MEDIOS DE CULTIVO: CLASIFICACIÓN Y PREPARACIÓN

“Año del Diálogo y la Reconciliación Nacional

Universidad Nacional Agraria La Molina

Departamento de acuicultura e industrias pesqueras

Curso:
Microbiología Pesquera

Práctica:
Medios de Cultivo:
Clasificación y preparación

Profesora:
Ing. Nancy Martínez Ordinola

Alumno:
Yupanqui Quispe, Noemi Ruth
Realización de la práctica:
27/03/18
Entrega del informe:
07/04/18

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I.INTRODUCCION

Los microorganismos pueden ser aislados y propagados por diferentes métodos: su utilización
varía según el propósito y tipo de microorganismo que se deseen aislar. Para su identificación
se utilizan diferentes métodos como son el estudio de su morfología que también incluye sus
reacciones frente a diferentes colorantes y el tipo de estructura que pueden poseer como
endosporas, cápsula, etc.

Así mismos son de gran utilidad sus productos metabólicos ya que muchos de estos son típicos
para cada especie y pueden ser utilizados para su identificación; estas sustancias metabólicas
pueden ser detectadas por medio de una serie de pruebas que se conocen como reacciones
bioquímicas. Para cualquiera de los casos anteriores (morfología, coloración o reacción
bioquímica) se necesitan medios de cultivo adecuadamente seleccionados, preparados y
almacenados.

Independientemente de los medios de cultivo y métodos utilizados, el éxito del trabajo en el

laboratorio de microbiología depende de la adecuada elección y buen uso de los métodos de
esterilización y técnicas asépticas.

Objetivo:

Conocer los diferentes tipos de medios de cultivo existentes para el crecimiento de

microorganismos en el laboratorio.

Identificar los diferentes pasos a seguir en la elaboración de un medio de cultivo.

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II.REVISION BIBLIOGRAFICA

MEDIOS DE CULTIVOS:

El estudio de los microorganismos lleva consigo la utilización de una amplia gama de medios
de cultivo tanto líquidos como sólidos pero previamente es necesario obtener cultivos puros de
aquellos. Cualquier inoculo primario contendrá probablemente varios tipos distintos de
microorganismos que darán lugar a un cultivo mixto. Efectuando una cuidadosa inoculación en
un medio sólido en placa de cultivo se obtienen colonias separadas de cada microorganismo
presente, cada una de las cuales procede en la mayoría de los casos de la multiplicación de un
solo microorganismo. Una sola célula da origen a una población genéticamente homogénea y
es denominada clon, colonia o cultivo puro. Entonces, un medio de cultivo es un sustrato
natural o artificial o una solución de ciertos nutrientes que permiten cultivar los
microorganismos de una manera más eficiente para su posterior uso en el laboratorio.
(Acevedo, DM; Gómez, SJ. 2001)

CLASIFICACIÓN DE CULTIVO
Según (Cerra, 2013)
A continuación clasificaremos los medios de cultivo según su consistencia, su utilización, su
composición y su origen:

1. Según su consistencia (estado físico): Según su consistencia, los medios de cultivo

pueden ser líquidos, sólidos o semisólidos.

1.1. Medios líquidos: Como se presentan en ese estado son llamados también caldos

1.2. Medios sólidos: Se preparan a través de medios líquidos agregándoles un

agente gelificante. Los más utilizados con la gelatina y el agar. La gelatina es una
proteína animal obtenida de los huesos. Tiene la limitación de que es hidrolizada por
muchas bacterias y porque su punto de fusión es bajo. El agar agar es un polímero
de azúcares obtenido de algas marinas. Es una molécula insoluble en agua fría pero
soluble en agua caliente. Una solución de 1,5 % forma un gel firme entre 32 y 39 °C

. 1.3. Medios semisólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos agregándoles

un agente solidificante en una proporción menor que para preparar medios sólidos.
Uno de sus principales usos es para la investigación de la movilidad de los
microorganismos. Poseen 0,15 % de agar. 2. Según su utilización:

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2. Según su utilización los medios de cultivo pueden clasificarse en medios comunes, medios
de enriquecimiento, selectivos, diferenciales, de identificación, de conservación y de transporte.

2.1 Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mínimos para que
pueda producirse el crecimiento de microorganismos que no necesiten
requerimientos especiales. El más conocido es el agar nutritivo o agar común,
resultante de la adición de agar al caldo nutritivo.

2.2. Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las sustancias

nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el
crecimiento de microorganismos exigentes o fastidiosos. Este enriquecimiento se
hace por agregado de por ejemplo: sangre, leche, bilis, huevo, et.

2.3. Medios selectivos: Son aquellos utilizados para favorecer el crecimiento de

ciertas bacterias inhibiendo el desarrollo de otras, ya que poseen una sustancia
inhibitoria. Ejemplo: el agar Mac Conkey posee sales biliares y cristal violeta que
inhiben las bacterias gram positivas.

2.4. Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia características

bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies. Contienen compuestos
químicos o indicadores sobre los que determinados microorganismos adquieren
coloraciones específicas o reaccionan de una manera determinada. Ejemplo: el agar
EMB tiene eosina y azul de metileno que nos permite diferenciar Escherichia coli la
cual forma colonias verdes (con brillo metálico a la luz reflejada), de otras
enterobacterias que forman colonias de color rosa salmón.

2.5. Medios de identificación: Son aquellos que se utilizan para poner en evidencia
alguna cualidad bioquímica que nos permite reconocer la identidad de un
microorganismo. Ejemplo: el Agar Kligler que permite determinar la capacidad de un
microorganismo de atacar un hidrato de carbono específico, con producción o no de
gas, junto con la posible producción de ácido Manual de Microbiología aplicada a las
Industrias Farmacéutica, Cosmética y de Productos Médicos 26 sulfhídrico.

2.6. Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa microbiana.

2.7. Medios de transporte: Se usan por ejemplo para el transporte de muestras

clínicas e hisopos que fueron utilizados en el control de superficies que no pueden
sembrarse inmediatamente. Ejemplo: medio Cary Blair el cual es especialmente útil
para la búsqueda de Vibrio spp. a partir de muestras rectales.

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3. Según su composición: Según su composición los medios de cultivo pueden ser complejos
o indefinidos, sintéticos o definidos, o semisintéticos:

3.1. Medios complejos o indefinidos: Son aquellos cuya composición química exacta
se desconoce ya que son el producto de realizar infusiones y extractos de materiales
naturales complejos. Son medios muy ricos nutricionalmente aunque indefinidos
químicamente. Ejemplo: digeridos de extracto de carne o extracto de levadura.

3.2. Medios sintéticos o definidos: Son aquellos que contienen en su composición

exclusivamente sustancias químicas conocidas y disueltas en agua en proporciones
determinadas, resultando un medio de composición perfectamente definida.

3.3. Medios semisintéticos: Es una mezcla de los medios anteriores. Llevan algunas
sustancias químicas cuya naturaleza y cantidad conocemos, junto con sustancias de
naturaleza y composición indefinidas.

4. Según su origen: Según su origen los medios de cultivo pueden clasificarse en naturales,
sintéticos o semisintéticos

4.1. Naturales: Son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal
o vegetal. Ejemplo: extracto de tejidos o infusiones cuya composición química no se
conoce exactamente.

4.2. Sintéticos: Son los que contienen una composición química cuali y
cuantitativamente definida. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.

4.3. Semisintéticos: Son los medios sintéticos a los cuales se les agregan factores
de crecimiento bajo una forma de extracto orgánico complejo, como por ejemplo
extracto de levadura.

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Determinación de microorganismos
Según Vasallo, AM. 2013

El recuento total de microorganismos, coliformes totales, enterobacterias, Escherichia

coli y Salmonella typhimurium en muestras de leche reconstituida estéril e inoculadas con los
microorganismos de elección para obtener tres niveles de concentración (103, 102, 101 ufc/mL)..

Control de inóculo: En todos los casos se controló la concentración del inóculo realizando
diluciones decimales seriadas 1:10 y sembrando 0,1mL de las diluciones -5, -6, -7 en dos
placas de Triptona Soya Agar (TSA) que se diseminaron con la ayuda de varillas L.

Análisis estadístico: El conteo de unidades formadoras de colonias (ufc) fue transformado a

logaritmo. Posteriormente, se realizó la comparación de los métodos mediante análisis de
varianza simple, correlación de Pearson y regresión lineal.

Fuente: (Vasallo, AM; Reyes, DG; Cambas, AV. 2013)

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MEDIOS DE CULTIVO:

ALOE VERA (ALOE BARBADENSIS MILLER) Y LA PULPA DE PAPEL

COMO GELIFICANTES ALTERNATIVOS DEL AGAR-AGAR PARA LA PROPAGACIÓN IN-

VITRO DE LA VARIEDAD DE PAPA ANDINITA (SOLANUM TUBEROSUM L)

El estudio tiene como propósito evaluar el efecto de la aplicación de Aloe Vera (Aloe
Barbadensis Miller) y la Pulpa de Papel seca como gelificantes alternativos del agar-agar para
la preparación de medios de cultivo para la propagación in-vitro de la variedad de papa Andinita
(SolanumTuberosum L.).

El mismo es realizado bajo el enfoque cuantitativo y paradigma positivista, adoptando un

estudio experimental carácter explicativo. El procedimiento se realizó utilizando como base la
solución Murashige-Skooge (MS) sustituyendo el agar-agar y aplicando técnicas tradicionales
de cultivo in-vitro. La población objeto de estudio estuvo conformada por 300 vitro-plantas de
un lote de papa Andinita (SolanumTuberosum L.) pertenecientes al (INIA) de las cuales se
tomó como muestra 100 vitro-plantas de dicho lote cultivo.

Para el tratamiento se seleccionó un testigo de la vitro-planta el cual tuvo un medio tradicional,

mientras que 4 grupos fueron sometidos a diferentes concentraciones de los medios sustitutos
para el Agar-Agar. Se espera que esta investigación permita generar medios alternos que
contribuyan a la reducción de la utilización del Agar en los medios de cultivos in vitro.
Descriptores: Vitro-plantas, Agar-Agar, papa Andinita, cultivo In vitro

Conclusión de aceptar la hipótesis alterna ya que ambos medios, en sus distintas

concentraciones, mostraron variedad de crecimiento aceptable en cuanto al tamaño de la
planta, de la raíz, tallo y coloración de las mismas. (Marco Oviedo, J; Andreina García, A.
2017).

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III.MATERIALES Y METODOS

a) 300 ML DE AGAR PARA RECUENTO EN PLACA (PCA)

Ingredientes:

Triptona 1.5 g Glucosa 0.3 g

Extracto de levadura 0.75 Agar 4.5

Agua destilada 300 mL

Preparación:

o Con el uso de la balanza analítica y ayuda de una espátula, se pesan los ingredientes
necesarios para la muestra.
o Medir la cantidad de agua destilada con el uso de la probeta.
o La mezcla se realiza en un Matraz ya que se trata de un medio líquido.
o Primero se añade un poco del agua destilada para evitar que los ingredientes
(triptona, glucosa y extracto de levadura) se peguen.
o Al final se agrega el último ingrediente (Agar) y el resto de agua medida.
o Disolver los ingredientes
o Tapona y se calienta en baño maría
o Esteriliza en Autoclave

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Flujograma:

A) 300 ML DE AGAR PARA RECUENTO EN PLACA (PCA)

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b) 200 ML DE AGAR ROJO VIOLETA BILIS (VRBA)

Ingredientes:

VRBA 7.9 gr-

Preparación:

o Matraz de ADE (Agua destilada estéril) 200 mL.

o Se pesa VRBA 7.9gr
o Se mezcla hasta Disolver
o Tapona y se calienta en baño maría
o se coloca en placa Petri calentada con el mechero
o se envuelve de papel aluminio
o Esteriliza en Autoclave

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Flujograma:

B.) 200 ML DE AGAR ROJO VIOLETA BILIS (VRBA)}

PESAR VRBA ADE 200mL

.
+
.

GUARDAR EN ALUMINIO

MEZCLAR

. ENFRIAR

FLAMEAR Y PLAQUETEAR

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IV.CONCLUSIONES

Se logró conocer los Medios de cultivos para el crecimiento de

microorganismos.

Se aprendió los pasos para elaborar un medio de cultivo, sus cálculos

respectivos de las cantidades necesarias para su preparación

V.RECOMENDACIONES

Hemos comprendido del uso razonable de protección en el laboratorio

(mascarilla, gorro), debido a la precaución de evitar contaminarnos con cualquier
agente patógeno en cultivo, así como poder infectar el medio con agentes
externos (cabellos, etc.).

Se recomienda tener cuidado al vaciar los ingredientes ya que si se derrama

causarían variación.

El trabajo en Microbiología se realiza mayoritariamente en la atmósfera que

rodea a una llama de mechero bunsen Es importante trabajar con concentración
y llevar cuidado para no provocar llamaradas ni sufrir quemaduras. Hay que
apagar siempre el mechero bunsen cuando se va a abandonar la mesa de
trabajo.

Antes de comenzar cada práctica es conveniente desinfectar la superficie de

trabajo. Los desinfectantes más habituales para esto son la lejía y el alcohol
(etanol 96°).

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VI.BIBLIOGRAFIA

 Cerra, H; Aversa, N; Carbone, N; Carnevali, S; Chiesa, C; Covo, M;

D’Aquino, M; Degrossi, J; Denoya, C; Domínguez, P; Fernández, MC; Franco,
M; Giampaolo, B; Horak, C; Teves, S; Torno, G; Vázquez, A; Zarankin, E;
Zaresky, A. 2013. Manual de Microbiología aplicada a las Industrias
Farmacéutica, Cosmética y de Productos Médicos. s.l., s.e., 544.
Disponible en:
http://www.aam.org.ar/descarga-archivos/manual-microbiologia-aplicada.pdf

 Acevedo, DM; Gómez, SJ. 2001. Manual de Laboratorio Microbiología.

Universidad del Valle 2001: 2-95.
Disponible en:
http://www.etpcba.com.ar/DocumentosDconsulta/ALIMENTOS-
PROCESOS%20Y%20QUÍMICA/Manual-de-Microbiología.pdf

 Vasallo, AM; Reyes, DG; Cambas, AV. 2013. Evaluación del desempeño del
método RIDA COUNT para la enumeración de bacterias en leche. 35(1): 64-
68.
Disponible en:

http://scielo.sld.cu/pdf/rsa/v35n1/rsa10113.pdf

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VII.CUESTIONARIO:

Presente los ingredientes, forma de preparación, los microorganismos que pueden crecer en el
medio, si es selectivo indicar su agente inhibidor de los siguientes medios de cultivo:

1) Agar Manitol Salt

Ingredientes

El agar manitol salado suele tener la siguiente composición:

 5.0 g/L enzima digestiva de caseína

 5.0 g/L enzima digestiva de tejido animal
 1.0 g/L extracto de carne de vaca
 10.0 g/L D-manitol
 75.0 g/L NaCl
 0.025 g/L rojo de fenol
 15.0 g/L agar

Preparación:
Siembra: Sembrar en superficie un inóculo denso de la muestra por estría.
Incubación: En aerobiosis, a 35-37 °C durante 18-24 horas. Si a las 24 horas las
placas presentan resultado negativo, incubar otras 24 horas.
Microorganismos que pueden crecer:
Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio;
las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos
coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura.
Las colonias sospechosas, se repicarán en un medio sin exceso de cloruro de
sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa.

Agente inhibidor:

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente

de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono
fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentración) es el
agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante, y el rojo fenol
es el indicador de pH (7.4 ± 0.2 at 25 °C).

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2) Agar Baird Parker

El agar Baird Parker suele tener la siguiente composición:

Ingredientes:

Fórmula aproximada* por litro de agua purificada

 Triptona 10,0 g
 Extracto de carne 5,0g
 Extracto de levadura 1,0
 Cloruro de litio 5,0
 Glicina 12,0
 Piruvato sódico 10,0
 Telurito potásico 0,1
 Agar 20,0
 Emulsión de yema de huevo 50,0 mL

Preparación:
Siembra:
-Directa, estriando la superficie del medio de cultivo.
-Si se trabaja con muestras de alimentos y se debe hacer recuento microbiano,
proceder de la siguiente manera: Homogeneizar 10 g de la muestra en 90 ml de
agua peptonada 0.1%. Si es necesario efectuar diluciones.
Inocular una alícuota determinada (ejemplo 0,1 ml) sobre la superficie del medio
de cultivo y esparcirla en toda su superficie.
Incubación
En aerobiosis, a 35-37 ºC durante 24 a 48 horas.

Microorganismos que crecen en el medio

Es un medio moderadamente selectivo y de diferenciación para el aislamiento

y recuento de Staphylococcus aureus en alimentos.

Agente inhibidor
La glicina, el cloruro de litio y el telurito potásico actúan como agentes
selectivos.

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3) Agar Salmonella Shigella

El agar Salmonella Shigella suele tener la siguiente composición:

Ingredientes:

Fórmula aproximada* por litro de agua purificada

 Extracto de carne 5 g
 Caseína 2.5 g
 Digestión enzimática en tejidos animales 5 g
 Lactosa 10 g
 Sal biliar 8.5 g
 Citrato de sodio 8.5 g
 Tiosulfato de sodio 8.5 g
 Citrato férrico 1 g
 Verde brillante 0.00033 g
 Rojo neutral 0.025 g
 Agar 13.5 g
Preparación:

Su pH debe encontrarse a 7.0 ± 0.2 a 25C .Su preparación consta en: a)

suspender 60 g del medio en un litro de agua purificada; b) Moverlo con frecuente
agitación y hervir por un minuto para que disolver el medio completamente; c) no
llevarlo al autoclave.

Microorganismos que crecen en el medio

El agar de Salmonella Shigella es usado para el aislamiento de la Salmonella sp

y algunas de las cepas de la Shigella sp.

Agente inhibidor

La selectividad está dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el
desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el
desarrollo invasor del Proteus spp.

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4) Agar hierro tres azucares

El agar hierro tres azucares suele tener la siguiente composición:

Ingredientes:

Fórmula aproximada* por litro de agua purificada

 Extracto de carne 3,0 g

 Extracto de levadura 3,0 g
 Peptona 15,0 g
 Proteosa-peptona 5,0 g
 Lactosa 10,0 g
 Sacarosa 10,0 g
 Glucosa 1,0 g
 Sulfato ferroso 0,2 g
 Cloruro de sodio 5,0 g
 Tiosulfato de sodio 0,3 g
 Rojo fenol 0,024 g
 Agar 12,0 g

Preparación:

Su preparación consta de disolver el medio, calentar hasta la ebullición, repartir

en tubos y esterilizar en autoclave por 15 minutos a 121ºC (15 libras de presión).

Microorganismos que crecen en el medio

Esta prueba se recomienda para la identificación de patógenos entéricos gram

negativos. Se emplea para detectar la fermentación de lactosa, sacarosa y
glucosa, con formación de ácido y gas, y también para detectar producción de
ácido sulfhídrico. En este medio la concentración de glucosa es la décima parte
de la concentración de la lactosa y la sacarosa, lo cual permite determinar cuándo
éste es el único glúcido fermentado.

Agente inhibidor

La selectividad está dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el
desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el
desarrollo invasor del Proteus spp.

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5) Agar lisina hierro

El agar lisina hierro suele tener la siguiente composición:

Fórmula aproximada* por litro de agua purificada

 Digerido pancreático de gelatina 5,0 g

 Extracto de levadura 3,0 g
 Dextrosa 1,0 g
 L-Lisina 10,0 g
 Citrato férrico de amonio 0,5 g
 Tiosulfato sódico 0,04 g
 Púrpura de bromocresol 0,02 g
 Agar 13,5 g
Este agar favorece la diferenciación de bacilos entéricos según su capacidad de
descarboxilación y desaminación de lisina y de producción de ácido sulfhídrico.
Está diseñado para uso con otros medios (por ejemplo, agar triple azúcar hierro)
en esquemas de identificación adecuados.

Preparación:

Su preparación consta de: a) Inocular muestras representativas con los cultivos

enumerados a continuación. Inocular las muestras insertando una aguja de
inoculación en la base y extendiendo la muestra en el agar inclinado. Además,
utilizar diluciones 10-1 de cultivos de caldo de soja Trypticase de 18 – 24 h de los
organismos enumerados a continuación (incubar los tubos con las tapas flojas a
35 ± 2 °C en una atmósfera aerobia); b) Examinar si los tubos después de 24 h
muestran indicios de crecimiento y reacciones.

Microorganismos que crecen en el medio

Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente

Salmonella spp., basado en la decarboxilación y desaminación de la lisina y en la
producción de ácido sulfhídrico.

El indicador de pH, púrpura de bromocresol, cambia a color amarillo a un pH de

5,2 o inferior, y presenta color morado a un pH de 6,8 o superior. El citrato férrico
amónico y el tiosulfato sódico son indicadores de formación de ácido sulfhídrico.
La lisina es el sustrato para uso en la detección de enzimas, lisina descarboxilasa
y lisina deaminasa.

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 MEDIOS DE CULTIVO: CLASIFICACIÓN Y PREPARACIÓN

6) Caldo Selenito
El caldo selenito suele tener la siguiente composición:

Ingredientes:

Fórmula aproximada* por litro de agua purificada

 Peptona 5 g
 Lactosa 4 g
 Fosfato de sodio 10 g
 Selenito de sodio 4 g
Su pH final debe ser 7.0 ± 0.2

Preparación:

Su preparación consta de: a) Suspender 23 g del polvo en un litro de agua destilada;

b) Mezclar bien y calentar ligeramente hasta su disolución completa. Evite el
calentamiento excesivo.
No esterilizar en autoclave. c) Distribuir en tubos estériles un volumen no menor a
5 ml. Se recomienda guardar en heladera si no se usa de inmediato.

Microorganismos que crecen:

Medio de enriquecimiento para el aislamiento de Salmonella sp a partir de

materiales clínicos, especialmente heces. Este caldo selectivo favorece el
crecimiento de Salmonella sp.

Agente Inhibidor

En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado

desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, el selenito de
sodio inhibe la flora Gram positiva y la mayoría de la flora entérica excepto
Salmonella spp. Durante las primeras 8-12 horas de incubación.

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 MEDIOS DE CULTIVO: CLASIFICACIÓN Y PREPARACIÓN

7) Agar Bismuto sulfito

El agar bismuto sulfito suele tener la siguiente composición:

Ingredientes:

Fórmula aproximada* por litro de agua purificada

 Peptona bacteriológica 10 g
 Fosfato Disodico 4 g
 Indicador bismuto sulfito 8 g
 Sulfato Ferroso 0.30 g
 Extracto de Carne 5.00 g
 Verde Brillante 0.025 g
 Dextrosa 5 g
 Agar Bacteriológico 20 g
Su pH final se encuentra en 7.5 ± 0.2 a 25ºC

El agar Bismuto Sulfito es un medio altamente selectivo, recomendado para

aislamiento de Salmonella sp, particularmente Salmonella thyphi, en heces.

Preparación:

Su preparación consta en suspender 52,3 gramos del medio en un litro de agua

destilada. Mezclar bien y calentar agitando continuamente. Hervir durante un minuto
o hasta que el medio se disuelva por completo, evitando el sobrecalentamiento. No
autoclavar. Dejar que el medio se enfríe a 45ºC y sin dejar de agitar verter en placas
de Petri. El color del medio preparado es blanco opaco con tinte verde. El medio
preparado en placa debe conservarse entre 8-15°C. El medio deshidratado debe
ser homogéneo, libre de floculos y de color beige claro.

La Dextrosa es el carbohidrato fermentable y provee de carbono y energía.

Microorganismos que crecen en el medio

Agar Bismuto Sulfito es un medio altamente selectivo, recomendado para

aislamiento de Salmonella spp, particularmente Salmonella thyphi, en heces

Agente Inhibidor:

El indicador de Bismuto sulfito y el verde Brillante son inhibidores de bacterias

Gram positivas y de algunas bacterias del grupo coliformes. El Agar bacteriológico
es el agente solidificante. El sulfato ferroso se incluye para la producción de H 2S.
Cuando el H2S está presente, el hierro es precipitado dando colonias positivas
características de color marrón a negro con brillo metálico.

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 MEDIOS DE CULTIVO: CLASIFICACIÓN Y PREPARACIÓN

8) Caldo Tetrationato
El caldo tetrationato suele tener la siguiente composición:

Ingredientes:

Fórmula aproximada* por litro de agua purificada

 Peptona 5 g
 Sales biliares 1 g
 Carbonato de calcio 10 g
 Tiosulfato de sodio 30 g
 Solución iodo iodurado: iodo 6 g, ioduro de potasio 5 g, agua 20 mL.
Su pH final: 8.4 ± 0.2

Preparación:

La preparación consta de suspender 46 g del polvo en 1 litro de agua destilada.

Mezclar vigorosamente y llevar a ebullición. Enfriar a 45°C o menos. Agregar 20 ml de
solución iodurada. Mezclar y distribuir 10 ml por tubo, en tubos estériles. No debe
calentarse luego de agregar la solución iodada. El medio base puede mantenerse a
4°C, dura varios meses, pero una vez agregada la solución iodada debe usarse en el
mismo día.

Microorganismos que crecen:

El caldo tetrationato es utilizado para el enriquecimiento selectivo de Salmonella sp a

partir de heces, orina, alimentos y otros materiales de importancia sanitaria. El medio
de cultivo contiene peptona que provee los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano, y carbonato de sodio que neutraliza y absorbe metabolitos tóxicos.

Agente Inhibidor

La selectividad está dada por la presencia de tiosulfato de sodio, tetrationato (generado

en el medio por el agregado de la solución iodo-iodurada) y sales biliares, los cuales
permiten el desarrollo de bacterias que contienen la enzima tetrationato reductasa e
inhiben el desarrollo de la flora acompañante. Para evitar la proliferación de especies
de Proteus sp, se recomienda agregar 40 mg/l de Novobiocina, antes de la solución
iodada.

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 MEDIOS DE CULTIVO: CLASIFICACIÓN Y PREPARACIÓN

9) Caldo lactosa, verde brillante bilis (caldo BRILA)

El caldo lactosa suele tener la siguiente composición:

Ingredientes:

Fórmula aproximada* por litro de agua purificada

 Bilis de buey deshidratada 20 g.

 Lactosa 10 g
 Peptona 10 g
 Verde brillante 0.0133 g

Su pH final: 7.2 ± 0.2

Preparación:

Su preparación consta de suspender 40 g del polvo deshidratado por litro de agua

destilada. Disolver y distribuir 10 ml por tubo con campanita de Durham. Preparar
además, el medio a doble concentración. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15
minutos.

Microorganismos que crecen:

Este medio está recomendado para el recuento de coliformes totales y fecales, por la
técnica del número más probable.

Agente Inhibidor

En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado

desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben
el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepción de coliformes,
y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable. Es una propiedad del grupo coliforme,
la fermentación de la lactosa con producción de ácido y gas.

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 MEDIOS DE CULTIVO: CLASIFICACIÓN Y PREPARACIÓN

10) Caldo Escherichia coli

El caldo Escherichia coli suele tener la siguiente composición:

Ingredientes:

Fórmula aproximada* por litro de agua purificada

 Cloruro de sodio 5 g
 Lactosa 5 g
 Fosfato dipotásico 4 g
 Sales biliares 1.5 g
 Fosfato monopotásico 1.5 g
 Peptona biotriptasa 20 g
Su pH es de 6.9 ± 0.2

Preparación:

Su preparación consta de rehidratar 37 g del medio en un litro de agua destilada.

Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de
ebullición durante 1 minuto para disolverlo por completo. Cuando la porción de la
muestra a analizar es de 10 ml preparar el medio a concentración doble. Distribuir
en tubos de ensayo. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 15
minutos. Conservar en refrigeración de 2º a 8ºC.

Microorganismos que crecen:

Este medio de cultivo es selectivo para determinar la presencia de organismos

coliformes y Escherichia coli a partir de diversas muestras.

La lactosa es la fuente de energía para los microorganismos lactosa positiva,

especialmente coliformes y Escherichia coli con producción de gas

Agente Inhibido:

. Las sales biliares inhiben el crecimiento de Gram positivos. La peptona de caseína

proporciona los nutrientes necesarios para el desarrollo de las bacterias y el cloruro
de sodio mantiene el equilibrio osmótico. De acuerdo al volumen de la muestra en
estudio, se siembra en el medio de cultivo. Si es de 1 ml, se incorpora directamente
al Caldo de concentración sencilla y si es mayor, al Caldo de concentración doble
para que la concentración final sea la adecuada. Incubar 48 h a 35ºC.

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 MEDIOS DE CULTIVO: CLASIFICACIÓN Y PREPARACIÓN

11) Agar Tiosulfato Citrato bilis (Sacarosa)

El agar Tiosulfato Citrato bilis suele tener la siguiente composición:

Inhibidor:

Fórmula aproximada* por litro de agua purificada

 Extracto de levadura 5 g
 Peptona de carne 5 g
 Tripteína 5 g
 Citrato de sodio 10 g
 Tiosulfato de sodio 10 g
 Bilis de buey 8 g
 Sacarosa 20 g
 Cloruro de sodio 10 g
 Citrato férrico 1 g
 Azul de bromotimol 0.04 g
 Azul de timol 0.04 g
 Agar 15 g
Su pH final es de 8.6 ± 0.2

Preparación:

Su preparación consta de suspender 89 g del polvo en un litro de agua destilada.

Calentar hasta ebullición y hervir de 1 a 2 minutos. No autoclavar. Distribuir en
placas de Petri estériles.

Microorganismos que crecen:

Es un medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae, Vibrio

parahemolyticus y otras especies de Vibrio a partir de heces, agua y alimentos
contaminados. También es conocido como Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa,
o como Agar Selectivo para Vibrios.

En el medio de cultivo, el extracto de levadura, la peptona de carne y la tripteína

aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano.

Agente Inhibidor:

Es este, el medio selectivo más adecuado para el aislamiento de las especies de

Vibrio, e inhibidor para la mayoría de las enterobacterias. Esta inhibición se basa
en las altas concentraciones de tiosulfato y citrato, la presencia de bilis y un pH
fuertemente alcalino. La degradación de la sacarosa es variable entre las especies
de Vibrio y las colonias son verdes para las cepas que no la utilizan y amarillas
para aquellas que producen ácido a partir de este azúcar.

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 MEDIOS DE CULTIVO: CLASIFICACIÓN Y PREPARACIÓN

12) Caldo Laurel sulfato triptosa

El caldo Laurel sulfato triptosa suele tener la siguiente composición:

Inhibidor:

Fórmula aproximada* por litro de agua purificada

 Triptosa 20 g
 Lactosa 5 g
 Cloruro de sodio 5 g
 Lauril sulfato de sodio 0.1 g
 Fosfato dipotásico 2.75 g
 Fosfato monopotásico 2.75 g
Su pH final: 6.8 ± 0.2

Preparación:

Su preparación consta en suspender 35,6 g del polvo en 1 litro de agua destilada.

Dejar reposar 5 minutos. Calentar a ebullición hasta la disolución total. Distribuir en
tubos conteniendo tubos de fermentación. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos
a 121°C.

Microorganismos que crecen:

Este medio es rico en nutrientes, que permite un rápido desarrollo de los

microorganismos fermentadores de la lactosa, aún de los fermentadores lentos.

La triptosa es la fuente de nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos, la lactosa es

el hidrato de carbono fermentable, las sales de fosfato proveen un sistema buffer, y el
cloruro de sodio mantiene el balance osmótico

Agente Inhibidor:

Es un medio selectivo, ya que el lauril sulfato de sodio inhibe el desarrollo de la flora

acompañante. Por la fermentación de la lactosa, se produce ácido y gas.

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