Protocolo Pure Link 1 24.en - Es

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guía del usuario
Enlace puro®Kits de ADN genómico

Para la purificación del ADN genómico.
Números de catálogoK1820-01, K1820-02, K1821-04
Número de pieza del documento

25-1012 Número de publicación
MAN0000601 Revisión2.0
Sólo para uso en investigación. No debe utilizarse en los procedimientos de diagnóstico.

2
Contenido
Procedimiento del Mini Kit para usuarios experimentados.................................... ................................................. ........4
Procedimiento del kit 96 para usuarios experimentados ................................. ................................................. ............5
Contenido y almacenamiento del kit .................................. ................................................. ................................7
Introducción ................................................. ................................................. ................................9

Descripción general................................................. ................................................. ................................................. ....9
Métodos ................................................. ................................................. ................................11

Reglas generales ................................................ ................................................. ................................11
Procedimiento de purificación utilizando el mini kit ................................. ................................................. .........14
Resumen experimental ................................................. ................................................. ................................14

Preparación de lisados: minikit................................................. ................................................. .........................15
Procedimiento de purificación mediante columnas de centrifugación ................................. ................................................23
Procedimiento de purificación utilizando el kit 96 ................................. ................................................. ..............25
Resumen experimental ................................................. ................................................. ................................25

Preparación del kit de lisados 96 ................................. ................................................. ................................26
Procedimiento de purificación utilizando placas de 96 pocillos ................................. ................................................34
Resultados y solución de problemas ................................................ ................................................. ........................39
Análisis del rendimiento y la calidad del ADN ................................. ................................................. ............39

Resultados previstos ................................................ ................................................. ........................................40
Solución de problemas ................................................. ................................................. ........................................41
Apéndice................................................. ................................................. ................................43

Seguridad ................................................. ................................................. ................................................. ........43
Productos accesorios................................................ ................................................. ................................44
Apoyo técnico ................................................ ................................................. ........................................45
Notificación al comprador ................................................ ................................................. ................................46
3
Procedimiento del minikit para usuarios experimentados
Introducción Esta hoja de referencia rápida se incluye para usuarios experimentados de PureLink.®
Mini kit de ADN genómico. Para obtener más detalles, consulte este manual.
Paso Procedimiento
Preparando Prepare el lisado utilizando un protocolo de preparación de muestras adecuado de la siguiente manera:
lisados Muestra Cantidad Número de página.
Células, tejidos y cola de 5×106células, ≤25 mg de tejido (≤10 mg de bazo), 0,5–1 dieciséis
ratón de mamíferos. cm de cola

Sangre ≤1 ml de sangre no nucleada (se necesitan 17
reactivos adicionales, consulte la página 17)
5-10 μL de sangre nucleada ≤2

bacterias × 109células 18
Células de levadura ≤5 × 107células 19
hisopo bucal Hisopo bucal humano 19
tejido FFPE 1 a 8 secciones de 5 a 15 μm de espesor de 20
aproximadamente 20 a 50 mm2área
oragene™saliva preservada ≤1ml 21

Unión de ADN 1. Eliminar un PureLink®Haga girar la columna en un tubo de recolección del paquete.
2.Cargael lisado (~640 μL) con tampón de lisis/unión y etanol preparado como se describe
en las páginas 16 a 21 de PureLink®Columna de giro.
3. Centrifugar la columna a 10.000 ×gramodurante 1 minuto a temperatura ambiente.
4. Deseche el tubo de recolección y coloque la columna de centrifugación en un tubo de recolección nuevo.
5. Proceder aLavado de ADN.

Lavado de ADN 1.Lavarla columna con 500 μL de tampón de lavado 1 preparado con etanol (página 23).
2. Centrifugar la columna a 10.000 ×gramodurante 1 minuto a temperatura ambiente. Deseche el tubo de
recolección y coloque la columna en un tubo de recolección nuevo.
3.Lavarla columna con 500 μL de Wash Buffer 2 preparado con etanol (página 23).
4. Centrifugar la columna a máxima velocidad durante 3 minutos a temperatura ambiente.
Deseche el tubo de recolección.
5. Proceder aElución de ADN.

Elución de ADN 1. Coloque la columna de centrifugación en un tubo de microcentrífuga estéril de 1,5 ml.
2.eluirel ADN con 25–200 μL de PureLink®Tampón de elución genómica. VerParámetros de elución

(página 13) para elegir un volumen de elución adecuado para sus necesidades.
3. Incubar la columna a temperatura ambiente durante 1 minuto.
4.Centrifugar la columna a máxima velocidad durante 1 minuto a temperatura ambiente. El

tubo contiene ADN purificado.
5. Si lo desea, realice una segunda elución para aumentar la recuperación, lo que reduce la
concentración general.El tubo contiene ADN purificado.Retire y deseche la columna.
6. Utilice el ADNg purificado para la aplicación posterior deseada. Guarde el ADNg purificado a 4 °C para un
almacenamiento a corto plazo o a –20 °C para un almacenamiento a largo plazo.
4
Procedimiento del kit 96 para usuarios experimentados
Introducción Esta hoja de referencia rápida se incluye para usuarios experimentados de PureLink.®96 Kit de ADN
genómico. Para obtener más detalles, consulte este manual.
Paso Procedimiento
Preparando Prepare el lisado utilizando un protocolo de preparación de muestras adecuado de la siguiente manera:
lisados Muestra Cantidad Número de página.
Células, tejidos y cola de 5×106células, ≤25 mg de tejido (≤10 mg de bazo), 0,5–1 27, 28
ratón de mamíferos. cm de cola
Sangre ≤200 μL de sangre no nucleada 5– 27
10 μL de sangre nucleada ≤2 × 109
bacterias células 30
Células de levadura ≤5 × 107células 31
tejido FFPE 1 a 8 secciones de 5 a 15 μm de espesor de 32
aproximadamente 20 a 50 mm2área
oragene™hisopo bucal de saliva ≤200 μL 33

conservada Hisopos bucales humanos 33
Purificación 1. Ensamble el PureLink®Placa de unión de ADNg en una placa de 96 pocillos profundos nueva o usada.
usando
2. Transfiera cada lisado (~640 μL) a un pocillo de PureLink.®Placa de unión de ADNg utilizando una
centrifugación pipeta multicanal. Cubra los pocillos no utilizados con cinta de aluminio.
3. Centrifugar las placas apiladas a ≥2250 ×gramodurante 5 a 10 minutos.
4. Deseche el flujo y vuelva a montar la placa de unión en la placa de 96 pocillos profundos.

5. Agregue 500 μL de tampón de lavado 1 preparado con etanol (página 35) en cada pocillo de la
placa de unión.
6. Centrifugar las placas apiladas a ≥2250 ×gramodurante 5 a 10 minutos.
7. Deseche el flujo y vuelva a montar la pila de placas.

8. Agregue 500 μL de tampón de lavado 2 preparado con etanol (página 35) en cada pocillo de la
placa de unión.
9. Centrifugar las placas apiladas a ≥2250 ×gramodurante 15 minutos para secar completamente la
membrana. Nota:Para asegurar el completo secado de la membrana, no sellar la placa.
10. Deseche el flujo y vuelva a montar la placa de unión en unnuevoPlaca de 96 pocillos profundos.
11. Agregue 50–200 µL de PureLink®Tampón de elución genómica al centro de la membrana de cada

pocillo e incube la placa durante 1 minuto a temperatura ambiente.
Nota:RevisarParámetros de elución(página 13) para elegir un volumen de elución adecuado.
12. Centrifugar las placas apiladas a ≥2250 ×gramodurante 3 minutos.

El ADNg purificado se eluye en la placa Deep Well.
13. Si lo desea, realice una segunda elución para aumentar la recuperación, lo que reduce la concentración
general.
14. Utilice el ADNg purificado para la aplicación posterior deseada. Para almacenar el ADNg purificado, cubra los pocillos con una
cinta de aluminio y guárdelos a 4 °C para un almacenamiento a corto plazo o a –20 °C para un almacenamiento a largo
plazo.
5
Procedimiento del kit 96 de usuarios experimentados,Continuado
Paso Procedimiento
Purificación 1. Monte el colector de vacío según las instrucciones del fabricante.

usando vacío Breves instrucciones para montar el PureLink®Colector de vacío con adaptadores y
colector PureLink®La placa de lavado genómica para evitar la contaminación cruzada se describe
en la página 37.
2. Coloque el PureLink®Placa de unión de ADNg en el colector de vacío.
3. Transfiera los lisados (~640 μL) de cada pocillo de la placa para pozos profundos a un pocillo nuevo en la placa de
unión. Cubra los pocillos no utilizados con cinta de aluminio.
4. Aplique vacío a temperatura ambiente hasta que el lisado pase completamente a través de la
placa de filtro y libere el vacío.
5. Agregue 1 ml de tampón de lavado 1 preparado con etanol (página 35) en cada pocillo de la
placa de unión.
6. Aplicar vacío durante 2 minutos a temperatura ambiente. Liberar el vacío.

7. Agregue 1 ml de tampón de lavado 2 preparado con etanol (página 35) en cada pocillo de la
placa de unión.
8. Aplicar vacío durante 2 minutos a temperatura ambiente. Liberar el vacío.

9. Desmonte el colector para retirar y desechar la placa de lavado. Golpee la placa de unión sobre
toallas de papel para eliminar cualquier residuo de tampón de lavado de las boquillas. Vuelva a
ensamblar el colector con la placa de unión.
10. Aplicar vacío durante 10 minutos a temperatura ambiente para secar la membrana. Liberar el
vacío.
11. Desmonte el colector para retirar la bandeja de residuos. Deseche el contenido de la bandeja de residuos.
12. Monte el colector de vacío para elución según las instrucciones del fabricante. Consulte la página 38
para obtener instrucciones breves sobre cómo ensamblar varios colectores de vacío con diferentes
adaptadores y placas de elución.
13. Coloque el PureLink®Placa de unión de ADNg en el colector de vacío.

14. Agregue 100–200 μL de PureLink®Tampón de elución de ADNg al centro de la membrana e
incubar la placa durante 1 minuto a temperatura ambiente.
Nota:RevisarParámetros de eluciónen la página 13 para elegir un volumen de elución adecuado.
15. Aplicar vacío durante 2 minutos a temperatura ambiente. Liberar el vacío. Desmonte el
colector de vacío para retirar la placa de elución.El ADNg purificado se eluye en la placa de
elución.
16. Utilice el ADNg purificado para la aplicación posterior deseada. Para almacenar el ADNg
purificado, cubra los pocillos con una cinta de aluminio y guárdelos a 4ºC por un período corto o
– 20°C para almacenamiento a largo plazo.
6
Contenido y almacenamiento del kit
Antes de utilizar este producto, lea y comprenda la información proporcionada en el apéndice
-- "Seguridad" de este documento.
Tipos de productosEste manual se suministra con los siguientes productos:

Producto Cantidad Número de catálogo
Enlace puro®Mini kit de ADN genómico 50 preparaciones K1820-01

250 preparaciones K1820-02
Enlace puro®Kit de ADN genómico 96 4 × 96 preparaciones K1821-04
Envío y Todos los componentes del PureLink®Los kits de ADN genómico se envían a
Almacenamiento temperatura ambiente.
Al recibirlos, almacene todos los componentes a temperatura ambiente.
Nota:La solución de Proteinasa K y RNasa A son estables durante 1 año cuando se almacenan a
temperatura ambiente. Para almacenamiento a largo plazo (>1 año) o si la temperatura ambiente es
> 25ºC almacenar la solución de Proteinasa K y RNasa A a 4ºC.
Enlace puro® Los componentes incluidos en PureLink®Los minikits de ADN genómico se enumeran
ADN genómico en la siguiente tabla.
Contenido del minikit
Componente K1820-01 K1820-02

50 preparaciones 250 preparaciones
Enlace puro®Lisis genómica/tampón de unión 10ml 50 mililitros
Enlace puro®Tampón de digestión genómica 9ml 45ml

Enlace puro®Tampón de lavado genómico 1 10ml 50 mililitros
Enlace puro®Tampón de lavado genómico 2 7,5 ml 37,5 ml

Enlace puro®Tampón de elución genómica 10ml 50 mililitros
(Tris-HCl 10 mM, pH 9,0, EDTA 0,1 mM)

ARNasa A (20 mg/ml) en Tris-HCl 50 mM, pH 8,0, 1 mililitro 5ml
EDTA 10 mM
Proteinasa K (20 mg/mL) en tampón de almacenamiento 1 mililitro 5ml
(patentado)
Enlace puro®Columnas de giro con tubos recolectores 50 cada uno 5 × 50 cada uno
Enlace puro®Tubos de recolección (2,0 ml) 100 5×100
7
Contenido y almacenamiento del kit,Continuado
Enlace puro®96 Los componentes incluidos en PureLink®96 Genomic DNA Kit se enumeran en la
Kit de ADN genómico siguiente tabla.
Contenido Nota:Es posible que algunos reactivos del kit se proporcionen en exceso de la cantidad necesaria.
Componente Cantidad
Enlace puro®Lisis genómica/tampón de unión 80ml
Enlace puro®Tampón de digestión genómica 70ml
Enlace puro®Tampón de lavado genómico 1 2 × 100 ml
Enlace puro®Tampón de lavado genómico 2 2 × 75ml
Enlace puro®Tampón de elución genómica 160ml
(Tris-HCl 10 mM, pH 9,0, EDTA 0,1 mM)
ARNasa A (20 mg/ml) en Tris-HCl 50 mM, pH 8,0, EDTA 10 mM 8ml
Proteinasa K (20 mg/mL) en tampón de almacenamiento (patentado) 8ml
Enlace puro®Placa de unión al ADN genómico 4 platos
Enlace puro®Placa de lavado de ADN genómico 4 platos
Placa de 96 pocillos profundos 2 × 6 platos
Cinta de aluminio 20/paquete
8
Introducción
Descripción general
Introducción El enlace puro®Los kits de ADN genómico permiten una purificación rápida y eficiente del
ADN genómico. El kit está diseñado para aislar eficazmente ADN genómico de células y
tejidos de mamíferos, cola de ratón/rata, muestras de sangre, hisopos bucales, bacterias,
levaduras, tejido FFPE (fijado con formalina e incluido en parafina) y Oragene.™
saliva preservada. Después de preparar los lisados, el ADN se purifica rápidamente a partir de los lisados
mediante un procedimiento de centrifugación basado en columna giratoria o un aislamiento de alto rendimiento
utilizando placas de 96 pocillos con un colector de vacío o estaciones de trabajo automatizadas para el manejo de
líquidos.
El ADN aislado tiene un tamaño de 20 a 50 kb y es adecuado para PCR, digestión con enzimas de
restricción y transferencia Southern.
Resumen del sistema El enlace puro®Los kits de ADN genómico se basan en la unión selectiva del ADN a una
membrana a base de sílice en presencia de sales caotrópicas.
El lisado se prepara a partir de una variedad de materiales de partida, como tejidos, células o sangre.
Las células o tejidos se digieren con proteinasa K a 55 °C utilizando una formulación de tampón de
digestión optimizada que ayuda a la desnaturalización de las proteínas y mejora la actividad de la
proteinasa K. Cualquier ARN residual se elimina mediante digestión con RNasa A antes de unir las
muestras a la membrana de sílice.
El lisado se mezcla con etanol y PureLink.®Tampón de unión genómica que permite una alta unión
al ADN PureLink®Columna de Centrifugado (Mini Kit) o Placa de Encuadernación (Kit 96). El ADN
se une a la membrana a base de sílice en la columna o placa y las impurezas se eliminan mediante
un lavado minucioso con tampones de lavado. Luego, el ADN genómico se eluye en una solución
baja en sal.Tampón de elución.
Ventajas Las ventajas de utilizar PureLink®Los kits de ADN genómico son:

• Purificación rápida y eficiente de ADN genómico a partir de una variedad de muestras,
como células y tejidos de mamíferos, muestras de sangre, colas de ratones, hisopos
bucales, bacterias, levaduras, tejidos FFPE y Oragene.™saliva preservada
• Diseñado para purificar rápidamente ADN de alta calidad mediante columna de centrifugación o formato de placa de
96 pocillos.
• Automatización mediante sistemas robóticos estándar (kit 96) sin contaminación cruzada de
muestras
• Lisis simple de células y tejidos con Proteinasa K sin necesidad de lisis

mecánica alguna
• Contaminación mínima por ARN
• Rendimiento confiable del ADN purificado en PCR, digestión con enzimas de
restricción y transferencia Southern
9
Descripción general,Continuado
Miniequipo Material de partida: Varía (consulte la página

Especificaciones Capacidad vinculante: 12) ~0,5 mg de ácido
Capacidad del depósito de columna: nucleico 800 μL
Capacidad del tubo de recolección: 2,0 ml (~700 μL sin columna de contacto)

Compatibilidad con centrífuga: Capaz de centrifugar >10 000 ×gramo 25–200
Volumen de elución: µL
Rendimiento de ADN: Varía (consulte la página
Tamaño del ADN: 40) 20–50 kb
Equipo 96 Dimensiones: Huella estándar de la SBS (Sociedad para el

Especificaciones Detección de Biomoléculas)
Material de partida: Varía (consulte la página
Capacidad vinculante: 12) ~0,5 mg de ácido
Capacidad de la placa de unión: nucleico 1 ml
Capacidad de la placa de pozo profundo: 1,0 ml (0,75 ml sin boquillas en contacto) Capaz
Compatibilidad con centrífugas: de centrifugar a ≥2250 ×gramo Profundidad del
cubo 5,75 cm 50–200 μL
Volumen de elución:
Rendimiento de ADN: Varía

Tamaño del ADN: 20-50 kb
10
Métodos
Reglas generales
Introducción Directrices generales para utilizar PureLink®Los kits de ADN genómico se describen en las
siguientes secciones. Revise esta sección antes de iniciar el procedimiento de purificación.
Elija el protocolo de purificación adecuado según el tipo de kit que haya

adquirido:
Equipo Número de página.
Enlace puro®Minikits de ADN genómico (K1820-01, K1820-02) 14

PureLink®Kit de ADN genómico 96 (K1821-04) 25
Para obtener ADN genómico de alta calidad, siga las pautas recomendadas en la
página 11.
Siga las recomendaciones enumeradas para obtener los mejores resultados:

-
• Mantenga un ambiente estéril al manipular ADN para evitar cualquier
contaminación por ADNasas.
--
• Asegúrese de que no se introduzcan ADNasas en las soluciones estériles del kit.

• Asegúrese de que todo el equipo que entre en contacto con el ADN sea estéril, incluidas las
puntas de pipeta y los tubos de microcentrífuga.
• No agite las muestras durante más de 5 a 10 segundos en cada paso de agitación

para evitar un corte extenso del ADN.
• Para minimizar la degradación del ADN, realice rápidamente los pasos de preparación del lisado y
evite la congelación y descongelación repetidas de las muestras de ADN.
ARNasa A La digestión con ARNasa A se realiza durante la preparación de la muestra para degradar el ARN
Digestión presente en la muestra y minimizar la contaminación por ARN en la muestra de ADN purificada. La
contaminación por ARN también aumenta el contenido de ADN medido a 260 nm.
La RNasa A se suministra con el kit y se incluye un paso de digestión de la RNasa durante los
protocolos de preparación de muestras.
Si el contenido de ARN de la muestra es mínimo (p. ej., cola de ratón) y hay contaminación por
ARN no esSi no interfiere con cualquier aplicación posterior del ADN purificado, puede omitir el
paso de digestión con RNasa durante la preparación de la muestra.
Proteinasa K La proteinasa K se utiliza para la lisis eficaz de tejidos/células. La digestión con proteinasa K se realiza
Digestión utilizando una formulación de tampón optimizada, PureLink®Tampón de Digestión Genómica, para
una óptima actividad enzimática.
11
Reglas generales,Continuado
Cantidad de muestra Existen diferentes protocolos para la preparación de lisados dependiendo del
material de partida (muestra). Según su muestra, elija un protocolo de preparación
de lisado adecuado de la siguiente tabla.
El enlace puro®Los kits de ADN genómico son adecuados para aislar ADN genómico de una variedad
de muestras utilizando la cantidad de muestra recomendada (consulte la tabla a continuación).
Nota:Si comienza con una cantidad menor de muestra, el rendimiento de ADN también puede ser
menor.
Para obtener un alto rendimiento de ADN y minimizar la degradación del ADN, recolecte la
muestra y proceda inmediatamente a prepararla o congélela en nitrógeno líquido
inmediatamente después de la recolección.
Muestra Cantidad
Células mamíferas 5×106células

(suspensión o células adherentes)
Tejidos de mamíferos ≤25 mg (≤10 mg para el bazo)
Cola de ratón o rata 1 cm (ratón); 0,5 cm (rata)

hisopo bucal Hisopo bucal humano
Sangre total no nucleada (p. ej., humana, ratón) ≤200 μL (pase único)
≤1 ml (pase múltiple, solo mini kit)
Sangre entera nucleada (p. ej., de ave) 5 a 10 µL
Mancha de sangre en papel 2 a 5 punzones (de 2 a 3 mm de tamaño)
Bacterias Gram negativas (p. ej.,E. coli) ≤2 × 109células
Bacterias Gram positivas (p. ej., Bacillus) ≤2 × 109células
Células de levadura ≤5 × 107células
tejido FFPE 1 a 8 secciones de 5 a 15 μm de espesor con una

superficie de tejido de 20 a 50 mm2.
oragene™saliva preservada ≤4 ml (minikit); ≤200 μL (kit 96)
Sangre pura El enlace puro®Los kits de ADN genómico están diseñados para purificar el ADN genómico de las
Muestra siguientes muestras de sangre completa:
• Sangre entera fresca o congelada
• Sangre entera fresca o congelada extraída en presencia de anticoagulantes
como EDTA o citrato
• Manchas de sangre seca sobre papel como FTA®tarjeta (Whatman) o S&S 903.
12
Reglas generales,Continuado
elución Tampón de elución
Parámetros El ADN genómico se eluye usando PureLink®Tampón de elución genómica (Tris-HCl 10

mM, pH 9,0, EDTA 0,1 mM). Alternativamente, se puede utilizar Tris Buffer (Tris-HCl 10
mM, pH 8,0–9,0) o agua estéril, si el EDTA inhibe las reacciones posteriores.
Volumen del tampón de elución
El ADN genómico se eluye en 25–200 μL (Mini Kit) o 50–200 μL (96 Kit) de PureLink.®Tampón de
elución genómica. Puede cambiar el volumen del tampón de elución para obtener ADN genómico en
la concentración final deseada. Utilice el gráfico que se muestra a continuación para determinar las
condiciones de elución más adecuadas para su aplicación. Para aumentar el rendimiento de ADN,
utilice un volumen mayor de tampón de elución. Para aumentar la concentración de ADN, utilice un
volumen menor de tampón de elución.
60.0 2.50
50.0
2.00
Concentración
Producir
40.0
Concentración (ng/ul)
1,50
Rendimiento (ug)
30.0
1.00
20.0
0,50
10.0
0.0 0.00
25 50 100 200
Volumen de elución (ul)
Leyenda de la figura:El ADN genómico se purificó a partir de muestras de sangre de 100 μL con
PureLink.®Mini kit de ADN genómico que utiliza diferentes volúmenes de elución.
Número de eluciones
Utilizando un volumen de tampón de elución de 50 μL y 100 μL, la primera elución recupera aproximadamente
el 80 % y el 90 % del ADN genómico unido, respectivamente. Para maximizar la recuperación del ADN
genómico, puede realizar una segunda elución para recuperar el 10-15 % restante del ADNg. Para evitar la
dilución de la muestra de ADNg, realice la segunda elución utilizando el mismo volumen de tampón utilizado
para la primera elución. Evite el contacto de la columna de centrifugación con el eluido utilizando tubos
diferentes para los dos pasos de elución.
Nota:PureLink suficiente®Se incluye tampón de elución genómica para realizar hasta 2 ×

100 μl de elución por muestra. Si desea realizar una elución de >2 × 100 μL por muestra,
deberá adquirir PureLink adicional.®Tampón de elución genómica (página 43) disponible
por separado.
13
Procedimiento de purificación mediante minikit
Descripción general experimental
Introducción El procedimiento para purificar el ADN genómico utilizando PureLink.®Los minikits de ADN
genómico se ilustran en el siguiente diagrama de flujo.
-
-
--
! " -
#! $
--
! " -
#! %
--
& '#
&
14
Preparación de lisados: minikit
Introducción Instrucciones para preparar lisados de células y tejidos de mamíferos, cola de ratón,
hisopos bucales, sangre, bacterias, levaduras, tejidos FFPE y Oragene™La saliva conservada
se describe en las siguientes secciones.
Para obtener ADN genómico de alta calidad, siga las pautas recomendadas en la
página 11.
Importante Asegúrese de que no haya precipitados visibles en PureLink®Tampón de digestión genómica o

PureLink®Tampón de unión/lisis genómica. Si se ve algún precipitado en los tampones,
caliente los tampones a 37 °C durante 3 a 5 minutos y mezcle bien para disolver el precipitado
antes de usarlos.
Materiales necesitados Componentes suministrados por el usuario.
• 96-100% etanol
• Muestra para aislamiento de ADN (consulte la página 12 para conocer la cantidad inicial recomendada)
• Solución salina tamponada con fosfato (PBS) para lisado de células de mamíferos (página 43)
• Lisozima y tampón de digestión de lisozima (Tris-HCl 25 mM, pH 8,0, EDTA 2,5 mM, Triton
X-100 al 1%) para lisado de células bacterianas
• Tampón Zimolasa (sorbitol 1 M, EDTA sódico 10 mM, β-mercaptoetanol
14 mM) y enzima Zimolasa (lisisasa) para lisado de levadura
• CitriSolv™Agente limpiador (Fisher cat. no. 22-143-975) o xileno para tejido
FFPE
• Acetato de sodio 3 M (pH 5–5,5) y 2,8 ml de isopropanol para Oragene™
muestras
• Tubos de microcentrífuga estériles y libres de ADNasa
• Baños de agua o bloques térmicos.
Componentes suministrados con el kit
• Enlace puro®Lisis genómica/tampón de unión

• Enlace puro®Tampón de digestión genómica
• Proteinasa K (20 mg/ml)

• ARNasa A (20 mg/ml)
15
Preparación de lisados: minikit,Continuado
Células mamíferas Utilice el siguiente protocolo para preparar lisado de células de mamíferos. 1.
Lisado Coloque un baño de agua o un bloque térmico a 55°C.
2. Para células adherentes (≤5 × 106células), retirar el medio de crecimiento de la placa

de cultivo y cosechar las células mediante tripisinización o un método de elección.
Para células en suspensión (≤5 × 106células), cosechar células y centrifugar las células a 250 ×gramo
durante 5 minutos para sedimentar las células. Retire el medio de crecimiento.
3. Resuspender las células del Paso 2 en 200 µL de PBS.

4. Agregue 20 μL de Proteinasa K (suministrada con el kit) a la muestra.
5. Agregue 20 μL de RNasa A (suministrada con el kit) a la muestra, mezcle bien mediante
agitación breve e incube a temperatura ambiente durante 2 minutos.
6. Agregue 200 µL de PureLink®Genomic Lysis/Binding Buffer y mezcle bien mediante
agitación vorticial para obtener una solución homogénea.
7. Incubar a 55°C durante 10 minutos para promover la digestión de proteínas.
8. Agregue 200 µL de etanol al 96–100 % al lisado. Mezcle bien agitando durante 5

segundos para obtener una solución homogénea.
9. Proceda inmediatamente aUnión de ADN(página 23).
Mamífero Utilice el siguiente protocolo para preparar lisado de tejidos de mamíferos y colas
Tejido y de ratón/rata.
Cola de ratón/rata 1. Coloque un baño de agua o un bloque térmico a 55°C.
Lisado 2. Coloque la siguiente cantidad de tejido o cola de mamífero en un tubo de
microcentrífuga estéril:
• ≤25 mg de tejido de mamífero picado
• ≤10 mg de tejido de bazo picado
• Clip de cola de ratón de 1 cm o de 0,5 cm de rata
3. Agregue 180 µL de PureLink®Tampón de digestión genómica y 20 μL de proteinasa K (suministrada

con el kit) al tubo. Asegúrese de que el tejido esté completamente sumergido en la mezcla tampón.
Nota:Al procesar varias muestras, prepare una mezcla maestra de tampón de digestión
mezclando 180 μl de tampón de digestión y 20 μl de proteinasa K para cada muestra.
4. Incubar a 55 °C con agitación ocasional hasta que se complete la lisis (1 a 4 horas). Para colas
de ratón o trozos de tejido más grandes, puede realizar la digestión durante la noche.
5. Para eliminar cualquier material particulado, centrifugue el lisado a velocidad máxima durante 3
minutos a temperatura ambiente. Transfiera el sobrenadante a un tubo de microcentrífuga
nuevo y estéril.
6. Agregue 20 μL de RNasa A (suministrada en el kit) al lisado, mezcle bien mediante

7. Agregue 200 l de PureLink®Genomic Lysis/Binding Buffer y mezclar bien mediante agitación
vorticial.
8. Agregue 200 µL de etanol al 96–100 % al lisado. Mezcle bien agitando durante 5 segundos.
Nota:Al procesar varias muestras, prepare una mezcla maestra de tampón/etanol
mezclando 200 μl de tampón de lisis/unión y 200 μl de etanol al 96-100 % por muestra.
dieciséis
Lisado de sangre Utilice el siguiente protocolo para preparar lisado a partir de muestras de sangre (nucleadas o no
nucleadas).
Nota: Si está procesando >200 μL de muestra de sangre, deberá comprar

PureLink adicional®Lisis genómica/tampón de unión y proteinasa K (página
43).
1. Coloque un baño de agua o un bloque térmico a 55°C.
2. A un tubo de microcentrífuga estéril, agregue ≤200 μL de muestra de sangre fresca o congelada (si
usa <200 μL de muestra de sangre, ajuste el volumen de la muestra a 200 μL usando PBS).
Para procesar muestras de sangre >200 μL y ≤1 mL, aumente todos los volúmenes de
reactivo en consecuencia.
3. Agregue 20 μL de Proteinasa K (suministrada con el kit) a la muestra.

4. Agregue 20 μL de RNasa A (suministrada con el kit) a la muestra, mezcle bien mediante
6. Incubar a 55°C durante 10 minutos para promover la digestión de proteínas.
7. Agregue 200 μl de etanol al 96–100 % al lisado. Mezcle bien agitando durante 5

Manchas de sangre Utilice el siguiente protocolo para preparar lisado a partir de manchas de sangre seca. 1.
Coloque un baño de agua o un bloque térmico a 55°C.
2. Coloque de 2 a 5 punciones de gota de sangre seca (de 2 a 3 mm de tamaño) en un tubo de

microcentrífuga estéril.
3. Agregue 180 µL de PureLink®Tampón de digestión genómica y 20 μL de proteinasa K (suministrada

con el kit) al tubo. Mezclar bien con un vórtex. Asegúrese de que las piezas estén completamente
sumergidas en el tampón.
4. Incubar a 55°C con agitación ocasional durante 30 minutos.

5. Centrifugue la muestra a velocidad máxima durante 2 a 3 minutos a temperatura ambiente
para granular las fibras de papel. Transfiera la muestra a un tubo de microcentrífuga
limpio y estéril.

7. Agregue 200 l de PureLink®Genomic Lysis/Binding Buffer y mezcle bien mediante agitación
vorticial para obtener una solución homogénea.
8. Agregue 200 µL de etanol al 96–100 % al lisado. Mezcle bien agitando durante 5 segundos para
obtener una solución homogénea.
Nota:Al procesar varias muestras, puede preparar una mezcla maestra de tampón/
etanol mezclando 200 μl de tampón de lisis/unión y 200 μl de etanol al 96-100 % para
cada muestra.
17
Gram negativo Utilice el siguiente protocolo para preparar lisado de células bacterianas Gram negativas. 1.
Célula bacteriana Coloque un baño de agua o un bloque térmico a 55°C.
Lisado
2. Cosecha hasta 2×109Gram negativos (~1 ml de solución nocturnaE. colicultivo) por
centrifugación. Si está utilizando un sedimento celular congelado, continúe con el Paso 3.
3. Resuspender el sedimento celular en 180 l de PureLink.®Tampón de digestión genómica. Agregue 20

l de proteinasa K (suministrada con el kit) para lisar las células. Mezcle bien mediante un breve
vórtex.
4. Incubar el tubo a 55 °C con agitación ocasional hasta que se complete la lisis (de 30
minutos a 4 horas como máximo).
5. Agregue 20 μL de RNasa A (suministrada con el kit) al lisado, mezcle bien mediante



cada muestra.
8. Proceder aUnión de ADN(página 23).
Gram positivas Utilice el siguiente protocolo para preparar lisado de células bacterianas Gram positivas. 1.
Célula bacteriana Establecer dos baños de agua o bloques térmicos a 37ºC y 55°C, respectivamente.
Lisado
2. Prepare el tampón de digestión de lisozima (consulte la receta en la página 15). A ~200 μL de
tampón de digestión de lisozima/muestra, agreguefrescoLisozima para obtener una
concentración final de lisozima de 20 mg/mL.
3. Cosecha hasta 2×109Células Gram positivas por centrifugación. Si está utilizando un sedimento
celular congelado, continúe con el Paso 3.
4. Resuspender el sedimento celular en 180 µL de tampón de digestión de lisozima que contenga

lisozima del paso 2. Mezclar bien mediante agitación breve en vórtex.
5. Incubar a 37ºC durante 30 minutos.

6. Agregue 20 μL de Proteinasa K (suministrada con el kit). Mezcle bien mediante un breve vórtex.

breve.
8. Incubar a 55°C durante 30 minutos.

10. Proceder aUnión de ADN(página 23).
18
Células de levadura Utilice el siguiente protocolo para preparar lisado a partir de células de levadura. 1.
Lisado Establecer 2 baños de agua o bloques térmicos a 37°C y 55°C, respectivamente.
2. PrepáratefrescoTampón de zimolasa (consulte la página 15). Necesita 500 μL de tampón por

muestra.
3. Cosecha hasta 5×107células de levadura mediante centrifugación. Si está utilizando un sedimento celular
congelado, continúe con el Paso 4.
4. Resuspender el sedimento celular en 500 µl de tampón zimolasa. Añadir 15 unidades de

enzima zimolasa (lisisasa) e incubar a 37 °C durante 1 hora para generar esferoplastos.
5. Centrifugar a 3000 ×gramodurante 10 minutos a temperatura ambiente para sedimentar

los esferoplastos. Deseche el sobrenadante.
6. Resuspender los esferoplastos en 180 l de PureLink®Tampón de digestión genómica. Agregue 20 l

de proteinasa K (suministrada con el kit). Mezcle bien mediante un breve vórtex.
7. Incubar a 55°C durante 45 minutos.


breve para obtener una solución homogénea.
10. Agregue 200 µL de etanol al 96–100 % al lisado. Mezcle bien agitando durante 5 segundos para
cada muestra.
bucal humana Utilice el siguiente protocolo para preparar lisado a partir de hisopos de células bucales humanas. 1.
Lisado de hisopo Coloque un baño de agua o un bloque térmico a 55°C.
2. Coloque el hisopo bucal en un tubo de microcentrífuga estéril de 2 ml. Agregue 400 μL

(para hisopos de algodón y Dacron) o 600 μL (para Omni Swab) de PBS a la muestra.
3. Agregue 20 µL de proteinasa K a un tubo de microcentrífuga estéril capaz de contener
tres veces el volumen de lisado (por ejemplo, si planea procesar 600 µL de lisado,
utilice un tubo de microcentrífuga capaz de contener 1800 µL).
4. Transfiera 200–600 μL del lisado del hisopo al tubo de microcentrífuga que contiene
Proteinasa K (Paso 3). Mezclar bien pipeteando.
5. Agregue un volumen igual de PureLink®Genomic Lysis/Binding Buffer al lisado y
mezclar bien mediante agitación breve.
Por ejemplo, si está procesando 200 μL de lisado, agregue 200 μL de PureLink.®
Tampón de unión/lisis genómica.
6. Incubar a 55°C durante al menos 10 minutos.
7. Centrifugue brevemente para recoger el lisado de las tapas de los tubos.
8. Agregue 200 μL de etanol al 96–100 % al tubo. Mezcle bien agitando durante 5 segundos para
19
Tejido FFPE Prepare el lisado a partir de tejido FFPE (fijado con formalina e incluido en parafina) como se
Lisado describe a continuación.
1. Establecer 2 baños de agua o bloques térmicos a 37ºC y 50°C, respectivamente.
2. Coloque de 1 a 8 secciones de 5 a 15 μm de espesor con una superficie de tejido de 20 a 50 mm.2

(no más de 20 mg de tejido) en un tubo de microcentrífuga estéril.
3. Agregue 1 ml de CitriSolv™Agente de limpieza (Fisher cat. no. 22-143-975) a la

muestra y agite vigorosamente durante unos segundos.
CitriSolv™Clearing Agent es una alternativa biodegradable al xileno para la

extracción de parafina.
Nota:También puedes usar xileno en lugar de CitriSolv.™. Tome las

precauciones adecuadas al usar xileno y deséchelo de acuerdo con las
pautas institucionales establecidas.
4. Centrifugar a velocidad máxima durante 3 minutos a temperatura ambiente para
sedimentar el tejido. Retire con cuidado el sobrenadante sin alterar el pellet.
5. Agregue 1 ml de etanol al 96–100 % y agite para resuspender el sedimento de tejido.
6. Centrifugar a velocidad máxima durante 3 minutos a temperatura ambiente para

sedimentar el tejido. Retire con cuidado el sobrenadante sin alterar el pellet.
7. Repita la extracción con etanol (Pasos 5 y 6) una vez más.
8. Incubar los tubos con la tapa abierta a 37ºC durante 5 a 10 minutos para evaporar el
etanol residual.
9. Agregue 180 l de PureLink®Tampón de digestión genómica y 20 μL de proteinasa K
(suministrados con el kit). Mezcle bien mediante un breve vórtex.
Nota:Al procesar varias muestras, puede preparar una mezcla maestra de

tampón de digestión mezclando 180 µl de tampón de digestión y 20 µl de
proteinasa K para cada muestra.
10. Incubar a 50°C durante 3 horas hasta toda la noche.
11. Centrifugue el lisado a velocidad máxima durante 3 minutos a temperatura ambiente para
eliminar cualquier material particulado. Transfiera el lisado a un tubo de microcentrífuga nuevo
y estéril.


agitación breve.
cada muestra.
20
oragene™ Proceso Orageno™saliva preservada como se describe a continuación.

Saliva preservada Nota: Si está procesando >200 μL de Oragene™muestra, necesita comprar
PureLink adicional®Lisis genómica/tampón de unión y proteinasa K (página
43).
Colección de saliva
Recoge y conserva la saliva según lo descrito por Oragene.™fabricante del dispositivo. Si la
muestra de saliva se recoge inmediatamente antes de la purificación, incube la muestra a 50ohC
durante 1 hora antes de iniciar el protocolo. De lo contrario, una incubación durante la noche a
temperatura ambiente en Oragene™El dispositivo es suficiente para liberar y preservar el ADN
genómico.
Hasta 1 ml de naranja™Muestra
1. Coloque un baño de agua o un bloque térmico a 55°C.
2. Transfiera 1 volumen de mezcla de saliva de Oragene™dispositivo de autocolección en

un tubo apropiado y mezclar con 1 volumen de PureLink®Tampón de unión/lisis
genómica. Elija un tubo apropiado que pueda contener tres veces su volumen de
muestra para permitir adiciones de reactivos.
Por ejemplo, a 200 μL de Oragene™muestra, agregue 200 μL PureLink®Tampón de
unión/lisis genómica.
3. Incubar a los 55ohC durante 10 minutos.
4. Agregue 1 volumen de muestra de etanol al 96–100 % y mezcle bien mediante un breve agitador vorticial.
Por ejemplo, si usó 200 μL de Oragene™muestra, agregue 200 μL de etanol al

96-100%.
5. Proceda inmediatamente aUnión de ADN(página 23). 4

ml de naranja™Muestra
1. Coloque un baño de agua o un bloque térmico a 55–65 °C.
2. A todo el ~4 ml de Oragene™muestra, agregue 400 l de acetato de sodio 3 M (pH 5–

5,5) y 2,8 ml de isopropanol. Mezcle bien mediante un breve vórtex.
3. Centrifugar a >12.000 ×gramodurante 10 minutos a temperatura ambiente. Deseche el

sobrenadante.
4. Resuspender el sedimento en 300 μl de PBS (o Tris 10 mM, pH 8,0) y agregar 300 μl de

PureLink.®Tampón de unión/lisis genómica.
5. Incubar entre 55 y 65ohC durante 5 a 10 minutos para solubilizar el sedimento que contiene restos
celulares y ácido nucleico.
6. Agregue 300 µL de etanol al 96–100 % y mezcle bien mediante agitación breve en el vórtex.
21
Guias para Si ninguno de los protocolos de preparación de lisado descritos en este manual coincide con el
Protocolo de lisado tipo o tamaño de su muestra, utilice las siguientes pautas para desarrollar su propio protocolo de
Desarrollo preparación de lisado.
• Lise la muestra usando PureLink®El tampón de digestión genómica y la proteinasa K se

suministran con el kit o utilice protocolos o tampón de lisis especializados para realizar la lisis. Es
posible que necesite optimizar las condiciones de lisis antes de la purificación del ADN para
obtener los mejores resultados para su muestra específica.
• Mezclar la muestra con PureLink®Tampón de unión genómica y etanol al 96–100 %

antes de cargar la muestra en la columna. Mantenga siempre una proporción de 1:1:1
para muestra/tampón de digestión: tampón de unión: etanol para obtener una unión
óptima al ADN.
Un protocolo general para la preparación del lisado puede ser el siguiente:
1. Para las células, coseche las células y resuspenda el sedimento celular en 180 μl de PureLink.®
Tampón de digestión genómica y 20 μl de proteinasa K. Incubar a 55 °C hasta que se
complete la lisis.
Para pañuelos, comience con una pequeña cantidad de tejido picado y agregue 180 μL de
PureLink.®Tampón de digestión genómica. Agregue 20 l de proteinasa K a la muestra y mezcle
bien. Incubar a 55°C hasta que se complete la lisis.
Según los resultados obtenidos con este protocolo de lisis, es posible que deba optimizar el
protocolo de lisis utilizando diferentes tampones o aumentando la cantidad y el tiempo de
digestión de la proteinasa K.
Si ya tiene un lisado, continúe con el Paso 2.

2. Agregue 20 μL de RNasa A (suministrada con el kit). Incubar a temperatura ambiente durante 2
minutos.
3. Centrifugue el lisado a velocidad máxima durante 5 minutos a temperatura ambiente para

eliminar cualquier material particulado, si es necesario.
4. Transfiera el sobrenadante a un tubo de microcentrífuga nuevo. Agregue 200 μl de

PureLink®Tampón de unión genómica suministrado con el kit al lisado. Mezclar bien
mediante vórtex para obtener una solución homogénea.

6. Proceder aUnión de ADN, página 23.
22
Procedimiento de purificación mediante columnas de centrifugación
Introducción El procedimiento de purificación está diseñado para purificar ADN genómico mediante un procedimiento de
centrifugación basado en columna giratoria en un tiempo total de10 a 15 minutos.
Materiales necesitados Componentes suministrados por el usuario.
• Lisados preparados como se describe en las páginas 16–21
• Tubos de microcentrífuga de 1,5 ml estériles y sin ADNasa para elución
• Microcentrífuga capaz de centrifugar >10.000 × g

• Opcional: agua esterilizada, pH 7,0–8,5, si utiliza agua para elución
Componentes suministrados con el kit
• Enlace puro®Tampones de lavado genómico 1 y 2
• Enlace puro®Tampón de elución genómica
• Enlace puro®Columnas de giro en tubos de recolección
• Enlace puro®Tubos de colección
Siga las recomendaciones a continuación para obtener los mejores resultados:

-
• Realice todos los pasos de centrifugación a temperatura ambiente.
•
--
RevisarParámetros de eluciónen la página 13 para determinar el volumen de elución

adecuado para sus necesidades
• Realice un paso de incubación de 1 minuto con PureLink®Tampón de elución genómica
• Asegúrese de realizar los pasos de lavado recomendados para obtener los mejores resultados.
• Si utiliza agua para la elución, utilice siempre agua esterilizada, pH 7,0–8,5.
Antes de empezar Agregue 96–100 % de etanol a PureLink®Tampón de lavado genómico 1 y PureLink®

Genomic Wash Buffer 2 según las instrucciones de cada etiqueta. Mezclar bien. Marque en las
etiquetas que se agrega etanol. Guarde ambos tampones de lavado con etanol a temperatura
ambiente.
Unión de ADN 1. Eliminar un PureLink®Haga girar la columna en un tubo de recolección del paquete.
2. Agregue el lisado (~640 μL) preparado con PureLink®Lisis genómica/tampón de

unión y etanol al PureLink®Columna de giro.
3. Centrifugar la columna a 10.000 ×gramodurante 1 minuto a temperatura ambiente.
Nota:Si está procesando >200 μL de material de partida, como sangre, hisopos

bucales u Oragene™saliva conservada, debe realizar varias cargas del lisado
transfiriendo el lisado restante al mismo PureLink®Centrifugar la columna
(arriba) y centrifugar a 10.000 ×gramodurante 1 minuto.
4. Deseche el tubo de recolección y coloque la columna de centrifugación en un PureLink limpio.®
Tubo de recogida suministrado con el kit.
5. Proceder aLavado de ADN, página 24.
23
Procedimiento de purificación mediante columnas de centrifugación.Continuado
Lavado de ADN 1. Agregue 500 μL de tampón de lavado 1 preparado con etanol (página 23) a la columna.
2. Columna centrífuga a temperatura ambiente a 10.000 ×gramodurante 1 minuto.
3. Deseche el tubo de recolección y coloque la columna de centrifugación en un PureLink limpio.®

tubo de recogida suministrado con el kit.
4. Agregue 500 μL de tampón de lavado 2 preparado con etanol (página 23) a la columna.
5. Centrifugar la columna a máxima velocidad durante 3 minutos a temperatura

ambiente. Deseche el tubo de recolección.
6. Proceder aElución de ADN.
Elución de ADN 1. Coloque la columna de centrifugación en un tubo de microcentrífuga estéril de 1,5 ml.
2. Agregue 25–200 μL de PureLink®Tampón de elución genómica a la columna. Ver Parámetros de

elución(página 13) para elegir el volumen de elución adecuado para sus necesidades.
3. Incubar a temperatura ambiente durante 1 minuto. Centrifugar la columna a máxima

velocidad durante 1 minuto a temperatura ambiente.El tubo contiene ADN genómico
purificado.
4. Para recuperar más ADN, realice un segundo paso de elución utilizando el mismo volumen de tampón de
elución que el de la primera elución en otro tubo de microcentrífuga estéril de 1,5 ml.
5. Centrifugar la columna a máxima velocidad durante 1,5 minutos a temperatura

ambiente.
El tubo contiene ADN purificado.Retire y deseche la columna.
Almacenamiento de ADN • Guarde el ADN purificado a –20 °C o utilice ADN para la aplicación posterior
deseada.
• Para almacenamiento a largo plazo, almacene el ADN purificado en PureLink®Tampón de elución
genómica a –20 °C, ya que el ADN almacenado en agua está sujeto a hidrólisis ácida.
• Para evitar la congelación y descongelación repetidas del ADN, almacene el ADN purificado a 4 °C
para su uso inmediato o alícuotas del ADN y guárdelo a –20 °C para un almacenamiento a largo plazo.
24

Protocolo Pure Link 1 24.en - Es

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guía del usuario

Enlace puro®Kits de ADN genómico

Números de catálogoK1820-01, K1820-02, K1821-04

Número de pieza del documento

Sólo para uso en investigación. No debe utilizarse en los procedimientos de diagnóstico.

Procedimiento del Mini Kit para usuarios experimentados.................................... ................................................. ........4

Procedimiento del kit 96 para usuarios experimentados ................................. ................................................. ............5

Contenido y almacenamiento del kit .................................. ................................................. ................................7

Introducción ................................................. ................................................. ................................9

Métodos ................................................. ................................................. ................................11

Resumen experimental ................................................. ................................................. ................................14

Procedimiento de purificación utilizando el kit 96 ................................. ................................................. ..............25

Resumen experimental ................................................. ................................................. ................................25

Resultados y solución de problemas ................................................ ................................................. ........................39

Análisis del rendimiento y la calidad del ADN ................................. ................................................. ............39

Apéndice................................................. ................................................. ................................43

ratón de mamíferos. cm de cola

5-10 μL de sangre nucleada ≤2

oragene™saliva preservada ≤1ml 21

4. Deseche el tubo de recolección y coloque la columna de centrifugación en un tubo de recolección nuevo.

5. Proceder aLavado de ADN.

5. Proceder aElución de ADN.

2.eluirel ADN con 25–200 μL de PureLink®Tampón de elución genómica. VerParámetros de elución

3. Incubar la columna a temperatura ambiente durante 1 minuto.

4.Centrifugar la columna a máxima velocidad durante 1 minuto a temperatura ambiente. El

oragene™hisopo bucal de saliva ≤200 μL 33

3. Centrifugar las placas apiladas a ≥2250 ×gramodurante 5 a 10 minutos.

4. Deseche el flujo y vuelva a montar la placa de unión en la placa de 96 pocillos profundos.

6. Centrifugar las placas apiladas a ≥2250 ×gramodurante 5 a 10 minutos.

7. Deseche el flujo y vuelva a montar la pila de placas.

membrana. Nota:Para asegurar el completo secado de la membrana, no sellar la placa.

11. Agregue 50–200 µL de PureLink®Tampón de elución genómica al centro de la membrana de cada

Nota:RevisarParámetros de elución(página 13) para elegir un volumen de elución adecuado.

12. Centrifugar las placas apiladas a ≥2250 ×gramodurante 3 minutos.

Purificación 1. Monte el colector de vacío según las instrucciones del fabricante.

6. Aplicar vacío durante 2 minutos a temperatura ambiente. Liberar el vacío.

8. Aplicar vacío durante 2 minutos a temperatura ambiente. Liberar el vacío.

13. Coloque el PureLink®Placa de unión de ADNg en el colector de vacío.

Antes de utilizar este producto, lea y comprenda la información proporcionada en el apéndice

-- "Seguridad" de este documento.

Tipos de productosEste manual se suministra con los siguientes productos:

Enlace puro®Mini kit de ADN genómico 50 preparaciones K1820-01

Al recibirlos, almacene todos los componentes a temperatura ambiente.

Componente K1820-01 K1820-02

Enlace puro®Lisis genómica/tampón de unión 10ml 50 mililitros

Enlace puro®Tampón de digestión genómica 9ml 45ml

Enlace puro®Tampón de lavado genómico 2 7,5 ml 37,5 ml

(Tris-HCl 10 mM, pH 9,0, EDTA 0,1 mM)

Enlace puro®Tubos de recolección (2,0 ml) 100 5×100

Ventajas Las ventajas de utilizar PureLink®Los kits de ADN genómico son:

• Lisis simple de células y tejidos con Proteinasa K sin necesidad de lisis

Miniequipo Material de partida: Varía (consulte la página

Capacidad del depósito de columna: nucleico 800 μL

Capacidad del tubo de recolección: 2,0 ml (~700 μL sin columna de contacto)

Tamaño del ADN: 40) 20–50 kb

Equipo 96 Dimensiones: Huella estándar de la SBS (Sociedad para el

Material de partida: Varía (consulte la página

Capacidad vinculante: 12) ~0,5 mg de ácido

Capacidad de la placa de unión: nucleico 1 ml

Rendimiento de ADN: Varía

Elija el protocolo de purificación adecuado según el tipo de kit que haya

Enlace puro®Minikits de ADN genómico (K1820-01, K1820-02) 14