Universidad Católica del

Norte Facultad de Química

y Farmacia
Departamento de ciencias
Farmacéuticas

Identificacion y cuantificacion de medicamentos por

Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)

Profesor: Pablo Pérez

Alumnos : Felipe berna

Diana Carvajal

Asignatura: Análisis Instrumental Farmacéutico

 Introducción

La cromatografía es un procedimiento químico utilizado en todas las ramas de la ciencia, que

permite la separación, identificación, cuantificación, cualificación y determinación de los
componentes químicos individuales de sustancias en mezclas complejas, de acuerdo con la
purificación de compuestos de una manera muy precisa. Estos procedimientos, abarcan varias
técnicas separativas basadas en propiedades físicas de ciertos materiales que, en interacción con
otras sustancias o mezclas de éstas, permite descomponer la mezcla y analizar sus constituyentes,
mediante una fase móvil que consta, según el procedimiento, de un líquido o gas que corre a través
de una superficie y de la fase estacionaria y una fase estacionaria de materia sólida o líquida que
se queda en la misma posición. [1]

La cromatografía líquida (HPLC), es una técnica utilizada para separar los componentes de una
mezcla. Consiste en una fase estacionaria no polar (columna) y una fase móvil. La fase
estacionaria es silica que se ha tratado con RMe2SiCl. La fase móvil actúa de portador de la
muestra. La muestra en solución es inyectada en la fase móvil. Los componentes de la solución
emigran de acuerdo a las interacciones no-covalentes de los compuestos con la columna. Estas
interacciones químicas, determinan la separación de los contenidos en la muestra. La utilización
de los diferentes detectores dependerá de la naturaleza de los compuestos a determinar. [2]

La HPLC es una técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla, basándose en
diferentes tipos de interacciones químicas entre las sustancias analizadas y la columna
cromatográfica. Consiste en un recipiente que contiene la fase móvil y se utiliza una bomba
de alta presión para generar y medir un caudal específico de fase móvil (normalmente
mililitros por minuto), luego con un inyector se introduce la muestra en la corriente de fase móvil
que fluye continuamente y que lleva la muestra a la columna de HPLC. La columna(C18) contiene
la fase estacionaria, la cuál es un material de relleno cromatográfico necesario para realizar
la separación, y finalmente con un detector (en este caso un detector UV/VIS) se ven las
bandas de compuestos separadas a medida que eluyen de la columna de HPLC. La separación
cromatográfica en HPLC es el resultado de las interacciones específicas entre las moléculas de la
muestra en ambas fases, móvil y estacionaria [3]

Lovastatina

Hipótesis:
El análisis cuantitativo por el método de cromatografía líquida de alta resolución reduce tiempo
empleado en análisis, es preciso, exacto en los resultados, por lo que genera resultados confiables
Objetivos General:

Validar prospectivamente una nueva técnica analítica por Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia
(HPLC) para cuantificar la lovastatina
 Metodología

Materiales

● 3 Aforos de 25 ml
● 1 Vaso precipitado
● Filtro
● Jeringa
● Gotero

Reactivos

● Agua desionizada
● Acetonitrilo
● Lovastatina (C24H36O5)
● Ácido Fosfórico 0.01M
Método
1. A Partir de una solución estándar concentrada 1000 ppm se lleva a una solución de 25 ml la cual
lleva una concentración de 10 ug/ml disuelto en la fase móvil (Ácido fosfórico 0,01M con
acetonitrilo en la relación 13:8)
2. Se preparó puntos de curva estándar y se realizó los cálculos para que se preparan soluciones
de 10 ml a diferentes concentraciones 0 ,10, 20 ,30, 40 ,50, 60, 70
3. Se preparó el análisis y la cuantificación indicada se procedió a desgasificar y filtrar con un filtro
del tamaño de un poro 0,5 Um
4. Se tomó 250 uL de la solución de la muestra problema se procede a diluir a 10 ml con solución
de acetonitrilo
5. Para la detección de lovastatina se utilizo un detector UV a una longitud de onda 238 nm con
una columna de C18 la cual presenta un flujo aproximado de 0.6 mL/min
6. Se procede a inyectar la preparación del estándar y registrar el cromatograma en el programa.
7. Para la muestra problema: Inyectar por separado en el cromatógrafo en volúmenes iguales de
la preparación estándar y muestra (20 μL), registrar los cromatogramas y medir las respuestas
correspondientes y sus picos principales. Calcular la cantidad de fármaco contenida en la
muestra.

Resultados

Los datos que se obtuvieron para las concentraciones conocidas son los siguientes:

concentración AU
0 ppm 11.200
10 ppm 224.500
20 ppm 420.100
30 ppm 643.000
40 ppm 901.300
50 ppm 1.221.100
60 ppm 1.432.200
70 ppm 1.738.300
(AU= Área bajo la curva)

Estos datos fueron utilizados para la realización de la curva de calibrado

Curva de calibracion y = 24749x - 42267

R² = 0,995
2.000.000
1.738.300
1.800.000
1.600.000 1.432.200
1.400.000 1.221.100
1.200.000
901.300
1.000.000
AU

800.000 643.000
600.000 420.100
400.000 224.500
200.000
11.200
0
-200.000 0 10 20 30 40 50 60 70 80
Concentracion ppm

La muestra problema del grupo n°7 al ser introducida al HPLC arrojo los siguientes datos:
Cromatograma muestra problema

Espectro muestra problema

Uv-vis Muestra problema

 Pureza muestra problema

también se realizaron 10 lecturas de un blanco y se ordenaron en la siguiente tabla:

n° de lectura AU
1 11.200
2 9.100
3 10.499
4 16.100
5 11.120
6 9.980
7 12.020
8 10.560
9 11.200
10 10.800

Esto se realizo para conocer el promedio y la desviación estándar de estas, con el fin de
conocer los límites de detección (LOD) y cuantificación (LOQ).

Formula desviación estándar

Promedio DEVEST (S)

11.258 1874,23101

Con estos datos se obtuvo el valor de LOD y LOQ a través de la siguiente formula donde m
representa a la pendiente de la ecuación de la recta obtenida anteriormente

Obteniendo así los siguientes valores

LOQ LOD
0,76 0,23

Por ultimo se procedió a calcular la concentración de la muestra problema y para esto se

reemplazó el valor de y por el valor de AU de la muestra problema

AU M. problema
1.409.853
Obteniendo un valor en x de 58,67ppm lo cual seria la concentración de lovastatina en la
muestra problema, agregando este valor al grafico este se representa de la siguiente forma

y = 24749x - 42267
2.000.000
Curva de calibracion R² = 0,995

1.800.000
1.600.000 1.409.853
1.400.000
1.200.000
AU

1.000.000
800.000
600.000
400.000
200.000
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80
Concentracion ppm

Discusión

La regresión lineal realizada no se ajusta muy bien a los datos reales, esto lo podemos
comprobar observando el valor de r2 siendo este de 0,995 lo cual esta por debajo de los
aceptables que rondan entre 0,9997 y 0,9999
Por lo visto en catedra a simple vista podemos obtener una estimación para el valor del
tiempo de retención del cromatograma de la muestra problema

Y en este caso sería de 4min, se podría obtener otros valores como la velocidad lineal
promedio de la fase móvil, factor de retención o el coeficiente de distribución, pero la falta de
datos como el tiempo muerto dificultan la obtención de estos
 Conclusión

En este practico aprendimos el funcionamiento de un equipo de HPLC, además observamos las

piezas que componen este equipo y como las muestras a inyectar tienen que ser procesadas para
un funcionamiento optimo, ya que su manipulación debe ser muy minuciosa porque un error puede
significar que el equipo de HPLC deje de funcionar y los mantenimientos de este tipo de
instrumentación son costosos, y si nos vamos al ámbito laboral esto es una clara causa de despido
inmediato

Bibliografía

1. Lara, S. (2022). ¿Qué es Cromatografía?. Disponible en:

https://cientecinstrumentos.cl/que-es-cromatografia/
2. 1. Miranda A. Martin O. Cromatografía Líquida de alta resolución(HPLC). Universidad
complutense Madrid. [Citado el 21 de junio del 2022] Disponible en
:www.ucm.es/tecnicasgeologicas/cromatografia-liquida-de-alta-resolucion-hplc
3. Nuñez, V. Moreno, J. Quintana, C; & Vera, A. (2022). Informe de laboratorio
cromatografia de líquidos HPCL. Disponible en:
https://www.studocu.com/cl/document/universidad-de-concepcion/analisis-
instrumental/informe-cromatografia-hplc/51682715