UVM México Escuela de Ciencias de la Salud

ANEXO: REPORTE DE PRÁCTICA 7

Universidad del Valle de México

Práctica número 7: FRACCIONAMIENTO CELULAR.

Valeria Michelle Sotelo Damian.

Asignatura: Biología celular.

Licenciatura en Medicina.

Periodo 2023-C3

Fecha de entrega: 04 de Noviembre de 2023

Docente: Martín Daniel Domínguez Cruz.

RESUMEN
En esta práctica utilizamos y aplicamos la técnica de centrifugación para realizar el fraccionamiento
celular, al igual que identificamos los organelos fraccionados por centrifugación diferencial, utilizamos el
microscopio para aplicar una buena iluminación para una observación correcta de este experimento. Con
ayuda de el profesor logramos obtener los siguientes resultados.

INTRODUCCIÓN
El fraccionamiento celular es el proceso de
separar los diferentes componentes de una célula,
como el núcleo, el citoplasma, las membranas, los
orgánulos y las moléculas. Este proceso es útil
para estudiar las funciones y las interacciones de
cada componente celular, así como para aislar
sustancias de interés biológico o médico.
Una de las técnicas más comunes para realizar el
fraccionamiento celular es la centrifugación
diferencial, que consiste en someter la muestra
celular a diferentes velocidades y tiempos de
centrifugación, de manera que se formen distintos
sedimentos o fracciones según el tamaño, la
forma y la densidad de los componentes
celulares.
una fuerza de mayor intensidad que la gravedad,
provocando la sedimentación del sólido o de las
partículas de mayor densidad.
La Centrifugación Diferencial se basa en una
diferencia en la densidad de las moléculas. Esta
diferencia debe ser grande para poder ser
observada al centrifugar: Las partículas que
posean densidades similares sedimentaran juntas.
Este método es inespecífico, por lo que se utiliza
como centrifugación preparativa para separar
partículas de otros componentes en la mezcla (por
ejemplo, para separar mitocondrias de núcleos y
membrana) pero no es útil para separar
moléculas.

La centrifugación es un método por el cual se

pueden separar sólidos de líquidos de diferente
densidad mediante una centrifugadora, la cual
imprime a la mezcla un movimiento rotatorio con
Fig. 1 Ejemplo de proceso de fraccionamiento celular.
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PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.
Se deben de conocer las técnicas de
fraccionamiento celular e identificar a su los
organelos fraccionados por centrifugación
diferencial, al igual que observarlas con
claridad con el uso del microscopio.
JUSTIFICACIÓN.
Al realizar este experimento se dan a conocer
las técnicas para el fraccionamiento celular y
comprender su proceso de separación,
también observar sus relativos resultados.
OBJETIVOS.
Elaborar de manera correcta las técnicas
mostradas para lograr los resultados que se
esperan obtener e identificar estructuras
observadas.
HIPOTESIS.
Si se realiza bien el proceso de elaboración y
las técnicas de centrifugado se podrá observar
bajo el microscopio estructuras de una célula.
METODOS.
1. Trabajar en frío, pesar 20 g de hojas de
espinaca, lavadas, secas y sin nervadura,
macerar en el mortero durante 5 a 10
minutos con 40 ml de la solución de NaCl
0.35 M.
2. Pasar el molido por 8 capas de gasas, tomar
una muestra de 1 ml del colado y colocarla
en un tubo de ensayo marcado como colado,
mantenerlo en frío.
3. Repartir el colado en 2 o 4 tubos de plástico
de 15 ml.
4. Centrifugar a 1000 rpm durante 2 min.
Decantar en un vaso de precipitado el
sobrenadante, mantenerlo en frío. Tomar una
muestra de 1 ml y colocarla en un tubo
marcado como primer sobrenadante.
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5. Resuspender con 1 ml de medio con la
pipeta pasteur todos los precipitados (al final
el volumen será de 3 ml aprox). Verter a un
tubo de ensaye y marcar como primer
precipitado, mantener en frío.
6. Repartir el sobrenadante en 2 o 4 tubos de
plástico, ajustar el volumen de
centrifugación con medio de aislamiento.
Centrifugar a 2500 rpm por 10 min.
7. Decantar el sobrenadante en un vaso de
precipitado, mantener en frío, tomar 1 ml del
sobrenadante y marcarlo como segundo
sobrenadante, continuar en frío.
8. Re suspender los precipitados como se hizo
en el evento anterior, y los 3 ml marcarlos
como segundo precipitado, mantener en frío.
9. Centrifugar el resto del sobrenadante en 2 o
4 tubos de plástico a 5000 rpm por 15 min.
10. Decantar el sobrenadante igual que en los
pasos anteriores, marcar como tercer
precipitado, conservar en frío.
11. Observar al microscopio, cada una de las
muestras obtenidas, establecer de manera
arbitraria el tamaño de las estructuras.
RESULTADOS.
Se realizó bien el proceso de elaboración y
centrifugación, pudimos observar algunas
estructuras de una célula vegetal, tales como los
cloroplastos.
CONCLUSIÓN.
Esta práctica me resultó interesante ya que es
proceso bastante detallado y largo para poder
observar como se separan los organelos de una
célula como en nuestro caso que fue una célula
vegetal.
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FOTOGRAFÍAS DE LA PRÁCTICA.

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b) ¿Qué objetivos utilizar para los

ANTES DE LA PRÁCTICA.
a) Investigar y definir fraccionamiento
celular:
El fraccionamiento celular o fraccionamiento
subcelular es una técnica de laboratorio, tras
la disgregación, en la que se intenta reagrupar
las partículas, generalmente células u
orgánulos celulares, en función de sus
propiedades biofísicas.
b) Investigar cómo se pueden separar los
componentes de una célula:
Se realiza por centrifugación en gradiente de
densidad o por centrifugación diferencial,
aumentando secuencialmente la velocidad de
giro y la fuerza gravitacional, dando como
resultado una separación secuencial de los
orgánulos de acuerdo con su densidad.
diferentes componentes subcelulares?
Los objetivos que se pudieron utilizar en éste
caso fueron x40, x60 y x100, haciendo los
debidos ajustes según se necesitara.
c) ¿Qué observaste de diferencia con los
diversos objetivos del microscopio?
Se pudieron observar distintos tipos de
estructuras que estaban separadas, pero era
un poco difícil de observar con un objetivo
pequeño, se necesitaba usar el de 60x o 100x
con aceite de inmersión para poderse
apreciar con claridad.

c) Investigar la centrifugación
diferencial.
La centrifugación diferencial es un proceso
de separación que puede separar los
componentes celulares por centrifugación
repetida, a velocidades cada vez mayores. En
estas condiciones, los componentes de la
célula se separan en función de su tamaño y
densidad: los componentes de gran tamaño y
más densos migran más rápidamente hasta el
fondo a velocidades relativamente bajas y
forman un sedimento.
REFERENCIAS.
DESPUES DE LA PRÁCTICA.
• Wikimedia Foundation. (2023, Febrero
a) ¿Por qué se pueden separar los 3). Fraccionamiento Celular.
componentes subcelulares? Wikipedia.
Las células o partículas se separan debido a https://es.wikipedia.org/wiki/Fraccionam
las diversas funciones biofísicas como iento_celular.
densidades, tamaños y forma de cada • Centrifugación. quimica.es. (s.f.).
componente. Al ser expuestos a diversos https://www.quimica.es/enciclopedia/Ce
procesos de separación, estos pueden ntrifugaci%C3%B3n.html
dividirse y agruparse según su tipo.