RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS

Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL

CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 1 de 7 ELABORADO POR: D. Hualpa S. APROBADO POR: M. Jácome

UNIVERSIDAD TÉCNICA PARTICULAR DE LOJA ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS

PRACTICA: Determinación de aerobios mesófilos por agar. OBJETIVO: Cuantificar y reconocer las colonias de microorganismos aerobios mesófilos en agar plate count.

1.

ALCANCE

Se aplica a la enumeración de Aerobios mesófilos en alimentos. El método es apropiado para la determinación de Aerobios mesófilos en alimentos. 2.- DESCRIPCIÓN DEL TIPO DE ITEM La muestra es alimentos en general, excepto productos fermentados. 3. PRINCIPIO

Las bacterias aerobias mesófilas son todas las bacterias capaces de desarrollarse en un medio nutritivo incubado en condiciones de aerobiosis. Las bacterias mesófilas tienen varios usos como indicadores:  Determinan la posible presencia de bacterias patógenas. La mayoría de bacterias patógenas son mesófilas y por tanto un recuento elevado de bacteriuas mesófilas aerobias indica que existieron condiciones que favorecieron el que ciertos microorganismos patógenos proliferaran considerablemente encontrándose en el alimento en gran número. Indican la calidad sanitaria de un alimento natural o procesado, ya que éstos productos deben satisfacer ciertas especificaciones microbiológicas (Normas de Calidad). Estiman la duración de la vida de anaquel de un producto, ya que generalmente existe una relación directa entre el grado de descomposición y el contenido microbiano (excepto en productos fermentados o madurados.

 

CONDICIONES AMBIENTALES REQUERIDAS Y PERÍODO DE ESTABILIZACIÓN QUE SEA NECESARIO. para evitar contaminarse. - APARATOS Y EQUIPOS: 1 Erlenmeyer de 500 ml 3 Erlenmeyer de 250 o 125 ml 3 pipetas de 10 ml 3 pipetas de 1 ml Un mechero Un trípode Una malla de amianto 7 cajas Petri . APROBADO POR: M. No hablar mientras se realiza la siembra. azas de platino 5 veces después de haber terminado el trabajo de siembra. Lavarse las manos periódicamente con jabón antibacterial y secarse con toallas desechables. Ubicar correctamente las secciones donde se encuentra el material contaminado del material estéril.. Las condiciones ambientales en las que normalmente se trabaja son: Temperatura: 18 – 24 ºC Humedad Relativa: 45 – 65 % 6. para la recuperación de los microorganismos tener cuidado en trabajar en la cámara de seguridad biológica. Las pipetas que han sido utilizadas después de la siembra se las debe sumergir en agua con cloro. No ingresar con alimentos. mascarilla Incinerar. PARÁMETRO Y RANGO >1 ufc/g 5. Hualpa S. Jácome 4. Trabajar con guantes. gorro. Al usar la Cepa de Referencia ATCC 6538. agujas.MEDIDAS DE SEGURIDAD En el laboratorio de microbiología se debe considerar lo siguiente: Ingresar al laboratorio con mandil limpio y desinfectarse los zapatos con una solución de alcohol al 70%.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 2 de 7 ELABORADO POR: D. 7.

REACTIVOS. DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO 9. PATRONES DE REFERENCIA Y MATERIALES DE REFERENCIA REACTIVO CODIGO DE LABORATORIO ESPECIFICACIONES Agar Plate count Peptona de caseína Cepa de referencia de S.1 MARCAS DE IDENTIFICACIÓN Las muestras para la determinación de Aerobios Mesófilos deben identificarse con mismo código asignado. un 9.  Revisar que los medios de cultivo no estén expirados.2 TRANSPORTE DE LOS ITEMS DE ENSAYO Las muestras deben transportarse en una bandeja adecuada para el efecto para evitar derrames o daños en las mismas. .6 VERIFICACIONES PREVIAS Se debe verificar lo siguiente:  Revisar los termómetros en la etiqueta que se encuentren dentro de la fecha de calibración. aureus LSRC-6538 Certificado de lote de fabricación Cepa pura bacteriana con certificado 9. Hualpa S.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 3 de 7 ELABORADO POR: D. Cámara de seguridad Biológica 2B2 8. APROBADO POR: M. Jácome - Fósforos Contador de colonias Incubadora a 35 ºC. 9.

RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 4 de 7 ELABORADO POR: D.Realizar el conteo entre 25-250 colonias. .Realizar el conteo de las colonias de aerobios mesófilos. Se realiza una verificación de todos los registros:    La temperatura de la incubadora (35 +/.1 SIEMBRA Pesar asépticamente 10 gramos de muestra en 90 ml de agua peptonada para obtener la -1 dilución 10 luego seguir preparando las siguientes diluciones de acuerdo al tipo de alimento. calcule el número promedio de colonias de cada dilución antes de determinar el contaje total de aerobios mesófilos. -2 De esta solución tomar 10 ml y poner en 90 ml de agua peptonada esta será la dilución 10 . Al realizar dichos contajes determinar el contaje promedio / 1 cm 2 y multiplicar por 30 (área de crecimiento circular de 30 cm2). Cuando se hace el contaje en placas por duplicado en diluciones consecutivas.Con una pipeta perpendicular a la caja Petri poner 1 ml de cada una de las diluciones. . . Si se va a trabajar con mechero se debe revisar las conexiones de gas 9.Poner las placas en la incubadora a 35 grados centígrados por 48 horas. Dejar solidificar. 9. Para calcular el contaje de aerobios mesófilos. Se puede hacer contajes estimados en placas con más de 250 colonias y puede ser reportado como contaje estimado. .31.9. APROBADO POR: M.6.2 INTERPRETACION Y RESULTADOS Para diferenciar las colonias de aerobios mesófilos en el agar plate count.7 VERIFICACIÓN DE EQUIPOS. de la misma manera tomar 10 ml de esta solución y poner en 90 ml de agua peptonada esta será -3 la dilución 10 .9 METODOLOGÍA 9. agitar suavemente 3 veces a la izquierda.9. multiplicar el número total de colonias de aerobios mesófilos por placa por el respectivo factor de dilución. . Jácome 9. busque algunas de las siguientes características típicas del cultivo: colonias de color crema.2. Hualpa S.5. 3 a la derecha una arriba y otra abajo sin levantar la caja de la mesa. FUNCIONAMIENTO Y CALIBRACIÓN. .1 ºC) La cámara de seguridad Biológica flujo de aire se encuentre dentro de límites según instructivo I.Poner aproximadamente 15 a 20 ml de agar plate count frío y templado a 45 grados centígrados.

. APROBADO POR: M.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 5 de 7 ELABORADO POR: D.10 FIGURAS EXPLICATIVAS A continuación podemos observar las colonias de aerobios mesófilos. Hualpa S. Jácome 9.

5 g de cada parte.12 ELIMINACIÓN DE RESIDUOS Los residuos se eliminan en el autoclave de desechos 15 minutos a 15 PSI.11 DIAGRAMA DE PUNTOS CRÍTICOS Verificar el estado de calibración de la balanza Encerar con la cabina cerrada Verificar el nivel de la balanza La muestra debe ser completamente homogénea. Triturar en una funda estéril si es sólida. Jácome 9. poniendo la cinta de esterilización para comprobar la temperatura y presión. INCUBACIÓN La incubación debe realizarse en incubadora calibrada con patrón. APROBADO POR: M. 30 veces en 30 segundos Si son muestras sólidas dejar reposar por un minuto y tomar la alícuota de la superficie. . Pesar la muestra realizando un cuarteo imaginario tomando 2. Una vez destruidos se los puede desechar en la basura común.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 6 de 7 ELABORADO POR: D. Homogenizar completamente con el agua de dilución PESAJE DE LA MUESTRA PREPARACIÓN MUESTRA DE LA PREPARACIÓN DE DILUCIONES Agitar en ángulo de 90º . Hualpa S. 9.

13. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN Y RECHAZO   Los criterios de aceptación y rechazo para los duplicados es de ± 5%. de lo contrario repetir el ensayo. FÓRMULA DE CÁLCULO Para realizar el recuento de Aerobios mesófilos se utiliza la siguiente fórmula: Recuento de aerobios mesófilos = número de colonias contadas por el inverso de la dilución. Jácome 10. Los blancos de medios de cultivo. INCERTIDUMBRE.12 . aguas de dilución deben ser igual a cero. BIBLIOGRAFIA AOAC 990. APROBADO POR: M. Hualpa S. 11.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 7 de 7 ELABORADO POR: D. El valor de la incertidumbre calcula del método es: (<50. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS Los resultados se expresan en ufc/g o ml de alimento y en forma exponencial. 5%) 15. 14. 14%) y (>50.

3810703.443. #&% #  $ $  $     03974/0%7.8.  #% # %% &%!       &#$!%'$    ../0%0.O354/02484-807.074-48208O148              #'$      ! /0  # ! #  :.$  !#  ! #  E..7. 03.089.420               .4393:.8/0..O3743/:897.344J.5..

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