UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE

FACULTAD DE INFORMATICA Y ELECTRONICA

INGENIERIA BIOMÉDICA Evaluación
CAMPUS TIQUIPAYA

BIOLOGÍA CELULAR Y
MOLECULAR
Informe de Practica de Laboratorio

Extracción de ADN
Grupo “A”

Estudiante: Brayan Zeballos, Amir

Muriel y Mathias Merino

Docente: Ing. Carmen Castillo

Pimienta

Cochabamba – Noviembre - 2021

Gestión II – 2021
 1. INTRODUCCIÓN. –

OBJETIVOS. –
En la actualidad, el estudio de la variación genética entre individuos, poblaciones y
especies para explicar patrones y procesos ecológico-evolutivos se aborda mediante
marcadores moleculares, segmentos de ADN con o sin función conocida que
proporcionan información sobre la variación alélica y permiten distinguir individuos
(Schlötterer 2004). Estos marcadores se obtienen con técnicas como la PCR (por las
siglas en inglés de Polymerase Chain Reaction) y secuenciación, que hacen posible
analizar la variación en la molécula del ADN con un detalle sin precedentes
(Schlöttlerer 2004; Hudson 2008). Los datos moleculares han permitido estudiar con
mayor precisión los patrones de diversidad genética y su distribución; el
comportamiento; la selección herramientas moleculares aplicadas en ecología
nidades microbianas; las relaciones filogenéticas, entre otros (Sunnucks 2000;
Schlötterer 2004; Hudson 2008). La aplicación de técnicas moleculares inicia con la
extracción de ADN y la obtención exitosa de datos confiables y reproducibles
depende, en gran medida, de la extracción de ADN íntegro y puro. La extracción
consiste en el aislamiento y purificación de moléculas de ADN y se basa en las
características fisicoquímicas de la molécula. El ADN está constituido por dos
cadenas de nucleótidos unidas entre sí formando una doble hélice. Los nucleótidos
están integrados por un azúcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base
nitrogenada (adenina, guanina, timina o citosina). La unión de los nucleótidos ocurre
entre el grupo fosfato y el azúcar, mediante enlaces fosfodiéster, dando lugar al
esqueleto de la molécula. Las bases de cadenas opuestas se unen mediante puentes
de hidrógeno y mantienen estable la estructura helicoidal (Figura 1). Los grupos
fosfato están cargados negativamente y son polares, lo que le confiere al ADN una
carga neta negativa y lo hace altamente polar, características que son aprovechadas
para su extracción. Los grupos fosfato tienen una fuerte tendencia a repelerse, debido
a su carga negativa, lo que permite disolver al ADN en soluciones acuosas y formar
una capa hidratante alrededor de la molécula. Pero, en presencia de etanol, se rompe
la capa hidratante y quedan expuestos los grupos fosfato. Bajo estas condiciones se
favorece la unión con cationes como Na+ que reducen las fuerzas repulsivas entre
las cadenas de nucleótidos y permiten que el ADN precipite (Sambrook et al. 1989).
Por otro lado, la carga neta negativa del ADN le permite unirse a moléculas y matrices
inorgánicas cargadas positivamente (Nasón 1965, Travaglini 1973, Sambrook et al.
1989, Sinden 1994). A lo largo del tiempo se han diseñado distintos protocolos con la
finalidad de obtener una cantidad y calidad de ADN adecuados, así como garantizar
la eliminación de inhibidores potenciales que dificulten el tratamiento posterior de la
molécula. Los métodos tradicionales, desarrollados en los años 50, utilizan solventes
orgánicos para separar a las proteínas del ADN y, una vez suspendido en la fase
acuosa, aislarlo por precipitación con etanol. Estos métodos requieren preparar
soluciones y la extracción puede tomar desde unas horas hasta varios días por los
numerosos pasos que deben realizarse. En general, los protocolos tradicionales
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consisten de cinco etapas principales: homogeneización del tejido, lisis celular,
separación de proteínas y lípidos, precipitación y redisolución del ADN.
A partir de los años 90 se introdujeron al mercado combos o kits de extracción que
utilizan matrices inorgánicas compactas cargadas positivamente capaces de retener
varios microgramos de ADN y separarlos del resto de las biomoléculas, permitiendo
obtener un extracto libre de inhibidores. Los combos se venden en presentación de
membranas de sílice o perlas magnéticas, las primeras están formadas por una
resina y las segundas consisten de un centro de hierro recubierto por resina (Guinn
1966, Dundass et al. 2008). La membrana está insertada dentro de un microtubo de
polipropileno y las microesferas se encuentran suspendidas en una solución
amortiguadora. Durante la extracción, el ADN cargado negativamente se adsorbe o
une a la matriz selectiva de manera reversible y se mantiene unido a ésta durante la
remoción de lípidos, proteínas y metabolitos secundarios, posteriormente la molécula
se libera de la matriz. Los combos también incluyen soluciones de lisis, unión y lavado
que no contienen fenol ni cloroformo para extraer proteínas, tampoco requieren etanol
para precipitar al ADN (Qiagen 2005, Invitrogen 2005). Los kits comerciales
disminuyen la extracción a unas cuantas horas porque reducen el número de pasos
del procedimiento y, utilizados bajo las recomendaciones de cada proveedor,
garantizan una extracción de alta pureza ya que tanto la recuperación del ADN como
la eliminación de contaminantes son muy eficientes (Qiagen 2005, Invitrogen 2005).
La selección del método de extracción es un paso fundamental en las técnicas
moleculares y depende del organismo bajo estudio, el tejido disponible y su estado
de conservación, la técnica que se aplicará posteriormente, así como la
infraestructura de los laboratorios, los recursos económicos y tiempo para obtener
resultados. Independientemente del método seleccionado es recomendable encontrar
un equilibrio entre pureza y rendimiento de acuerdo con la aplicación posterior. Con
la finalidad de que el usuario conozca las diferentes opciones y elija la más apropiada,
de acuerdo con sus objetivos y recursos, en los siguientes párrafos se describen de
manera general las etapas de los protocolos tradicionales y comerciales, se explican
los métodos de análisis (concentración e integridad de la molécula) y almacenamiento
del extracto.

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 2. MATERIALES Y MÉTODOS. –
Para la realización del presente laboratorio, del cual consistía en la extracción del
ADN en compuestos orgánicos, se dio el uso de distintos materiales, de los cuales se
mencionarán a continuación.
De los compuestos orgánicos utilizados para su respectivo análisis y extracción fueron
los siguientes, cabe recalcar la cantidad usada dado que se pueda obtener las
muestras deseadas:
• 3 frutillas
• 1 kiwi o un manojo de espinacas
• ½ plátano
• ½ tomate
• Una pequeña porción de hígado de pollo
Para el desarrollo del laboratorio y la extracción del ADN también se dio el uso de
algunos materiales de laboratorio y reactivos que podrán reaccionar con los
compuestos orgánicos analizados. En los materiales de laboratorio se dio el uso de
los siguientes:
• Mortero
• Pipetas
• Bureta
• Probetas
• Pera de goma
• Vasos precipitados
• Piseta
• Papel filtro
• Pinzas
• Tubos de ensayo
• Gradilla
• Varilla de vidrio
En la guía de laboratorio se pedía la observación microscópica de los resultados
obtenidos, pero no se dio dicha observación por los factores de tiempo, por lo tanto,
se descartó los materiales usados en dicha observación. De los materiales de
laboratorio utilizados, también se dio el uso de reactivos y otra clase de equipos
utilizados para dicha observación, a continuación, se mostrarán los otros materiales
utilizados:
• Cinco bolsas de plástico
• Guantes de laboratorio
• Licuadora
• Alcohol de 96º
• Cloruro de sodio
• Agua destilada
• Jabón de lavavajilla
• Dodecilsulfato de sodio (SDS)

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Con los compuestos orgánicos a estudiar y los materiales para dicho estudio
establecidos, se prosigue con la redacción de los métodos o procedimiento utilizado
en la presente práctica de laboratorio.
Se prosiguió con la trituración de los componentes orgánicos utilizados, para esto con
el uso de los morteros o la licuadora, esencialmente para la trituración del hígado de
pollo se dio el uso de la licuadora. La finalidad del triturado de los compuestos fue
para obtener una especie de papilla o puré y que la misma pueda reaccionar con
mayor facilidad a los reactivos.
Juntamente con la trituración de los compuestos orgánicos se preparó una
concentración de 50ml de agua destilada con cinco cucharas de jabón de lavavajillas
y tres cucharas de cloruro de sal o comúnmente llamado la sal comercial.
En cada muestra de los compuestos orgánicos de origen vegetal se agrego cuatro
cucharadas de la concentración del agua destilada con el jabón de lavavajillas y la
sal, exceptuando en el caso de la muestra del plátano, siendo que se agregó doce
cucharadas de concentrado, dado que dicho compuesto orgánico es más denso y
necesita diluido. Posterior a la mezcla de los compuestos analizados con el
concentrado, se vació cada compuesto a una bolsa de plástico y poder mezclarlo con
mayor facilidad, dado que se agito cada bolsa.
Con los compuestos ya mezclados con el reactivo se prosigue a el filtrado de cada
uno, para el filtrado se dio el uso del papel filtro y los vasos precipitados. Con el filtrado
se prosiguió con la toma de las muestras siendo que solamente se tomó cinco ml de
filtrado de los compuestos orgánicos. Finalmente, se le agregó la misma cantidad del
filtrado medido, siendo el caso de cinco ml de alcohol destilado y se vació con extremo
cuidado a cada tubo de ensayo que contenía el filtrado, posterior a esto se dejó
reposar para poder observar las reacciones dadas.
En el caso del hígado de pollo ya triturado con una consistencia de puré, igualmente
se lo filtró hasta poder obtener una cantidad razonable, de lo cual al filtrado se le
agregó el SDS, y la misma cantidad de alcohol al 96º, para el agregado del alcohol se
prosiguió con extremo cuidado, tratando de que se mantengan separadas las dos
sustancias. Como en el caso de las muestras de origen vegetal se dejó reposar para
poder observar las reacciones dadas.

Con una investigación dada se tiene que que la extracción de ADN de compuestos
de origen vegetal ocurre debido a la reacción del concentrado de jabón de lavavajillas
rompe las membranas de las células tanto la membrana del citoplasma con del del
núcleo y los organelos, siendo el caso que dichas membranas están formadas
fundamentalmente por lípidos siendo en la mayoría bicapas, siendo que un detergente
común las disuelva, además que el ADN por su composición química no se desase
con el concentrado.
De manera sencilla se puede explicar que el concentrado desase las membranas
celulares, de las cual se el ADN se mantendrá intacto y de lo cual, por la diferencia
de densidad con respecto al filtrado, siendo el caso que el ADN tiene una menor
densidad va a flotar por encima del concentrado, y de lo cual se podrá observar en el
alcohol que se encuentra en la superficie de las muestras.
A continuación, se mostrarán la cantidad de cromosomas que presentan cada
componente orgánico, para así poder relacionarlo con los resultados obtenidos y tener
un mejor análisis con los mismos
Compuesto Frutilla Tomate Espinaca Plátano Pollo
orgánico
Nº de La frutilla El tomate La espinaca El plátano La gallina de
Cromosomas presenta 56 presenta una presenta una presenta una granja o

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 cromosomas, cantidad de cantidad de cantidad de 11 común
siendo 12 12 cromosomas, presenta una
octoploide, o cromosomas cromosomas siendo la cantidad de 78
teniendo ocho diploides 2n mayoría cromosomas,
juegos triploides. siendo 16
idénticos de macro
cromosomas cromosomas y
62 micro
cromosomas.

Con el procedimiento establecido y los métodos utilizados se proseguirá con el

análisis de los resultados a base de la información dada.

3. RESULTADOS Y DISCUSIONES. –
Veremos las soluciones reaccionando a cada una de las muestras que tomamos
para explicarlas. -

En esta imagen vemos a la solución reaccionando a la frutilla licuada/molida, tanto las

burbujas como lo blanco que vemos en la imagen son el ADN separándose de la
solución y se ve claramente, pero podíamos haber obtenido una muestra mas clara.

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En esta parte vemos el plátano separando su ADN con la solución, esta parte igual
salió exitosa pero podía haber salido con un rendimiento mucho mejor tal vez esto se
deba a que al colocar el alcohol lo hicimos muy rápidamente.

En esta parte vemos 2 resultados una de espinaca que sería la de color verde que no
salió como esperábamos pues no tiene un cambio notable sino parece más una

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mezcla directa del alcohol con la solución. En cambio, vemos que el del tomate tiene
un cambio notable pero no tanto como los 2 primeros, aun así, quedamos satisfechos.

En las siguientes imágenes veremos las distintas etapas de la solución del hígado. -

En esta parte nosotros recientemente habíamos combinado el hígado con el alcohol

para su separación de ADN por lo que había que esperar un poco para ver un
resultado notable.

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Como vemos en las imágenes tenemos resultados notables con su separación
notable de ADN es notable el ADN del hígado, pero comparando en el laboratorio por
experiencia decimos que podíamos haber obtenido un resultado impecable y más
notable del que teníamos.

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 4. CONCLUSIONES. –
Con los resultados y discusiones ya ejecutados de cada una de las muestras
dadas, se concordó con las siguientes conclusiones a base de la práctica de
extracción de ADN:
• Cada componente orgánico de distinta familia de especie va a
presentar un distinto número de cromosomas, siendo el caso de
composiciones sencillas como el plátano y más amplias, siendo el caso
de la frutilla.
• Par el análisis y observación del ADN no es necesario la utilización de
equipos de observación, siendo el caso del microscópico dado que con
conocimientos de biología y química se puede llegar a métodos para
dichas observaciones.
• Los cromosomas presentan el material genético, para que cada ser
vivo tenga ciertas características de genotipo y fenotipo, dado que en
su composición química se encuentran las bases nitrogenadas que
codifican a dichos seres vivos.

5. BIBLIOGRAFIAS. –

• https://www.interempresas.net/Horticola/Articulos/99684-El-tomate-y-su-
genoma.html
• http://labvirtual.iciq.es/es/expcas/ladn-de-les-maduixes/
• http://www7.uc.cl/sw_educ/hort0498/HTML/p179.html
• http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0121-
37092011000100009
• http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/extraccion.pdf

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