“ANÁLISIS DE UN ESTUDIO DE VALIDACIÓN DE UN

ENSAYO TIPO ELISA”

Prof. Lorena Zapata Cuellar

Guían Carlo Navarro Beltrán #4578631

Biotecnología farmacéutica

Universidad Autónoma de Guadalajara

 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
BIOTECNOLOGÍA FARMACÉUTICA
ACTIVIDAD 3
“ANÁLISIS DE UN ESTUDIO DE VALIDACIÓN DE UN
ENSAYO TIPO ELISA”

1. OBJETIVO

Observar la determinación de precisión, exactitud, linealidad y límite de detección

del ensayo en un estudio de validación de método analítico.

1. INTRODUCCIÓN

“La validación de un método analítico es el proceso por el cual se establece,

mediante estudios de laboratorio, que las características de desempeño del
método cumplen con los requisitos para las aplicaciones analíticas previstas”
(USP 31–NF 26).

2. DESARROLLO
3.1 Abra el documento “Validación de un ensayo tipo ELISA para la
cuantificación de anticuerpos contra el polisacárido capsular de Haemophilus
influenzae tipo b” dando clic al siguiente link:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_abstract&pid=S0375-
07602005000300004&lng=es&nrm=iso

3.2 Observe la sección de definiciones de la NORMA Oficial Mexicana NOM-

177-SSA1-2013, Que establece las pruebas y procedimientos para demostrar
que un medicamento es intercambiable. Requisitos a que deben sujetarse los
Terceros Autorizados que realicen las pruebas de intercambiabilidad. Requisitos
para realizar los estudios de biocomparabilidad. Requisitos a que deben
sujetarse los Terceros Autorizados, Centros de Investigación o Instituciones
Hospitalarias que realicen las pruebas de biocomparabilidad.

3.3 Identifique las definiciones de: Medicamento Biotecnológico de referencia,

Muestras control, material de referencia, Límite inferior de cuantificación de la
curva de calibración y Límite superior de cuantificación de la curva de
calibración. Escriba las definiciones en la sección 4 y mencione ejemplos de
estos que se identifiquen en el ensayo ELISA mencionado en el punto 3.1.

3.4 Revise el proceso de validación, en la sección 4 coloque una descripción de

las mediciones realizadas para determinar cada parámetro así como fórmulas
empleadas (sólo si aplica).

3. RECOPILACIÓN DE DATOS
Definiciones:

Medicamento Biotecnológico de referencia: al medicamento biotecnológico

innovador que se utilice de referencia para el registro de medicamentos
biotecnológicos biocomparables y que sea reconocido como tal por la Secretaría de
Salud. Cuando el medicamento Biotecnológico innovador no se encuentre
registrado en México, se podrá reconocer como tal a un medicamento
biotecnológico biocomparable previamente registrado ante la Secretaría de Salud.

Material de referencia: material o sustancia, en la cual uno o más valores de sus

propiedades son suficientemente homogéneos y bien definidos, para ser utilizados
para calibración de aparatos, la evaluación de un método de medición o para
asignar valores a materiales.

suero humano anti-polisacárido capsular de Hib Lote 1983

Muestras control: las muestras de matriz adicionada con el analito en concentración

específica usada para validar y monitorear el desempeño de un método analítico.

suero con anticuerpos para el PS de Hib

Límite inferior de cuantificación de la curva de calibración: la concentración más baja

del analito que puede medirse cumpliendo con la precisión y exactitud, determinada
en función de las necesidades de cuantificación del estudio.

47,53 µg/mL

Límite superior de cuantificación de la curva de calibración: la concentración más

alta del analito que puede medirse con la precisión y exactitud, determinada en
función de las necesidades de cuantificación del estudio.

100,72 µg/ mL

Determinación de parámetros:

Límite de detección: LD = X + 2DE

• LD = Limite de detección
• X = Media de las concentraciones
• D = desviación estándar
A través de 80 repeticiones de blanco reactivo en 3 placas diferentes, se hizo
calculo de las diferentes variables que se encuentran listadas anteriormente.
Precisión intraensayo (repetibilidad):
Para el procesamiento estadístico se calculó la X, la DE y el CV para cada una de
las diluciones utilizadas. Se adoptó como criterio de aceptación que la imprecisión
intraensayo tuviera un CV ≤ 10 ± 2,5
Precisión interensayo (precisión intermedia o “reproducibilidad”):
Para el procesamiento estadístico se calculó la X, la DE y el CV de cada muestra
por día, y el CV interensayo. Se adoptó como criterio de aceptación que
este fuera ≤ 20 %
Exactitud:
se midió a través del ensayo de recuperación y del ensayo para evaluar el rango
de la curva estándar seleccionada
Linealidad:
se calculó el coeficiente de correlación (r) para la curva estándar utilizada en 6
ensayos diferentes, empleando el Programa ELISA para Windows Versión 1 del
CDC.15 Se tomó como criterio que r fuera ≥ 0,98
Recuperación
El porcentaje de recuperación se calculó mediante la fórmula que se describe a
continuación, y como criterio de aceptación se adoptó que el valor obtenido debía
oscilar entre 80-120 %

4. CONCLUSIONES

A través del presente trabajo podemos encontrar la importancia de conocer las

diferentes normas y de que están constituidas. A su vez, conocer los diferentes
conceptos o definiciones que se establecen en la mismas es fundamental para evitar
cualquier tipo de complicaciones durante el trabajo realizado.

Por otra parte, relacionar los conocimientos estadísticos con los diferentes
parámetros que surgen a través de los trabajos de investigación nos permite tener
mayor conocimiento de por qué se están obteniendo los resultados en el trabajo
realizado y si es que estos realmente tienen una importancia significativa, como
también si estos pueden ser repetidos o simplemente fueron irregularidades.

5. REFERENCIAS

USP 31–NF 26, Capítulo General <1225> Validación de métodos farmacopéicos

NORMA Oficial Mexicana NOM-177-SSA1-2013, Que establece las pruebas y
procedimientos para demostrar que un medicamento es intercambiable. Requisitos
a que deben sujetarse los Terceros Autorizados que realicen las pruebas de
intercambiabilidad. Requisitos para realizar los estudios de biocomparabilidad.
Requisitos a que deben sujetarse los Terceros Autorizados, Centros de
Investigación o Instituciones Hospitalarias que realicen las pruebas de
biocomparabilidad