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Practica Aerobios Mesofilos en Agar

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RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS

Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL

CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 1 de 7 ELABORADO POR: D. Hualpa S. APROBADO POR: M. Jácome

UNIVERSIDAD TÉCNICA PARTICULAR DE LOJA ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS

PRACTICA: Determinación de aerobios mesófilos por agar. OBJETIVO: Cuantificar y reconocer las colonias de microorganismos aerobios mesófilos en agar plate count.

1.

ALCANCE

Se aplica a la enumeración de Aerobios mesófilos en alimentos. El método es apropiado para la determinación de Aerobios mesófilos en alimentos. 2.- DESCRIPCIÓN DEL TIPO DE ITEM La muestra es alimentos en general, excepto productos fermentados. 3. PRINCIPIO

Las bacterias aerobias mesófilas son todas las bacterias capaces de desarrollarse en un medio nutritivo incubado en condiciones de aerobiosis. Las bacterias mesófilas tienen varios usos como indicadores:  Determinan la posible presencia de bacterias patógenas. La mayoría de bacterias patógenas son mesófilas y por tanto un recuento elevado de bacteriuas mesófilas aerobias indica que existieron condiciones que favorecieron el que ciertos microorganismos patógenos proliferaran considerablemente encontrándose en el alimento en gran número. Indican la calidad sanitaria de un alimento natural o procesado, ya que éstos productos deben satisfacer ciertas especificaciones microbiológicas (Normas de Calidad). Estiman la duración de la vida de anaquel de un producto, ya que generalmente existe una relación directa entre el grado de descomposición y el contenido microbiano (excepto en productos fermentados o madurados.

 

gorro. Hualpa S. APROBADO POR: M. Al usar la Cepa de Referencia ATCC 6538. 7. CONDICIONES AMBIENTALES REQUERIDAS Y PERÍODO DE ESTABILIZACIÓN QUE SEA NECESARIO. Trabajar con guantes. mascarilla Incinerar. Las pipetas que han sido utilizadas después de la siembra se las debe sumergir en agua con cloro. - APARATOS Y EQUIPOS: 1 Erlenmeyer de 500 ml 3 Erlenmeyer de 250 o 125 ml 3 pipetas de 10 ml 3 pipetas de 1 ml Un mechero Un trípode Una malla de amianto 7 cajas Petri . para evitar contaminarse. PARÁMETRO Y RANGO >1 ufc/g 5. agujas. No ingresar con alimentos.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 2 de 7 ELABORADO POR: D. azas de platino 5 veces después de haber terminado el trabajo de siembra. Las condiciones ambientales en las que normalmente se trabaja son: Temperatura: 18 – 24 ºC Humedad Relativa: 45 – 65 % 6. Ubicar correctamente las secciones donde se encuentra el material contaminado del material estéril..MEDIDAS DE SEGURIDAD En el laboratorio de microbiología se debe considerar lo siguiente: Ingresar al laboratorio con mandil limpio y desinfectarse los zapatos con una solución de alcohol al 70%. Lavarse las manos periódicamente con jabón antibacterial y secarse con toallas desechables. No hablar mientras se realiza la siembra. para la recuperación de los microorganismos tener cuidado en trabajar en la cámara de seguridad biológica. Jácome 4.

Cámara de seguridad Biológica 2B2 8.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 3 de 7 ELABORADO POR: D.  Revisar que los medios de cultivo no estén expirados.2 TRANSPORTE DE LOS ITEMS DE ENSAYO Las muestras deben transportarse en una bandeja adecuada para el efecto para evitar derrames o daños en las mismas. 9.6 VERIFICACIONES PREVIAS Se debe verificar lo siguiente:  Revisar los termómetros en la etiqueta que se encuentren dentro de la fecha de calibración. PATRONES DE REFERENCIA Y MATERIALES DE REFERENCIA REACTIVO CODIGO DE LABORATORIO ESPECIFICACIONES Agar Plate count Peptona de caseína Cepa de referencia de S. un 9. Jácome - Fósforos Contador de colonias Incubadora a 35 ºC. DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO 9. . aureus LSRC-6538 Certificado de lote de fabricación Cepa pura bacteriana con certificado 9.1 MARCAS DE IDENTIFICACIÓN Las muestras para la determinación de Aerobios Mesófilos deben identificarse con mismo código asignado. APROBADO POR: M. REACTIVOS. Hualpa S.

Al realizar dichos contajes determinar el contaje promedio / 1 cm 2 y multiplicar por 30 (área de crecimiento circular de 30 cm2). . Dejar solidificar. Cuando se hace el contaje en placas por duplicado en diluciones consecutivas. Si se va a trabajar con mechero se debe revisar las conexiones de gas 9. de la misma manera tomar 10 ml de esta solución y poner en 90 ml de agua peptonada esta será -3 la dilución 10 .7 VERIFICACIÓN DE EQUIPOS. Para calcular el contaje de aerobios mesófilos.1 SIEMBRA Pesar asépticamente 10 gramos de muestra en 90 ml de agua peptonada para obtener la -1 dilución 10 luego seguir preparando las siguientes diluciones de acuerdo al tipo de alimento.Con una pipeta perpendicular a la caja Petri poner 1 ml de cada una de las diluciones.2.1 ºC) La cámara de seguridad Biológica flujo de aire se encuentre dentro de límites según instructivo I. -2 De esta solución tomar 10 ml y poner en 90 ml de agua peptonada esta será la dilución 10 . Se realiza una verificación de todos los registros:    La temperatura de la incubadora (35 +/.5. busque algunas de las siguientes características típicas del cultivo: colonias de color crema.Poner las placas en la incubadora a 35 grados centígrados por 48 horas.Realizar el conteo de las colonias de aerobios mesófilos. Se puede hacer contajes estimados en placas con más de 250 colonias y puede ser reportado como contaje estimado.Realizar el conteo entre 25-250 colonias. FUNCIONAMIENTO Y CALIBRACIÓN. multiplicar el número total de colonias de aerobios mesófilos por placa por el respectivo factor de dilución. calcule el número promedio de colonias de cada dilución antes de determinar el contaje total de aerobios mesófilos. . Hualpa S. . 3 a la derecha una arriba y otra abajo sin levantar la caja de la mesa.9.9. . . 9.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 4 de 7 ELABORADO POR: D.6.Poner aproximadamente 15 a 20 ml de agar plate count frío y templado a 45 grados centígrados. agitar suavemente 3 veces a la izquierda. . Jácome 9.9 METODOLOGÍA 9. APROBADO POR: M.2 INTERPRETACION Y RESULTADOS Para diferenciar las colonias de aerobios mesófilos en el agar plate count.31.

Jácome 9.10 FIGURAS EXPLICATIVAS A continuación podemos observar las colonias de aerobios mesófilos. Hualpa S. .RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 5 de 7 ELABORADO POR: D. APROBADO POR: M.

30 veces en 30 segundos Si son muestras sólidas dejar reposar por un minuto y tomar la alícuota de la superficie.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 6 de 7 ELABORADO POR: D.5 g de cada parte.11 DIAGRAMA DE PUNTOS CRÍTICOS Verificar el estado de calibración de la balanza Encerar con la cabina cerrada Verificar el nivel de la balanza La muestra debe ser completamente homogénea. INCUBACIÓN La incubación debe realizarse en incubadora calibrada con patrón. APROBADO POR: M. Pesar la muestra realizando un cuarteo imaginario tomando 2. Homogenizar completamente con el agua de dilución PESAJE DE LA MUESTRA PREPARACIÓN MUESTRA DE LA PREPARACIÓN DE DILUCIONES Agitar en ángulo de 90º . Jácome 9. Triturar en una funda estéril si es sólida. .12 ELIMINACIÓN DE RESIDUOS Los residuos se eliminan en el autoclave de desechos 15 minutos a 15 PSI. Hualpa S. poniendo la cinta de esterilización para comprobar la temperatura y presión. 9. Una vez destruidos se los puede desechar en la basura común.

11. BIBLIOGRAFIA AOAC 990. APROBADO POR: M. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS Los resultados se expresan en ufc/g o ml de alimento y en forma exponencial. de lo contrario repetir el ensayo. INCERTIDUMBRE. Jácome 10. 5%) 15.12 . El valor de la incertidumbre calcula del método es: (<50. Los blancos de medios de cultivo. 14%) y (>50.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 7 de 7 ELABORADO POR: D. aguas de dilución deben ser igual a cero. FÓRMULA DE CÁLCULO Para realizar el recuento de Aerobios mesófilos se utiliza la siguiente fórmula: Recuento de aerobios mesófilos = número de colonias contadas por el inverso de la dilución. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN Y RECHAZO   Los criterios de aceptación y rechazo para los duplicados es de ± 5%. Hualpa S. 13. 14.

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