RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS

Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL

CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 1 de 7 ELABORADO POR: D. Hualpa S. APROBADO POR: M. Jácome

UNIVERSIDAD TÉCNICA PARTICULAR DE LOJA ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS

PRACTICA: Determinación de aerobios mesófilos por agar. OBJETIVO: Cuantificar y reconocer las colonias de microorganismos aerobios mesófilos en agar plate count.

1.

ALCANCE

Se aplica a la enumeración de Aerobios mesófilos en alimentos. El método es apropiado para la determinación de Aerobios mesófilos en alimentos. 2.- DESCRIPCIÓN DEL TIPO DE ITEM La muestra es alimentos en general, excepto productos fermentados. 3. PRINCIPIO

Las bacterias aerobias mesófilas son todas las bacterias capaces de desarrollarse en un medio nutritivo incubado en condiciones de aerobiosis. Las bacterias mesófilas tienen varios usos como indicadores:  Determinan la posible presencia de bacterias patógenas. La mayoría de bacterias patógenas son mesófilas y por tanto un recuento elevado de bacteriuas mesófilas aerobias indica que existieron condiciones que favorecieron el que ciertos microorganismos patógenos proliferaran considerablemente encontrándose en el alimento en gran número. Indican la calidad sanitaria de un alimento natural o procesado, ya que éstos productos deben satisfacer ciertas especificaciones microbiológicas (Normas de Calidad). Estiman la duración de la vida de anaquel de un producto, ya que generalmente existe una relación directa entre el grado de descomposición y el contenido microbiano (excepto en productos fermentados o madurados.

 

para evitar contaminarse. APROBADO POR: M. mascarilla Incinerar. Lavarse las manos periódicamente con jabón antibacterial y secarse con toallas desechables. Las pipetas que han sido utilizadas después de la siembra se las debe sumergir en agua con cloro. Hualpa S. gorro. No hablar mientras se realiza la siembra. azas de platino 5 veces después de haber terminado el trabajo de siembra. Jácome 4. Trabajar con guantes. Ubicar correctamente las secciones donde se encuentra el material contaminado del material estéril. No ingresar con alimentos. CONDICIONES AMBIENTALES REQUERIDAS Y PERÍODO DE ESTABILIZACIÓN QUE SEA NECESARIO. para la recuperación de los microorganismos tener cuidado en trabajar en la cámara de seguridad biológica. - APARATOS Y EQUIPOS: 1 Erlenmeyer de 500 ml 3 Erlenmeyer de 250 o 125 ml 3 pipetas de 10 ml 3 pipetas de 1 ml Un mechero Un trípode Una malla de amianto 7 cajas Petri .. 7. Al usar la Cepa de Referencia ATCC 6538. PARÁMETRO Y RANGO >1 ufc/g 5. agujas.MEDIDAS DE SEGURIDAD En el laboratorio de microbiología se debe considerar lo siguiente: Ingresar al laboratorio con mandil limpio y desinfectarse los zapatos con una solución de alcohol al 70%. Las condiciones ambientales en las que normalmente se trabaja son: Temperatura: 18 – 24 ºC Humedad Relativa: 45 – 65 % 6.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 2 de 7 ELABORADO POR: D.

un 9.6 VERIFICACIONES PREVIAS Se debe verificar lo siguiente:  Revisar los termómetros en la etiqueta que se encuentren dentro de la fecha de calibración. Hualpa S.  Revisar que los medios de cultivo no estén expirados.2 TRANSPORTE DE LOS ITEMS DE ENSAYO Las muestras deben transportarse en una bandeja adecuada para el efecto para evitar derrames o daños en las mismas. DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO 9. APROBADO POR: M. 9.1 MARCAS DE IDENTIFICACIÓN Las muestras para la determinación de Aerobios Mesófilos deben identificarse con mismo código asignado. aureus LSRC-6538 Certificado de lote de fabricación Cepa pura bacteriana con certificado 9. Cámara de seguridad Biológica 2B2 8.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 3 de 7 ELABORADO POR: D. Jácome - Fósforos Contador de colonias Incubadora a 35 ºC. REACTIVOS. . PATRONES DE REFERENCIA Y MATERIALES DE REFERENCIA REACTIVO CODIGO DE LABORATORIO ESPECIFICACIONES Agar Plate count Peptona de caseína Cepa de referencia de S.

Al realizar dichos contajes determinar el contaje promedio / 1 cm 2 y multiplicar por 30 (área de crecimiento circular de 30 cm2). Jácome 9.9.Poner las placas en la incubadora a 35 grados centígrados por 48 horas. . Se puede hacer contajes estimados en placas con más de 250 colonias y puede ser reportado como contaje estimado. .RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 4 de 7 ELABORADO POR: D. Hualpa S.31. busque algunas de las siguientes características típicas del cultivo: colonias de color crema. agitar suavemente 3 veces a la izquierda. 9.2. 3 a la derecha una arriba y otra abajo sin levantar la caja de la mesa. . FUNCIONAMIENTO Y CALIBRACIÓN.9. multiplicar el número total de colonias de aerobios mesófilos por placa por el respectivo factor de dilución. Se realiza una verificación de todos los registros:    La temperatura de la incubadora (35 +/. Si se va a trabajar con mechero se debe revisar las conexiones de gas 9.1 SIEMBRA Pesar asépticamente 10 gramos de muestra en 90 ml de agua peptonada para obtener la -1 dilución 10 luego seguir preparando las siguientes diluciones de acuerdo al tipo de alimento.Con una pipeta perpendicular a la caja Petri poner 1 ml de cada una de las diluciones. Para calcular el contaje de aerobios mesófilos.Realizar el conteo entre 25-250 colonias.6.9 METODOLOGÍA 9. .Poner aproximadamente 15 a 20 ml de agar plate count frío y templado a 45 grados centígrados.5. de la misma manera tomar 10 ml de esta solución y poner en 90 ml de agua peptonada esta será -3 la dilución 10 . -2 De esta solución tomar 10 ml y poner en 90 ml de agua peptonada esta será la dilución 10 .Realizar el conteo de las colonias de aerobios mesófilos. Dejar solidificar. . Cuando se hace el contaje en placas por duplicado en diluciones consecutivas.1 ºC) La cámara de seguridad Biológica flujo de aire se encuentre dentro de límites según instructivo I. APROBADO POR: M.2 INTERPRETACION Y RESULTADOS Para diferenciar las colonias de aerobios mesófilos en el agar plate count. calcule el número promedio de colonias de cada dilución antes de determinar el contaje total de aerobios mesófilos.7 VERIFICACIÓN DE EQUIPOS. .

10 FIGURAS EXPLICATIVAS A continuación podemos observar las colonias de aerobios mesófilos. APROBADO POR: M. Hualpa S. Jácome 9.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 5 de 7 ELABORADO POR: D. .

APROBADO POR: M. 9.12 ELIMINACIÓN DE RESIDUOS Los residuos se eliminan en el autoclave de desechos 15 minutos a 15 PSI. .RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 6 de 7 ELABORADO POR: D. Pesar la muestra realizando un cuarteo imaginario tomando 2. Homogenizar completamente con el agua de dilución PESAJE DE LA MUESTRA PREPARACIÓN MUESTRA DE LA PREPARACIÓN DE DILUCIONES Agitar en ángulo de 90º . poniendo la cinta de esterilización para comprobar la temperatura y presión. INCUBACIÓN La incubación debe realizarse en incubadora calibrada con patrón.11 DIAGRAMA DE PUNTOS CRÍTICOS Verificar el estado de calibración de la balanza Encerar con la cabina cerrada Verificar el nivel de la balanza La muestra debe ser completamente homogénea. 30 veces en 30 segundos Si son muestras sólidas dejar reposar por un minuto y tomar la alícuota de la superficie. Triturar en una funda estéril si es sólida. Jácome 9.5 g de cada parte. Una vez destruidos se los puede desechar en la basura común. Hualpa S.

14. INCERTIDUMBRE. BIBLIOGRAFIA AOAC 990. APROBADO POR: M. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN Y RECHAZO   Los criterios de aceptación y rechazo para los duplicados es de ± 5%. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS Los resultados se expresan en ufc/g o ml de alimento y en forma exponencial. aguas de dilución deben ser igual a cero.12 . 13. Jácome 10. de lo contrario repetir el ensayo. 14%) y (>50. El valor de la incertidumbre calcula del método es: (<50. Los blancos de medios de cultivo.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 7 de 7 ELABORADO POR: D. 11. Hualpa S. FÓRMULA DE CÁLCULO Para realizar el recuento de Aerobios mesófilos se utiliza la siguiente fórmula: Recuento de aerobios mesófilos = número de colonias contadas por el inverso de la dilución. 5%) 15.

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