PRACTICAS ADECUADAS EN EL

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

CAPITULO 1117, 1051 (USP 40)

Farmacopea Nacional de los Estados Unidos

Mexicanos (FEUM)

Norma Oficial Mexicana NOM-059-SSA1-2015

INSTALACIONES
 INSTALACIONES
El laboratorio de microbiología debe contar con áreas
separadas:
Ø Área separada para poder realizar
Limpia
pruebas de esterilidad
• Cuenta con diferenciales de presión que
ayuden al control de la contaminación a
través de barreras de entrada de aire
(presión positiva).
• Área para análisis generales (microcuenta,
valoración, efectividad antimicrobiana, etc.)
Áreas
Ø Área separada para poder realizar el
Cepario manejo de los microorganismos (presión
negativa).

Autoclaves, Lavado de material

Incubación
PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE
MEDIOS DE CULTIVO
 PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE
MEDIOS DE CULTIVO.

- Medios de cultivo: son la base de la mayoría de

las pruebas microbiológicas.

- Elegir los medios o los componentes adecuados,

según la bibliografía o la metodología indicada.

- Seguir al pie de la letra la preparación de los

medios de cultivo para tener medios de calidad.
- Utilizar utensilios y espátulas limpias para evitar
que sustancias extrañas, alteren la composición de
los medios.
 PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE
MEDIOS DE CULTIVO.
c) Fotografías de los modelos validados donde se
indiquen la posición y cantidad de contenedores
dentro de la cámara del modelo validado.
 PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE
MEDIOS DE CULTIVO.

- No almacenar un agar a temperaturas iguales o

por debajo de 0°C, ya que se daña la estructura del
gel
- Proteger a los medios de la exposición de la luz
(si aplica) y de las temperaturas excesivas
- Si se van a almacenar el agar por un tiempo
prolongado, se deben colocar en un envase
hermético que evite la pérdida de humedad.
 PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE
MEDIOS DE CULTIVO.

- Realizar un estudio de caducidad de medios de

cultivo preparados en el laboratorio, para poder
sustentar su viabilidad a su fecha de expiración
 PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE
MEDIOS DE CULTIVO.

- Prueba de esterilidad a los medios de cultivo:

Todos los medios de cultivo (preparados en el

laboratorio o comprados con un proveedor) deben
cumplir con la prueba de esterilidad, para lo cual se
deben colocar en la incubadora un porcentaje del
lote (4% de acuerdo a la FEUM), en las mismas
condiciones de incubación que las usadas en los
análisis de rutina.
 MEDIOS DE CULTIVO- PROMOCIÓN DE
CRECIMIENTO.

- Promoción de crecimiento de medios de cultivo:

Procedimiento donde se describa como mínimo la

siguiente información:

a) Lista de microorganismos a utilizar para realizar

la promoción a cada medio de cultivo
b) Cantidad de microorganismo a inocular (mL)
c)Tiempo y temperatura de incubación,
interpretación de los resultados obtenidos
 PREGUNTA
Cuando debe realizarse la prueba de promoción de
crecimiento de los medios de cultivo?

a) Antes de utilizarlos en cualquier prueba en el

laboratorio
b) Se realiza cuando se tenga tiempo
c) No es necesario realizar esta prueba
d) Se puede realizar al mismo tiempo que se incuba la
prueba microbiológica donde se utilizaron, sin embargo
si los resultados de la promoción no cumplen con los
límites, la prueba de laboratorio se invalida.
e) Las opciones a y d son correctas
MANEJO DEL CEPARIO
 MANEJO DEL CEPARIO

Los microorganismos a utilizar serán los

autorizados en la FEUM/USP o cualquier otro
compendio autorizado, tomar en cuenta el ATCC
(American type culture collection) indicado.

Una vez abiertos y antes de utilizarlos los

microorganismos deben ser identificados hasta
genero y especie para asegurar que la cepa esta
pura y no esta contaminada
 INTRODUCCIÓN
El agua es la sustancia más utilizada en la
industria farmacéutica, ya sea como:

- Disolvente o ingrediente de preparados

farmacéuticos

- En el lavado de envases

- En las operaciones de limpieza de áreas y

equipos
 MUESTREO Y ANÁLISIS DE AGUA DE PLANTA

ESPECIFICACIONES DE LOS TIPOS DE AGUA

MÁS UTILIZADOS
AGUA AGUA PARA
PRUEBA
PURIFICADA INYECTABLES
pH 5.0 – 7.0 5.0 – 7.0
Conductividad ≤ 2.1 µS / cm2 ≤ 2.1 µS / cm2
TOC 0.5 ppm (mg / L) 0.5 ppm (mg / L)
Endotoxina NA < 0.25 UE / ml

Fuente de información: FEUM

1. Pruebas de Esterilidad.
 PRUEBA DE ESTERILIDAD

¿PARA QUÉ ESTA PRUEBA?

DEMOSTRAR LA ESTERILIDAD EN
SUSTANCIAS, PREPARACIONES
FARMACÉUTICAS O DISPOSITIVOS
MÉDICOS
 PRUEBA DE ESTERILIDAD

INTRODUCCIÓN.

La prueba tiene como finalidad investigar la

presencia de Microorganismos viables en
sustancias, preparaciones o dispositivos médicos
que requieren ser estériles, usando los medios de
cultivo adecuados.
 PRUEBA DE ESTERILIDAD

Se debe de llevar a cabo en condiciones

asépticas, usando campanas o módulos de flujo
laminar localizados en cuartos limpios, o bien un
aislador.

Se deben tener las precauciones necesarias para

evitar contaminar la muestra y para no afectar a
los microorganismos que pudieran estar presentes
AISLADOR CAMPANA DE FLUJO LAMINAR
 PRUEBA DE ESTERILIDAD

Existen dos métodos para efectuar la prueba de

esterilidad:

- Método de filtración por membrana

- Método Directo
 PRUEBA DE ESTERILIDAD

Identificación Prueba Incubación Revisión Resultado

• Lote • Método de • Medio • 14 días • Crecimiento

• Fecha filtración Líquido de • MT 30° a = Turbidez
• Analista • Método Tioglicolato 35°C • No
directo • Soya • MST 20° a crecimiento
Tripricaseína 25°C = Estéril
 CUANDO INVALIDAR LA PRUEBA DE
ESTERILIDAD
Causas
Ø Datos del control microbiológico del área de prueba
presentan desviaciones.
Ø La revisión del procedimiento de pruebas demuestra
fallas.
Ø Los controles negativos presentan crecimiento
microbiano.
Ø La identificación de los microorganismos aislados revela
errores relacionados con personal, material y/o la
técnica.

Prueba inválida
Ø Repetir prueba con el mismo número de muestras.
 CUANDO INVALIDAR LA PRUEBA DE
ESTERILIDAD
Resultados de la segunda prueba
Ø Si en la nueva prueba NO se observa crecimiento
microbiano el producto cumple con la prueba de
esterilidad.

Ø Si en la nueva prueba se observa crecimiento

microbiano, el producto no cumple con la prueba de
esterilidad.
Prueba de Límites microbianos
 PRUEBA DE LIMITES MICROBIANOS

INTRODUCCIÓN

Se le denomina así al conjunto de pruebas cuyo

objetivo es evaluar la calidad sanitaria de
productos farmacéuticos (materias primas,
productos intermedios y terminados), mediante el
recuento de microorganismos mesófilos
aeróbios, hongos filamentosos y levaduras; así
como la investigación de microorganismos
objetables en dichos productos.
PRUEBA DE ENDOTOXINA
 INTRODUCCIÓN

Las endotoxinas bacterianas Gram negativas, son

la causa más común de reacciones tóxicas
asociadas a la contaminación de productos
farmacéuticos y artículos médicos estériles.

Las endotoxinas son lipopolisacáridos de paredes

bacterianas gram negativas cuya actividad para
generar una respuesta negativa en el ser humano
(temperatura) es mayor que la de otras sustancias
pirogénicas de estructura diferente.
La prueba para determinar o cuantificar
endotoxinas utiliza el lisado de amebocitos de
Limulus polyphemus o Tachypleus tridentatus
ya que este lisado es la sustancia más sensible
cuando reacciona con endotoxinas bacterianas
presentando gelificación

Existen dos métodos para esta determinación:

Método A: Formación de un gel (Gel-Clot)

Método B: Fotométrico, que dependiéndo
de la forma de cuantificación puede ser:

Turbidimétrico ( cinético y de punto final),

basado en el desarrollo de turbiedad
después de la ruptura de un sustrato
endógeno.

Cromogénico (cinético y de punto final),

basado en el desarrollo de color después
de la ruptura del complejo sintético
péptido-cromógeno.
- La temperatura de incubación se debe
mantener estable 37 °C +/- 1 °C, durante
los 60 minutos +/- 2 minutos que dura la
prueba.

- Las muestras positivas deben presentar

una gelificación integra al ser invertido el
tubo.

- Equipos con calibración, mantenimiento y

limpieza de los equipos utilizados para
incubar las muestras (baño seco)