.
Para abordar estos problemas, es
crucial implementar procedimientos de
limpieza rigurosos, utilizar pipetas y
puntas estériles, y aplicar protocolos
de control de calidad en el laboratorio.
Además, la optimización de los
protocolos químicos de extracción
puede mejorar la eficiencia del
proceso y reducir la variabilidad de los
resultados, lo que beneficia la
investigación científica y biomédica
que depende de material genético de
alta calidad.
La metodología utilizada en este
estudio demostró la extracción de
ADN genómico de líneas celulares
mediante métodos químicos, aunque
se señala que no se logró la
purificación completa del ADN. Esto
sugiere la necesidad de revisar y
ajustar los procedimientos para
obtener muestras de ADN de mayor
pureza en futuros experimentos.
Referencias
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