Universidad de ciencias Aplicadas y Ambientales

Facultad de ciencias

VALIDACIÓN DE AMOXICILINA CAPSULA 500MG EN PRODUCTO TERMINADO POR LA

TECNICA HPLC Y LA METODOLOGIA DE ESTANDAR EXTERNO

Carlos Lombana, Andrea Rodriguez, Juan David Parra

1
Clombana541@ctb.edu.co 1arodriguezc@udca.edu.co 2 jparra@udca.edu.co
1
Estudiantes, 2Profesor
1
Estudiantes Química Farmacéutica 2Profesor laboratorio Análisis Instrumental
Bogotá D.C 11 de septiembre 2023

OBJETIVOS
GENERALES

 Comprender los conceptos básicos de la validación analítica y su importancia en la

industria farmacéutica
 Comprobar y entender la validación de un método analítico para la determinación
cuantitativa de amoxicilina en un producto farmacéutico, asegurando su precisión, exactitud
y fiabilidad, de acuerdo con los estándares y regulaciones aplicables.
ESPECIFICOS

 Calcular los parámetros cromatográficos, como el tiempo de retención y el área de pico,

para la amoxicilina en las muestras.
 Construir una curva de calibración utilizando las soluciones patrón y determinar la
concentración de amoxicilina en las muestras de cápsulas.
 Evaluar la precisión del método mediante la repetición de análisis en las muestras.
 Evaluar la exactitud del método comparando los resultados obtenidos con los valores
teóricos de concentración de amoxicilina en las cápsulas.
 Interpretar los resultados y emitir conclusiones sobre la validez y confiabilidad del método
HPLC para la determinación de amoxicilina en cápsulas de 500 mg.
RESUMEN
En esta práctica de validación analítica, se llevó a cabo la determinación cuantitativa de la
concentración de amoxicilina, un antibiótico ampliamente utilizado, en un producto farmacéutico.
La amoxicilina es un fármaco perteneciente a la familia de las penicilinas, conocido por su eficacia
en el tratamiento de diversas infecciones bacterianas.
Para lograr este objetivo, se utilizó la técnica de Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC),
que permite separar y cuantificar los componentes de una muestra de manera precisa y eficiente.
Además, se aplicó la metodología de estándar externo, en la cual se prepararon soluciones patrón de
amoxicilina de concentraciones conocidas para crear una curva de calibración.
Después de realizar las corridas cromatográficas y construir la curva de calibración, se determinó
que la concentración encontrada de amoxicilina en el producto farmacéutico fue de 517.065 mg.
Este resultado demuestra la utilidad y eficacia del método analítico validado, que asegura la calidad
y confiabilidad en la determinación de la concentración de amoxicilina en productos farmacéuticos,
lo que asegura la precisión y exactitud en el análisis de productos farmacéuticos, cumpliendo con
los estándares USP.
ABSTRACT
In this analytical validation practice, the quantitative determination of the concentration of
amoxicillin, a widely used antibiotic, in a pharmaceutical product was carried out. Amoxicillin is a
drug belonging to the penicillin family, known for its efficacy in the treatment of various bacterial
infections.
To achieve this objective, the High Performance Liquid Chromatography (HPLC) technique was
used, which allows separating and quantifying the components of a sample accurately and
efficiently. In addition, the external standard methodology was applied, in which amoxicillin
standard solutions of known concentrations were prepared to create a calibration curve.
After performing the chromatographic runs and constructing the calibration curve, it was
determined that the concentration of amoxicillin found in the pharmaceutical product was 517.065
mg. This result demonstrates the usefulness and efficacy of the validated analytical method, which
ensures quality and reliability in the determination of amoxicillin concentration in pharmaceutical
products, thus ensuring precision and accuracy in the analysis of pharmaceutical products,
complying with USP standards.
KEYWORDS
Amoxicillin, validation, method, accuracy, precision, concentration, external standard, HPLC.
1. INTRODUCCIÓN clave a evaluar durante este proceso incluyen
la precisión, exactitud, linealidad, límites de
La validación de un método es el
detección y cuantificación, repetibilidad,
procedimiento para demostrar que el método
robustez, entre otros. Estos parámetros son
analítico es aceptable para el fin que se
esenciales para determinar la fiabilidad y
pretende.5 En Química farmacéutica, las
capacidad del método para proporcionar
exigencias de validación de un método, a
resultados que sean científicamente sólidos y
efectos del cumplimiento de normas,
adecuados para la toma de decisiones.1
comprenden estudios de especificidad del
método, linealidad, exactitud, precisión, La amoxicilina es un antibiótico
intervalo de validez, límite de detección, betalactámico y semisintético perteneciente a
límite de cuantificación y robustez.1 la familia de las penicilinas, conocido por su
eficacia en el tratamiento de infecciones
La validación analítica es un proceso que
bacterianas. Su amplio espectro de acción y
involucra la evaluación sistemática y
perfil de seguridad la convierten en una
exhaustiva de un método analítico con el fin
opción terapéutica común para una variedad
de demostrar su idoneidad para su aplicación
de afecciones médicas. La correcta
en un contexto específico. Los parámetros
cuantificación de la amoxicilina en productos
farmacéuticos es esencial para garantizar la
eficacia de los tratamientos y evitar riesgos
asociados con subdosificación o todos los posibles subproductos sintéticos
sobredosificación.2
El presente informe tiene como objetivo la
validación analítica de un método para la
determinación cuantitativa de amoxicilina en
producto terminado, haciendo uso de la
técnica de Cromatografía Líquida de Alta
Resolución (HPLC) y la técnica de estándar
externo. A lo largo de este informe, se
abordarán detalladamente los parámetros
fundamentales de validación y se describirá la
amoxicilina como principio activo. Además,
se presentarán los procedimientos y
resultados obtenidos en el proceso de
validación analítica.1
2. MARCO TEORICO
2.1 VALIDACION DE UN METODO
La validación de un método es el
procedimiento para demostrar que el
método analítico es aceptable para el fin
que se pretende.1
La validación de métodos analíticos
utilizando HPLC y estándar externo es
esencial para garantizar la precisión y
confiabilidad de los resultados analíticos.
Este enfoque proporciona una base sólida
para la cuantificación precisa de
sustancias químicas en muestras
complejas y es ampliamente utilizado en
aplicaciones farmacéuticas, químicas y
científicas.1
2.2 Especificidad
La especificidad es la capacidad de un
método analítico para distinguir un
analito de todo lo que pueda existir
además de él en la muestra
Cuando se elabora un ensayo de pureza
es necesario fijar las impurezas que hay
que añadir deliberadamente para hacer la
prueba de especificidad. Para comprobar
la formulación de un medicamento, puede
ser deseable comparar el medicamento
puro con otro que contenga adiciones de
e intermedios, los productos de
degradación y los excipientes. (Los
excipientes son sustancias añadidas para
dar forma o consistencia deseada.) Los
productos de degradación se podrían
introducir exponiendo el material puro al
calor, luz, humedad, ácidos, bases y
oxidantes para que descompusiesen
~20% del material original.1
2.3 Linealidad
La linealidad mide el grado en que la
respuesta analítica respecto a la
concentración (o cantidad) del analito se
ajusta a una función lineal. Si se quiere
conocer la concentración del analito en
una preparación farmacéutica, por
ejemplo, se evalúa la linealidad de la
curva de calibrado con 5 disoluciones
estándar que abarcan el intervalo de 0,5 a
1,5 veces la concentración esperada de
analito. Cada patrón debe prepararse y
analizarse 3 veces con este fin. (Este
procedimiento requiere 3 *5 = 15
patrones, más 3 blancos.) Para preparar
una curva de calibrado, que puede tener
de 0,1 a 1% p, por ejemplo, de una
impureza, se prepararía una curva de
calibrado con 5 estándares que abarquen
el intervalo de 0,05 a 2% en peso de esa
impureza.1
2.4 Exactitud
La exactitud es la «proximidad a la
verdad». Los modos de demostrar la
exactitud son:
1. Analizar un material estándar de
referencia, con una matriz semejante a la
de la muestra desconocida. El método
debe encontrar el valor certificado del
analito en el material de referencia,
dentro de la precisión (incertidumbre
aleatoria) del método.
 2. Comparar los resultados de métodos
analíticos diferentes. Deben coincidir con
la precisión esperada.
3. Analizar una muestra de blanco dopado
con una cantidad conocida de analito. La
matriz debe ser la misma que la del
problema. Cuando se analiza un
componente mayoritario, se deben hacer
tres replicados en cada uno de los tres
niveles desde 0,5 a 1,5 veces la
concentración esperada de la muestra.
Cuando se analizan impurezas, las
adiciones deben abarcar los tres niveles
de concentraciones esperadas, como son
de 0,1 al 2% p.
4. Si no se puede preparar un blanco con
la misma matriz que la muestra problema
hay que hacer adiciones de estándar de
analito a la muestra. Un análisis exacto
debe encontrar la cantidad conocida de
analito que se ha añadido.1
2.5 Precisión
La precisión es la reproducibilidad de un
resultado. La precisión instrumental,
también llamada precisión de inyección,
es la reproducibilidad observada cuando
la misma cantidad de una muestra se
introduce repetidas veces en un
instrumento. La falta de precisión
instrumental podría provenir de
variaciones en la cantidad inyectada y en
variaciones de la respuesta del
instrumento. Normalmente se hacen al
menos 10 inyecciones replicadas para
evaluar la precisión del instrumento.1
2.6 Límites de Detección y farmacéuticos. La Cromatografía Líquida
Cuantificación
Se determinan los límites de detección y
cuantificación del método, que
representan las concentraciones mínimas
detectables y cuantificables de la
sustancia de interés.1
2.7 Robustez
Se evalúa la robustez del método al
realizar análisis bajo diferentes
condiciones cromatográficas (por
ejemplo, cambios en la velocidad de
flujo, pH, temperatura, etc.) para
determinar su resistencia a las
variaciones.1
2.8 Construcción de la Curva de
Calibración
Se inyectan las soluciones estándar de
amoxicilina en el HPLC y se registra la
respuesta analítica (por ejemplo, área del
pico) en función de la concentración
conocida. Esto permite la construcción de
una curva de calibración que relaciona la
respuesta del detector con la
concentración de amoxicilina.
3. Amoxicilina
La amoxicilina es un antibiótico
semisintético ampliamente utilizado
perteneciente a la clase de las penicilinas.
Se utiliza en el tratamiento de una
variedad de infecciones bacterianas,
incluyendo infecciones del tracto
respiratorio, del tracto urinario, de la piel
y tejidos blandos, así como infecciones
de oído y garganta. La amoxicilina ejerce
su efecto antibacteriano al interferir con
la síntesis de la pared celular de las
bacterias, lo que lleva a la lisis y muerte
de las mismas.3
Dada su amplia aplicación clínica, es
esencial contar con métodos analíticos
robustos y precisos para la cuantificación
de la amoxicilina en productos
de Alta Resolución (HPLC) ha
demostrado ser una técnica eficaz para
este propósito debido a su capacidad para
separar y cuantificar compuestos
químicos en muestras complejas con alta
precisión y sensibilidad.3
 4. SOLVENTES UTILIZADOS 5.1.1 REPRODUCIBILIDAD
(600PPM 10
SOLVENTES USOS
Agua HPLC En la validación de INYECCIONES)
métodos, se utiliza para
preparar soluciones
estándar y soluciones de
muestra.

Fosfato Monobásico Preparación de soluciones

(6.8g) buffer, especialmente en
aplicaciones donde se
necesita un control
preciso del pH de la fase
móvil

NaOH-1M El hidróxido de sodio se

utiliza como una solución
básica (alcalina) y se
añade a la fase móvil para
ajustar el pH cuando es
necesario que sea IMAGEN 1- INYECCION 1
alcalino.
TABLA 1. Solventes utilizados en la práctica

4.1 EQUIPOS Y REACTIVOS

EQUIPOS
Cromatógrafo Elite LaChrom
Cartucho LiChroCART® 125-4
LiChrospher® 100 RP-18 (5 µm)
Detector de Arreglo de Diodos
TABLA 2. Equipos utilizados en la practica

IMAGEN 2- INYECCIÓN 2
REACTIVOS CONCENTRACIÓN
Amoxicilina 500mg
TABLA 3. Reactivos utilizados en la práctica

5. RESULTADOS

En los cromatogramas que se obtuvieron

se determinó que la banda
cromatográfica correspondiente
a amoxicilina eluyó de la columna
aproximadamente a los 1.80
minutos después de ajustes finales IMAGEN 3 INYECCIÓN 3

Los niveles de calibración se aforaron a

un volumen de 50 ml.
Las muestras de reproducibilidad se
aforaron a un volumen de 10 ml.
Las muestras de precisión intermedia y
exactitud o % recuperación se aforaron a
un volumen de 50 ml.

5.1 CROMATOGRAMAS IMAGEN 4- INYECCIÓN 4

 IMAGEN 9- INYECCIÓN 3
IMAGEN 5- INYECCIÓN 5

IMAGEN 10- INYECCIÓN 4

IMAGEN 6- INYECCIÓN 6

5.1.2 REPRODUCIBILIDAD
600PPM

IMAGEN 11- INYECCIÓN 5

IMAGEN 7- INYECCIÓN 1

IMAGEN 12 INYECCIÓN 6

5.1.3 LINEALIDAD
AMOXICILINA CURVAS DE
IMAGEN 8- INYECCIÓN 2
CALIBRACION NIVEL DE
CALIBRACIÓN-1. 25%
AMOXICILINA (150 ppm)
 IMAGEN 17 INYECCIÓN 2
IMAGEN 13 INYECCIÓN 1

IMAGEN 18 INYECCIÓN 3

IMAGEN 14 INYECCIÓN 2

5.1.5 NIVEL DE CALIBRACIÓN-3.

100% AMOXICILINA (600
ppm)

IMAGEN 15 INYECCIÓN 3

5.1.4 NIVEL DE CALIBRACIÓN-2.

75% AMOXICILINA (450
ppm)
IMAGEN 19 INYECCIÓN 1

IMAGEN 16 INYECCIÓN 1
IMAGEN 21 INYECCION 3
IMAGEN 24 INYECCIÓN 3

5.1.6 NIVEL DE CALIBRACIÓN-4.

125% AMOXICILINA (750
ppm) 5.1.7 NIVEL DE CALIBRACIÓN-5.
150% AMOXICILINA (900
ppm)
IMAGEN 25 INYECCION 1

IMAGEN 22 INYECCIÓN 1

IMAGEN 26 INYECCIÓN 2

IMAGEN 23 INYECCION 2

IMAGEN 27 INYECCIÓN 3
 IMAGEN 30 INYECCIÓN 3

5.1.8 PRESICISIÓN INTERMEDIA

INYECCION 1, 2 Y3
5.1.9 EXACTITUD (% DE
RECUPERACION DEL
ACTIVO)

IMAGEN 28 INYECCIÓN 1

IMAGEN 31 INYECCIÓN 1

IMAGEN 29 INYECCIÓN 2
IMAGEN 32 INYECCIÓN 2

IMAGEN 33 INYECCIÓN 3