RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS

Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL

CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 1 de 7 ELABORADO POR: D. Hualpa S. APROBADO POR: M. Jácome

UNIVERSIDAD TÉCNICA PARTICULAR DE LOJA ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS

PRACTICA: Determinación de aerobios mesófilos por agar. OBJETIVO: Cuantificar y reconocer las colonias de microorganismos aerobios mesófilos en agar plate count.

1.

ALCANCE

Se aplica a la enumeración de Aerobios mesófilos en alimentos. El método es apropiado para la determinación de Aerobios mesófilos en alimentos. 2.- DESCRIPCIÓN DEL TIPO DE ITEM La muestra es alimentos en general, excepto productos fermentados. 3. PRINCIPIO

Las bacterias aerobias mesófilas son todas las bacterias capaces de desarrollarse en un medio nutritivo incubado en condiciones de aerobiosis. Las bacterias mesófilas tienen varios usos como indicadores:  Determinan la posible presencia de bacterias patógenas. La mayoría de bacterias patógenas son mesófilas y por tanto un recuento elevado de bacteriuas mesófilas aerobias indica que existieron condiciones que favorecieron el que ciertos microorganismos patógenos proliferaran considerablemente encontrándose en el alimento en gran número. Indican la calidad sanitaria de un alimento natural o procesado, ya que éstos productos deben satisfacer ciertas especificaciones microbiológicas (Normas de Calidad). Estiman la duración de la vida de anaquel de un producto, ya que generalmente existe una relación directa entre el grado de descomposición y el contenido microbiano (excepto en productos fermentados o madurados.

 

mascarilla Incinerar. Hualpa S. para evitar contaminarse. Ubicar correctamente las secciones donde se encuentra el material contaminado del material estéril. Las pipetas que han sido utilizadas después de la siembra se las debe sumergir en agua con cloro. Al usar la Cepa de Referencia ATCC 6538. Las condiciones ambientales en las que normalmente se trabaja son: Temperatura: 18 – 24 ºC Humedad Relativa: 45 – 65 % 6. agujas. Trabajar con guantes. No ingresar con alimentos. CONDICIONES AMBIENTALES REQUERIDAS Y PERÍODO DE ESTABILIZACIÓN QUE SEA NECESARIO. para la recuperación de los microorganismos tener cuidado en trabajar en la cámara de seguridad biológica. No hablar mientras se realiza la siembra.MEDIDAS DE SEGURIDAD En el laboratorio de microbiología se debe considerar lo siguiente: Ingresar al laboratorio con mandil limpio y desinfectarse los zapatos con una solución de alcohol al 70%. 7. azas de platino 5 veces después de haber terminado el trabajo de siembra.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 2 de 7 ELABORADO POR: D. gorro. PARÁMETRO Y RANGO >1 ufc/g 5. - APARATOS Y EQUIPOS: 1 Erlenmeyer de 500 ml 3 Erlenmeyer de 250 o 125 ml 3 pipetas de 10 ml 3 pipetas de 1 ml Un mechero Un trípode Una malla de amianto 7 cajas Petri .. APROBADO POR: M. Jácome 4. Lavarse las manos periódicamente con jabón antibacterial y secarse con toallas desechables.

Cámara de seguridad Biológica 2B2 8. aureus LSRC-6538 Certificado de lote de fabricación Cepa pura bacteriana con certificado 9.2 TRANSPORTE DE LOS ITEMS DE ENSAYO Las muestras deben transportarse en una bandeja adecuada para el efecto para evitar derrames o daños en las mismas. Hualpa S. . PATRONES DE REFERENCIA Y MATERIALES DE REFERENCIA REACTIVO CODIGO DE LABORATORIO ESPECIFICACIONES Agar Plate count Peptona de caseína Cepa de referencia de S.1 MARCAS DE IDENTIFICACIÓN Las muestras para la determinación de Aerobios Mesófilos deben identificarse con mismo código asignado. DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO 9. REACTIVOS.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 3 de 7 ELABORADO POR: D.  Revisar que los medios de cultivo no estén expirados. Jácome - Fósforos Contador de colonias Incubadora a 35 ºC. APROBADO POR: M. 9.6 VERIFICACIONES PREVIAS Se debe verificar lo siguiente:  Revisar los termómetros en la etiqueta que se encuentren dentro de la fecha de calibración. un 9.

Si se va a trabajar con mechero se debe revisar las conexiones de gas 9. 9. de la misma manera tomar 10 ml de esta solución y poner en 90 ml de agua peptonada esta será -3 la dilución 10 .5.9. . . agitar suavemente 3 veces a la izquierda.Poner aproximadamente 15 a 20 ml de agar plate count frío y templado a 45 grados centígrados.7 VERIFICACIÓN DE EQUIPOS. multiplicar el número total de colonias de aerobios mesófilos por placa por el respectivo factor de dilución. Se realiza una verificación de todos los registros:    La temperatura de la incubadora (35 +/.Poner las placas en la incubadora a 35 grados centígrados por 48 horas.1 ºC) La cámara de seguridad Biológica flujo de aire se encuentre dentro de límites según instructivo I. Se puede hacer contajes estimados en placas con más de 250 colonias y puede ser reportado como contaje estimado.2 INTERPRETACION Y RESULTADOS Para diferenciar las colonias de aerobios mesófilos en el agar plate count.2.6. Para calcular el contaje de aerobios mesófilos. Hualpa S. Dejar solidificar. . . . APROBADO POR: M.Con una pipeta perpendicular a la caja Petri poner 1 ml de cada una de las diluciones. calcule el número promedio de colonias de cada dilución antes de determinar el contaje total de aerobios mesófilos. Cuando se hace el contaje en placas por duplicado en diluciones consecutivas.31.9.1 SIEMBRA Pesar asépticamente 10 gramos de muestra en 90 ml de agua peptonada para obtener la -1 dilución 10 luego seguir preparando las siguientes diluciones de acuerdo al tipo de alimento. . FUNCIONAMIENTO Y CALIBRACIÓN.Realizar el conteo de las colonias de aerobios mesófilos. 3 a la derecha una arriba y otra abajo sin levantar la caja de la mesa. Jácome 9.9 METODOLOGÍA 9.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 4 de 7 ELABORADO POR: D. busque algunas de las siguientes características típicas del cultivo: colonias de color crema. -2 De esta solución tomar 10 ml y poner en 90 ml de agua peptonada esta será la dilución 10 . Al realizar dichos contajes determinar el contaje promedio / 1 cm 2 y multiplicar por 30 (área de crecimiento circular de 30 cm2).Realizar el conteo entre 25-250 colonias.

APROBADO POR: M. Jácome 9. Hualpa S.10 FIGURAS EXPLICATIVAS A continuación podemos observar las colonias de aerobios mesófilos.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 5 de 7 ELABORADO POR: D. .

Homogenizar completamente con el agua de dilución PESAJE DE LA MUESTRA PREPARACIÓN MUESTRA DE LA PREPARACIÓN DE DILUCIONES Agitar en ángulo de 90º . APROBADO POR: M. .12 ELIMINACIÓN DE RESIDUOS Los residuos se eliminan en el autoclave de desechos 15 minutos a 15 PSI. poniendo la cinta de esterilización para comprobar la temperatura y presión. Triturar en una funda estéril si es sólida.11 DIAGRAMA DE PUNTOS CRÍTICOS Verificar el estado de calibración de la balanza Encerar con la cabina cerrada Verificar el nivel de la balanza La muestra debe ser completamente homogénea. Una vez destruidos se los puede desechar en la basura común. 30 veces en 30 segundos Si son muestras sólidas dejar reposar por un minuto y tomar la alícuota de la superficie.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 6 de 7 ELABORADO POR: D.5 g de cada parte. INCUBACIÓN La incubación debe realizarse en incubadora calibrada con patrón. 9. Jácome 9. Hualpa S. Pesar la muestra realizando un cuarteo imaginario tomando 2.

11. 14. 5%) 15. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS Los resultados se expresan en ufc/g o ml de alimento y en forma exponencial. INCERTIDUMBRE. Hualpa S. BIBLIOGRAFIA AOAC 990. FÓRMULA DE CÁLCULO Para realizar el recuento de Aerobios mesófilos se utiliza la siguiente fórmula: Recuento de aerobios mesófilos = número de colonias contadas por el inverso de la dilución. El valor de la incertidumbre calcula del método es: (<50. 14%) y (>50.12 . 13. de lo contrario repetir el ensayo. Jácome 10. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN Y RECHAZO   Los criterios de aceptación y rechazo para los duplicados es de ± 5%. aguas de dilución deben ser igual a cero. APROBADO POR: M.RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS Centro de Transferencia de Tecnología e Investigación Agroindustrial LABORATORIO CETTIA – UTPL CODIGO: MMAM-06 REVISION: 5 FECHA: 2009-07-08 PÁGINA: 7 de 7 ELABORADO POR: D. Los blancos de medios de cultivo.

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