TFC Calidad

PROCEDIMIENTO PARA LA Rev.
1
LABORATORIO XXX VALIDACIÓN DE MÉTODOS
ANALÍTICOS Página 2 de 15
PROCEDIMIENTO PARA LA
VALIDACIÓN DE MÉTODOS
ANALÍTICOS
TRABAJO FINAL
LA CALIDAD EN LOS LABORATORIOS QUÍMICOS:
GESTIÓN, SISTEMA Y CONTROL DE CALIDAD
Paula Labata Medrano

Máster Universitario en Ciencia y Tecnología Química
Universidad Nacional de Educación a Distancia
PROCEDIMIENTO PARA LA Rev. 1
ÍNDICE
1. OBJETO ...................................................................................................................... 3
2. ALCANCE .................................................................................................................... 3
3. REFERENCIAS ............................................................................................................. 3
4. RESPONSABILIDADES................................................................................................. 3
5. DEFINICIONES ............................................................................................................ 4
6. DESCRIPCIÓN DEL MÉTODO ...................................................................................... 6
6.1. Preparación ........................................................................................................ 7
6.2. Equipos y materiales .......................................................................................... 7
6.3. Parámetros a determinar................................................................................... 8
6.4. Determinación de los parámetros ..................................................................... 9
6.5. Interpretación de resultados ........................................................................... 13
6.6. Registros........................................................................................................... 13
7. Historial de cambios ................................................................................................ 15

1. OBJETO
El objeto del presente procedimiento es describir el proceso seguido por el

Laboratorio XXX para llevar a cabo la validación de los métodos analíticos
definidos en el mismo, cumpliendo así la normativa vigente y el Manual de
Calidad del laboratorio.
2. ALCANCE
Este procedimiento es de aplicación a todos los métodos analíticos no

normalizados o de desarrollo interno del laboratorio, a los métodos aplicados por
primera vez en el laboratorio y a los métodos normalizados a los que se haya
incorporado alguna modificación o mejora o bien se apliquen fuera de su alcance
previsto.
Asimismo, en el caso de métodos normalizados o métodos implantados en el

laboratorio, se realizarán comprobaciones para verificar que dichos métodos
cumplen los requisitos analíticos correspondientes a cada uno de ellos.
3. REFERENCIAS
Como referencias básicas para la elaboración de este procedimiento se han

tomado los criterios establecidos en los siguientes documentos:
 Manual de Calidad del Laboratorio XXX

 Norma UNE-EN ISO/IEC 17025:2017: Requisitos generales para la
competencia de los laboratorios de ensayo y calibración
 Eurachem. La Adecuación al Uso de los Métodos Analíticos – Una Guía
para Validación de Métodos y Temas Relacionados
4. RESPONSABILIDADES
Para llevar a cabo la validación de un método analítico, el Responsable de

Calidad, asesorado por los Jefes de Laboratorio y los Licenciados en Química o
Ingenieros Químicos deben establecer previamente y ser conocedores de
los valores teóricos o esperados para los parámetros analíticos del método
objeto de estudio.
Los Analistas son los responsables de llevar a cabo cada una de las etapas del
proceso de validación, asesorados por los Jefes de Laboratorio.
El Responsable de Calidad ha de comprobar que dicho proceso se ha realizado

adecuadamente, siguiendo en todo momento los pasos establecidos en el
presente documento.
Asimismo, tanto los Jefes de Laboratorio como el Responsable de Calidad deben

asegurarse de que los métodos desarrollados en el laboratorio han sido
validados antes de su aplicación.
5. DEFINICIONES
Analito: componente de interés analítico en una muestra, cuya presencia y

concentración se desean conocer.
Muestra: Fracción de una cantidad mayor de un material obtenida en una

operación individual de toma de muestra.
Blanco de reactivo: blanco que contiene todos los reactivos y disolventes

empleados en el método.
Blanco de muestra: muestra que no contiene analito o que lo contiene en

cantidades indetectables por el método analítico.
Material fortificado o adicionado: material o muestra a la cual se le ha

adicionado una concentración conocida del analito de interés.
Patrones de medida: material empleado como referencia para calibrar equipos

de medida o contrastar la trazabilidad de las medidas.
Materiales de referencia certificados (MRCs): material en el que uno o más

valores de sus propiedades son suficientemente homogéneos y bien definidos
como para emplearlo en la evaluación de un método, acompañado de un
certificado en el cual se incluyen valores de sus propiedades junto con su
incertidumbre y el nivel de confianza.
Validación de métodos analíticos: procedimiento que confirma o establece,

mediante el examen y la aportación de evidencias objetivas, que las
características técnicas de dichos métodos cumplen con los requisitos
particulares para un uso específico de los resultados analíticos obtenidos
mediante los mismos.
Selectividad: nivel al que puede determinarse uno o varios analitos particulares

en mezclas o matrices complejas sin interferencias de otros componentes
presentes que muestran un comportamiento similar.
Sensibilidad: variación de la respuesta del instrumento de medida asociada a

una variación en la magnitud medida. Equivale al valor de la pendiente de la
curva de calibración.
Límite de detección (LOD): mínima concentración de analito que puede ser

detectada por el método analítico a un nivel aceptable de confianza de que dicha
concentración es significativamente superior a cero.
Límite de cuantificación (LOQ): nivel más bajo en el cual el desempeño del

método analítico es aceptable para una aplicación específica, es decir, la
concentración más baja de analito que puede ser determinada con un nivel
aceptable de exactitud y de precisión.
Exactitud: expresa el grado de concordancia entre un único resultado obtenido

mediante el método analítico y el valor teórico, de referencia o certificado.
Precisión: grado de concordancia entre los resultados obtenidos mediante

ensayos independientes desarrollados en las mismas condiciones.
Repetibilidad: concepto de precisión referida a la variabilidad de los resultados

obtenidos mediante medidas lo más estables posibles: mismo analista, con el
mismo material y el mismo equipo en el mismo laboratorio y en un periodo breve
de tiempo.
Reproducibilidad: concepto de precisión referida a la variabilidad de los

resultados obtenidos mediante medidas en condiciones lo más heterogéneas
posibles: distinto analista con distinto material y equipos y en distinto laboratorio
y en un periodo de tiempo más amplio.
Linealidad: capacidad de un método para obtener resultados proporcionales a

la concentración del analito en la muestra, dentro de un intervalo determinado.
El intervalo de linealidad es el intervalo de concentraciones en el que el método
presenta una sensibilidad constante.
Intervalo dinámico o de trabajo: intervalo de concentraciones en el cual el

método proporciona resultados con una exactitud y precisión aceptables.
Normalmente se encuentra entre el límite de cuantificación y la concentración a
partir de la cual se empiezan a observar anomalías en la sensibilidad de la
técnica.
Interferencias: compuestos presentes en las muestras que pueden modificar

(aumentar o disminuir) la señal de respuesta del equipo e introducir un sesgo en
la medida.
Incertidumbre: intervalo asociado con un resultado de medida que expresa el

intervalo de valores que razonablemente pueden atribuirse a la cantidad que se
está midiendo.
Recuperación: procedimiento que establece si un método analítico es

cuantitativo o no y que se refiere a la eficacia en la extracción del analito de la
matriz de la muestra en que se encuentra.
Robustez: medida de la capacidad del método analítico para permanecer

inalterado frente a pequeñas variaciones premeditadas de los parámetros del
método. Proporciona el índice de confiabilidad del método durante su uso
habitual.
6. DESCRIPCIÓN DEL MÉTODO
La validación de los métodos analíticos se ha de registrar en los informes de

validación, los cuales se deben redactar, incluyendo los siguientes apartados:
1. OBJETO
Sección en la cual se define la finalidad del proceso de validación.
2. ALCANCE
Donde se especifica cuál es el método a validar y en qué condiciones, incluyendo

también una breve descripción de dicho método.
3. REFERENCIAS
Apartado en el cual se citan todos los documentos consultados para llevar a cabo
el proceso de validación (bibliografía, normas, instrucciones…).
4. RESPONSABILIDADES
Donde se nombran los responsables de cada una de las etapas del proceso
(analistas, licenciados, jefes de laboratorio, responsables de calidad…).
5. CARACTERÍSTICAS DEL DESEMPEÑO (DESCRIPCIÓN)
Sección en la que se describen las características de desempeño del método,

los requerimientos específicos, las actividades y los experimentos que se han de
realizar y los resultados de los mismos, así como su interpretación.
En este apartado se han de describir las siguientes etapas:
6.1. Preparación
Se especifican las muestras necesarias para llevar a cabo el proceso de

validación, indicando también cómo se realiza el muestreo de las mismas y las
condiciones en las cuales se deben almacenar hasta su análisis, así como el
tratamiento y acondicionamiento de las mismas y las precauciones de su uso.
6.2. Equipos y materiales
También se han de definir los materiales y equipos necesarios para validar el

método de análisis:
La instrumentación, el material volumétrico, los reactivos empleados y una serie

de herramientas de validación: blancos de reactivo, blancos de muestra,
muestras de rutina, disoluciones patrón, material fortificado, materiales de

referencia certificados…
6.3. Parámetros a determinar
En este apartado se establecen las características de desempeño del método

que deben ser evaluadas del método analítico en cuestión.
Los parámetros más evaluados son los siguientes, aunque depende el analizar
unos u otros del método a validar y de los requisitos y el objetivo previamente
establecidos:
Parámetros que relacionan la concentración del analito con la respuesta

del instrumento:
 Linealidad
 Intervalo dinámico o de trabajo
Parámetros que indican la dispersión de una serie de datos en torno a un

valor medio o central:
 Repetibilidad
 Reproducibilidad
Parámetros que establecen la diferencia entre el valor obtenido por el

método y el valor tomado como verdadero o de referencia:
 Exactitud
 Recuperación
Parámetros que determinan la capacidad de análisis del método:
 Sensibilidad
 Límite de detección
 Límite de cuantificación
 Robustez
Parámetros que definan la capacidad de un método analítico para

determinar un analito sin interferencias:
 Selectividad
Asimismo, también se han de definir los valores límite de aceptación para cada
una de los parámetros analíticos, es decir, se deben establecer los requisitos
según las necesidades o la finalidad con la que se va a emplear el método
analítico.
6.4. Determinación de los parámetros
 Selectividad:
La selectividad del método analítico puede estudiarse mediante el análisis de
muestras de ensayo a las cuales se les ha adicionado previamente una serie de
interferencias específicas o mediante la comparación de la medida de una
muestra real o de ensayo con otra realizada por otro método independiente.
 Límite de detección y límite de cuantificación:

El cálculo del límite de detección se determina mediante el análisis repetitivo de
un número (generalmente 10) de muestras, preferentemente blanco, es decir,
que no contengan cantidades detectables de analito, o de ensayo con una
concentración baja de analito, inferior al LOQ esperable, empleándose en su
defecto blancos de reactivo fortificados con concentraciones bajas de analito o
sin fortificar.
El límite de detección se calcula a partir de los resultados obtenidos en

condiciones de repetibilidad, según la ecuación:
𝐿𝑂𝐷 = 3 ∙ 𝑠′0
Siendo 𝑠′0 :
𝑠0 1 1
𝑠′0 = o 𝑠′0 = 𝑠0 √ +
√𝑛 𝑛 𝑛𝑏
Si no se corrigen o si sí que lo hacen los resultados por el blanco en el desarrollo

del método, y siendo 𝑠0 la desviación estándar de los resultados obtenidos en
las pruebas realizadas, n el número de réplicas (generalmente 10) y 𝑛𝑏 el número
de medidas de blanco que se emplean en el método para corregir los resultados
obtenidos en el mismo.
A veces no es necesario calcular el límite de detección. Esto ocurre en los

métodos en los cuales no se hace referencia al mismo en los informes de
análisis, informando <LOQ cuando el resultado se encuentre por debajo del
límite de cuantificación.
El límite de cuantificación se calcula a partir de la desviación estándar calculada

en el apartado anterior con la siguiente fórmula:
𝐿𝑂𝑄 = 𝑘𝑄 ∙ 𝑠′0
Siendo 𝑘𝑄 un factor que generalmente es 10, aunque también se emplean en

ocasiones los valores de 5 o 6.
 Intervalo dinámico o de trabajo y linealidad:

El intervalo de trabajo se extiende desde el límite de cuantificación hasta un límite
superior a partir del cual se observan anomalías en la sensibilidad analítica,
habiendo entre ambos puntos una relación conocida (lineal, por lo general) entre
la respuesta instrumental y la concentración del analito.
Por lo tanto, en esta etapa es necesario establecer dicha relación, comprobar

que la calibración del instrumento es adecuada y garantizar que el intervalo
dinámico es adecuado al alcance del método.
Para llevar a cabo esto, se preparan una serie de patrones o muestras referencia
(6-10) de concentraciones conocidas y uniformemente espaciadas, además del
blanco, que cubran el rango de trabajo esperado, llegando a sobrepasar al
mismo en un 10-20%, representando posteriormente los resultados obtenidos
para los mismos en una gráfica. La linealidad se puede estimar de forma visual
al observar la gráfica obtenida, no obstante, se deben calcular las estadísticas
de regresión apropiadas (el coeficiente de correlación, los gráficos de
residuales…). También se puede calcular la pendiente de la recta en cada punto,
comprobando que no se aleje del valor medio más de un porcentaje determinado.
En el caso de que no se cumplan los requisitos de linealidad, se aumenta el

número de patrones o muestras de referencia o se aplica otra función
matemática con el objetivo de obtener una curva de calibración más apropiada
para el método analítico a validar y a su alcance.
 Sensibilidad:
La sensibilidad se calcula a partir de la pendiente de la curva de calibración en
cada punto. No es un parámetro muy importante en los procesos de validación,
empleándose principalmente en técnicas electroquímicas y espectrofotométricas
y siendo más importante a la hora de realizar futuras calibraciones y
seguimientos del método.
 Exactitud
La exactitud de un método puede establecerse determinando lo que se conoce
como sesgo, es decir, la diferencia entre el promedio de los resultados obtenidos
en el análisis y el valor certificado.
Para ello, se analizan materiales de referencia certificados o productos químicos

normalizados, pudiendo también determinarse este parámetro mediante la
comparación de los resultados con los obtenidos mediante otros métodos
independientes ya validados, procedimientos alternativos o mediante estudios
de intercomparación o análisis de recuperación con muestras adicionadas.
 Análisis de materiales de referencia certificados:

Se realizan diez medidas de los mismos y se calcula el sesgo, b, el sesgo relativo
en porcentaje, b (%), o la recuperación relativa en porcentaje, R (%):
𝑏 = 𝑥̂ − 𝑥𝑟𝑒𝑓
𝑥̂ − 𝑥𝑟𝑒𝑓
𝑏(%) = × 100
𝑥𝑟𝑒𝑓
𝑥̂
𝑅(%) = × 100
𝑥𝑟𝑒𝑓
Siendo 𝑥̂ el promedio de las diez réplicas y 𝑥𝑟𝑒𝑓 el valor certificado para el

material de referencia.
 Estudios de recuperación:
Se realizan medidas para blancos de matriz o muestras de ensayo con y sin
adicionar en un intervalo amplio de concentraciones. Se miden 10 réplicas. Y se
calcula la diferencia entre las muestras adicionadas y sin adicionar, evaluando la

recuperación de los analitos adicionados:
𝑥̅′ − 𝑥̅
𝑅= × 100
𝑥𝑎𝑑𝑖𝑐𝑖𝑜𝑛𝑎𝑑𝑜
 Comparando los resultados con los obtenidos mediante otro método
alternativo y/o de referencia o mediante ensayos de intercomparación:
Aplicando en este caso las mismas ecuaciones que en la primera alternativa.
Para comparar los resultados obtenidos y los de referencia o los obtenidos por
otros métodos se pueden realizar test estadísticos, como el test de Student.
 Precisión, reproducibilidad y repetibilidad:

El cálculo de la precisión se realiza a través del estudio de las características de
desempeño correspondientes al mismo la repetibilidad y la reproducibilidad.
Para el estudio de la repetibilidad se analizan entre 6 y 15 repeticiones o réplicas

de la misma muestra (materiales de referencia, muestras excedentes de ensayo
o blancos de muestra con adiciones de concentraciones comprendidas dentro
del intervalo de trabajo). Las pruebas se llevan a cabo con el mismo analista, los
mismos equipos y reactivos, la misma calibración, en el mismo laboratorio y de
forma ininterrumpida, es decir, en un periodo corto de tiempo.
Por otro lado, para determinar la reproducibilidad, se analizan el mismo tipo de

muestras, pero en condiciones más heterogéneas: distintos analistas en
diferentes laboratorios, con otros equipos, reactivos y calibraciones y en periodos
de tiempo más prolongados.
En estas condiciones se calculan la desviación estándar de repetibilidad y de

reproducibilidad y el coeficiente de variación.
 Incertidumbre de la medida:
La estimación de la incertidumbre total de la medida debe tener en cuenta la
precisión y el sesgo del método, la incertidumbre asociada a la calibración de
todos los materiales e instrumentos empleados…
 Robustez:
Para llevar a cabo el estudio de robustez de un método lo primero que hay que
hacer es identificar los factores que influyen significativamente en el mismo, por
ejemplo, la concentración de los reactivos, el orden con el que se adicionan, la
temperatura, la duración de según qué etapas…
Se seleccionan inicialmente unos valores para dichos factores (normalmente los

especificados en el procedimiento del método) y se estudia la influencia que tiene
el hecho de modificar ligeramente dichos parámetros en el método (en su
exactitud, precisión etc.).
Para ello, se suele llevar a cabo un experimento Plackett-Burman, que consiste

en estudiar de uno en uno cada uno de los factores, es decir, se mantienen
constantes e inalterados los valores de todos los factores, modificando
únicamente uno de ellos, haciendo lo mismo para cada uno de los factores.
Posteriormente se evalúan los efectos de los distintos factores mediante los
análisis estadísticos pertinentes.
6.5. Interpretación de resultados
En cada uno de los parámetros estudiados se debe indicar la fórmula o ecuación

empleada para su cálculo, especificando el significado de cada una de sus
variables. También se deben adjuntar las gráficas realizadas y los espectros y
cromatogramas si los hay.
También se deben comparar dichos resultados con los criterios o requisitos que
se han establecido e indicado previamente en el informe para su aprobación o
rechazo.
Una vez conocidos los parámetros de validación del método analítico, se ha de

describir un plan de control de calidad interno del método en cuestión, de manera
que, midiendo patrones de concentración conocida y diferente en cada tanda de
análisis y repitiendo muestras (duplicadas, ciegas) de forma periódica, se
revalide el método de manera continua.
6.6. Registros
Los informes de validación serán realizados por los licenciados químicos y los
responsables y técnicos de calidad, los cuales también serán los responsables
de su revisión periódica. Los jefes de laboratorio serán los encargados de
aprobar dicho documento y de ponerlo en circulación en el laboratorio.
El responsable de calidad, junto con los jefes de laboratorio y los licenciados,

archivarán los registros relacionados con la validación del método analítico, los
cuales se conservarán mientras éste esté vigente y se aplique en el laboratorio.
7. Historial de cambios
REV. FECHA PÁGINA/S CAUSAS DEL CAMBIO

0 18/05/2021 13 Edición preliminar
1 29/05/2021 13 Cambios de formato
Realizado por: Aprobado por:
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6. DESCRIPCIÓN DEL MÉTODO ...................................................................................... 6

6.1. Preparación ........................................................................................................ 7

6.2. Equipos y materiales .......................................................................................... 7

6.3. Parámetros a determinar................................................................................... 8

6.4. Determinación de los parámetros ..................................................................... 9

6.5. Interpretación de resultados ........................................................................... 13

7. Historial de cambios ................................................................................................ 15

El objeto del presente procedimiento es describir el proceso seguido por el

Este procedimiento es de aplicación a todos los métodos analíticos no

Asimismo, en el caso de métodos normalizados o métodos implantados en el

Como referencias básicas para la elaboración de este procedimiento se han

 Manual de Calidad del Laboratorio XXX

Para llevar a cabo la validación de un método analítico, el Responsable de

El Responsable de Calidad ha de comprobar que dicho proceso se ha realizado

Asimismo, tanto los Jefes de Laboratorio como el Responsable de Calidad deben

Analito: componente de interés analítico en una muestra, cuya presencia y

Muestra: Fracción de una cantidad mayor de un material obtenida en una

Blanco de reactivo: blanco que contiene todos los reactivos y disolventes

Blanco de muestra: muestra que no contiene analito o que lo contiene en

Material fortificado o adicionado: material o muestra a la cual se le ha

Patrones de medida: material empleado como referencia para calibrar equipos

Materiales de referencia certificados (MRCs): material en el que uno o más

Validación de métodos analíticos: procedimiento que confirma o establece,

Selectividad: nivel al que puede determinarse uno o varios analitos particulares

Sensibilidad: variación de la respuesta del instrumento de medida asociada a

Límite de detección (LOD): mínima concentración de analito que puede ser

Límite de cuantificación (LOQ): nivel más bajo en el cual el desempeño del

Exactitud: expresa el grado de concordancia entre un único resultado obtenido

Precisión: grado de concordancia entre los resultados obtenidos mediante

Repetibilidad: concepto de precisión referida a la variabilidad de los resultados

Reproducibilidad: concepto de precisión referida a la variabilidad de los

Linealidad: capacidad de un método para obtener resultados proporcionales a

Intervalo dinámico o de trabajo: intervalo de concentraciones en el cual el

Interferencias: compuestos presentes en las muestras que pueden modificar

Incertidumbre: intervalo asociado con un resultado de medida que expresa el

Recuperación: procedimiento que establece si un método analítico es

Robustez: medida de la capacidad del método analítico para permanecer

6. DESCRIPCIÓN DEL MÉTODO

La validación de los métodos analíticos se ha de registrar en los informes de

Sección en la cual se define la finalidad del proceso de validación.

Donde se especifica cuál es el método a validar y en qué condiciones, incluyendo

5. CARACTERÍSTICAS DEL DESEMPEÑO (DESCRIPCIÓN)

Sección en la que se describen las características de desempeño del método,

En este apartado se han de describir las siguientes etapas:

Se especifican las muestras necesarias para llevar a cabo el proceso de

6.2. Equipos y materiales

También se han de definir los materiales y equipos necesarios para validar el

La instrumentación, el material volumétrico, los reactivos empleados y una serie

muestras de rutina, disoluciones patrón, material fortificado, materiales de

6.3. Parámetros a determinar

En este apartado se establecen las características de desempeño del método

Parámetros que relacionan la concentración del analito con la respuesta

Parámetros que indican la dispersión de una serie de datos en torno a un

Parámetros que establecen la diferencia entre el valor obtenido por el

Parámetros que determinan la capacidad de análisis del método:

Parámetros que definan la capacidad de un método analítico para

6.4. Determinación de los parámetros

 Límite de detección y límite de cuantificación:

El límite de detección se calcula a partir de los resultados obtenidos en

Si no se corrigen o si sí que lo hacen los resultados por el blanco en el desarrollo

A veces no es necesario calcular el límite de detección. Esto ocurre en los