Universidad central del ecuador

Facultad De Ciencias Químicas

Informe De Laboratorio de
Bioquímica
Número de práctica: 14
Título: Separación de aminoácidos por cromatografía y detección
mediante reacción de nianhidrina.
Fecha Realizado: 23/01/2020 Entregado: 30/01/2020
Integrantes Jiménez Jessenia, Maldonado Jandry, Mallitaxi Jhonny,
Manosalvas Katherine, Ocaña Hamilton
Grupo N°: 5
Horario: Jueves, 8:00 – 10:00

OBJETIVOS:

FUNDAMENTO TEÓRICO

La característica que distingue a la cromatografía de la mayoría de los métodos físicos y

químicos de separación, es que se ponen en contacto dos fases mutuamente inmiscibles. La
fase estacionaria y la móvil. Una muestra que se introduce en la fase móvil es transportada
a lo largo de la columna que contiene una fase estacionaria distribuida. Las especies de la
muestra experimentan interacciones repetidas (repartos) entre la fase móvil y la fase
estacionaria. Cuando ambas fases se han escogido en forma apropiada los componentes de
la muestra se separan gradualmente en bandas en la fase móvil. Al final del proceso los
componentes separados emergen en orden creciente de interacción con la fase estacionaria.
El componente menos retardado emerge primero, el retenido más fuertemente eluye al
último. El reparto entre las fases aprovecha las diferencias entre las propiedades físicas y/o
químicas de los componentes de la muestra. Los componentes adyacentes (picos) se
separan cuando el pico que sale después es retardado lo suficiente para impedir la
sobreposición con el pico que emergió antes. (Villagómez, 2015)
Las distintas técnicas cromatográficas se pueden dividir según cómo esté dispuesta la fase
estacionaria:

Cromatografía plana.- La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre un papel.
Las principales técnicas son:

 Cromatografía en papel
 Cromatografía en capa fina

Cromatografía en columna.- La fase estacionaria se sitúa dentro de una columna. Según el

fluido empleado como fase móvil se distinguen:

 Cromatografía de líquidos
 Cromatografía de gases
 Cromatografía de fluidos supercríticos
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Cromatografía en papel
En la cromatografía sobre papel, las interacciones del soluto con el papel hacen que los
compuestos se desplacen a velocidades diferentes.Una pequeña mancha de disolución que
contiene la muestra se aplica sobre una tira de papel cromatográfico a una distancia
aproximada de un centímetro de la base. La muestra es adsorbida en el papel. Esto significa
que la muestra entra en contacto con el papel y puede establecer interacciones. El papel es
sumergido en un disolvente adecuado (etanol o agua) e introducido en un contenedor
cerrado. (Castellano, 2013).

Cromatografía en capa fina

La cromatografía en capa fina (CCF) es una técnica cromatográfica que utiliza una placa
inmersa verticalmente en una fase móvil (eluyente). Esta placa cromatográfica consiste en
una fase estacionaria polar (comúnmente se utiliza sílica gel) adherida a una superficie
sólida. La fase estacionaria es una capa uniforme de un absorbente mantenido sobre una
placa, la cual puede ser de vidrio, aluminio u otro soporte (Castellano, 2013).
Determinación del Rf
La retención se puede explicar en base a la competencia que se establece entre el soluto a
separar y la fase móvil por adsorberse a los centros activos polares de la fase estacionaria.
Así, las moléculas de soluto se encuentran adsorbidas en la fase estacionaria y a medida que
se produce la elución van siendo desplazadas por la fase móvil. La retención y la
selectividad en la separación dependen de los valores respectivos de las constantes de los
diferentes equilibrios químicos que tienen lugar, que están en función de la polaridad del
compuesto, determinada por el número y naturaleza de los grupos funcionales presentes
(Freifelder, 2003).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Para la identificación de aminoácidos mediante cromatografía en capa fina a la muestra de
leche se le acidifico con HCl la cual al someter al calor se presenció la formación de un
precipitado coloidal coagulado como se puede notar en la figura 1; debido a la hidrolisis de
las proteínas presentes en la leche (caseína) que modifica la estructura primaria de las
mismas denominada hidrólisis ácida la cual se basa en la ebullición prolongada de la
proteína con soluciones ácidas fuertes (HCl y H2SO4). Este método destruye completamente
el triptófano y parte de la serina y la treonina. [ CITATION Cor14 \l 12298 ] .Al precipitado
obteniendo se filtró obteniendo una parte liquida o lactosuero (líquido con presencia de
proteínas séricas, enzimas y parte de lactosa) que se llevó a centrifugar.
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Figura 1. Formación de precipitado al colocar HCl en la leche

Una vez salida la muestra de la centrifugadora se presenció dos fases una inferior y una
superior tal y como se puede observar en la figura 2, de la cual se tomó una gota con ayuda
de un capilar y se colocó en el papel filtro anteriormente indicado la línea de inicio teniendo
dos lugares de sembrado (fase estacionaria) con 2 cm de separación para evitar que estos se
puedan topar. Una vez seco al papel se lo llevo al frasco que posee una solución de NH 4OH
y etanol en proporción 7:3 la cual es la fase móvil o eluyente el cual ascenderá por
capilaridad por la placa y arrastrará los componentes en forma diferenciada a lo largo de
ésta, produciendo “manchas” de los componentes. El grado de elución de las sustancias
dependerá tanto de su propia polaridad como de la polaridad del eluyente utilizado.
[ CITATION Gui \l 12298 ]. El mismo proceso se realizó en la placa de sílice

Figura 2. Presencia de lactosuero en la muestra de leche.

Sin embargo no se pudo identificar con claridad las distancias recorridas por las muestras
esto se puede deber a que se colocó una cantidad mayor la misma que también puede estar
muy concentrada a la de la solución de la fase móvil ya que la cantidad aplicada de fase
móvil tienen relación proporcional con la concentración ; así mismo con la cantidad de
eluyente puesto a que la muestra pudo haberse diluido en el mismo no apreciando
resultados positivos [ CITATION And16 \l 12298 ].De igual manera esto se puede deber a la
inclinación a la que se encontraba el papel filtro dentro de la cámara cromatográfica pues
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un ángulo de 20° es fundamental para que la solución sea absorbida por el papel filtro , este
ángulo también determina la velocidad en la que el líquido fluye [ CITATION Dav03 \l 12298 ]

CONCLUSIÓN

Bibliografía
Castellano, F. (2013). Cromatografía y otros tipos de cromatografía. Obtenido de
http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_altres.html
Coralía Aguiar T, L. V. (2014). Cromatograf{ia de aminoacidos,Hidrolisis de proteinas .
Chimborazo,Ecuador: Escuela superior politecnica de Chimborazo,Facultad de Ciencias .

Franco, A. G. (2016). Experimentos de Quimica organica con enfoque en ciencias de la vida .

Armenia,Quindio-Colombia: Ediciones Elizcom.

Freifelder, D. (2003). Técnicas de Bioquímica y Bilogía Molecular. Cromatografía. España:

Barcelona. Editorial Reverté, S. A.
(s.f.). Guia de Quimica Organica I. Mexico DF: UNAM. departamento de fisico quimica .

Villagomez, C. (2015). Cromatografía. Obtenido de

http://www.dcne.ugto.mx/Contenido/MaterialDidactico/QuimicaBioinorganica/1.9_Cromat
ografia.pdf