Cromatografía líquida HPLC

Análisis Instrumental II

CARRERA QUÍMICA Y LICENCIATURA EN QUÍMICA

Segundo semestre 2023

Integrantes
Maite Olivares Gianecchine
maite.olivares@usach.cl
Scarlett Salas Paredes
scarlett.salas @usach.cl
Docente
Dra. Marlen Gutiérrez Cutiño
 Introducción

En este práctico se determinó mediante Cromatografía Líquida HPLC la concentración de

Ácido Cítrico presente en una muestra de jugo de pera de la marca Aquarius perteneciente
a la empresa Coca-Cola Company.
La cromatografía líquida (HPLC), es una técnica que se utiliza principalmente para separar
compuestos semivolátiles orgánicos de una mezcla; como: Hidrocarburos Poliaromáticos,
Ácido Fólico, Herbicidas, Vitaminas, Formaldehído, etc.
Este método consiste en una fase estacionaria no polar (columna) y una fase móvil. La fase
móvil actúa como el portador de la muestra, en donde los analitos son inyectados en una
corriente de ésta, la cual va impulsada por una bomba de tipo pistón desde el depósito hasta
el detector. Los componentes de la mezcla comienzan a emigrar en función de las
interacciones que produzcan los analitos al interactuar con la columna (Fase Estacionaria);
determinando la separación de los contenidos en la muestra.

Figura 1. Esquema interno de un Cromatógrafo Líquido (HPLC)

Por otra parte, el empleo del tipo de detector dependerá de la naturaleza de los compuestos
a determinar.

Además, cabe destacar que para esta técnica se tienen los siguientes rangos de trabajo para
las muestras:
𝜇𝑔 𝑚𝑔
Muestras líquidas ⁄𝐿 − ⁄𝐿
𝜇𝑔 𝜇𝑔
Muestras sólidas ⁄𝐾𝑔 − ⁄𝑔
 Objetivos

o Conocer y manejar un equipo de Cromatografía Líquida (HPLC).

o Cuantificar el contenido de Ácido Cítrico en una muestra de jugo Aquarius.

Tratamiento de datos

En primera instancia, se prepararon cuatro soluciones a diferentes concentraciones (200,

300, 400 y 500 ppm) de un estándar de Ácido Cítrico de 1000 ppm en matraces de 10 mL.
Paralelamente, se procedió a diluir la muestra de jugo Aquarius con un Factor de Dilución de
10.

Luego, se procedió a seleccionar las condiciones experimentales apropiadas para el uso del
equipo Knauer, las cuales fueron las siguientes:
o Detector UV a 214 y 254 nm
o Columna Lichrosfer RP-100 C18
o Fase móvil Solución Buffert y Acetonitrilo
o Flujo 1 𝑚𝐿⁄𝑚𝑖𝑛

Finalmente, se procedió a inyectar la fase móvil con la finalidad de chequear la línea base,
para luego inyectar por separado en el equipo cada patrón de Ácido Cítrico (Curva de
calibrado) y la muestra problema (Jugo Aquarius); con la finalidad de obtener los
cromatogramas correspondientes, para así extraer el área de la señal cromatográfica.

Tabla 1. Datos obtenidos de los cromatogramas de HPLC para la curva de calibrado.

Concentración Área
[mg/L] [μV × sec]
200 216040
300 332961
400 397810
500 539250
Tabla 2. Dato obtenido del cromatograma de HPLC para la muestra problema.
Área
[μV × sec]
Muestra problema 136627

600000
y = 1052,4x + 2553,4
R² = 0,9939
500000

400000
Área μV×sec

300000

200000

100000

0
0 100 200 300 400 500 600
Concentración (mg/L)

Gráfico 1. Curva de calibrado de área (μV×sec) vs. concentración (mg/L).

Interpolando el dato obtenido de Área de la muestra problema en la ecuación de la recta se

puede obtener la concentración de Ácido Cítrico de la muestra problema:

𝑦 = 1052,4𝑥 + 2553,4

136627 = 1052,4𝑥 + 2553,4

136627 − 2553,4 = 1052,4𝑥

134073,6 = 1052,4𝑥
134073,6
=𝑥
1052,4
𝑚𝑔
127,40 =𝑥
𝐿
Aplicando el factor de dilución correspondiente, se obtiene lo siguiente:

𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛 20 𝑚𝐿

𝐹= = = 10
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑎𝑙𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎 2 𝑚𝐿

Por lo tanto, se tiene en la muestra de jugo Aquarius la siguiente concentración de Ácido

Cítrico:
𝑚𝑔 𝑚𝑔
127,40 × 10 = 1274
𝐿 𝐿

Considerando que Coca-Cola Company no entrega la concentración de Ácido Cítrico en su

jugo de pera Aquarius y solo lo menciona como un ingrediente, no se puede hacer un análisis
de mayor profundidad.

Figura 2. Información nutricional del agua de pera Aquarius entregada por Coca-Cola
Company
 Conclusión

o Se logró con éxito el manejo del equipo de Cromatografía Líquida (HPLC), además de
conocer cada parte del equipo.

o Se logró cuantificar el contenido de Ácido Cítrico en la muestra de jugo Aquarius, pero no se

logró comparar, debido a que la empresa no declara la cantidad existente en su producto.

Bibliografía

o Skoog, D. A. (2001). Principios de análisis instrumental - 5b: Edición. McGraw-Hill

Companies.

o De Laboratorio, A. (2022, September 30). HPLC- definición, principio, partes, tipos, usos,
diagrama. Ciencia Y Datos. https://cienciaydatos.org/ciencia/instrumentacion/hplc-definicion-
principio-partes-tipos-usos-diagrama/
o Miranda, A., & Martín, O. (n.d.). Cromatografía Líquida (HPLC). https://www.ucm.es/.
https://www.ucm.es/data/cont/docs/650-2013-12-02gases%20l%C3%ADquidos.pdf
o Aquarius Pera 6 x 500 ml. - miCoca-Cola.cl. (s/f). Recuperado el 16 de noviembre de 2023,
de Micoca-cola.cl website: https://andina.micoca-cola.cl/aquarius-pera-6-x-500-ml/p