Guía Biología Molecular

Clase 2

 Cromosoma es una molécula muy grande de ADN.

 22 pares son autosomas y el 23 es sexual.
 10 % es la cifra que se expresa de nuestros genes.
 Tiene un tamaño de 3.2 billones de pares de bases de DNA, organizado. en 23 pares
de cromosomas que codifica ≈20.000/25.000 genes (30%).

Genoma: Todo el contenido de ADN de un organismo.

(Mitad de madre y mitad de padre; Proporciona la individualidad de cada ser).

Gen: Unidad genética formada por una secuencia de nucleótidos que contiene la
información necesaria para la síntesis de una proteína o un RNA funcional.

ADN (desoxirribonucleótido)
Molécula que contiene las instrucciones genéticas usadas en el desarrollo y funcionamiento
de los organismos vivos y es el responsable de la transmisión hereditaria.

Tipos de material genético de ADN

Estructura:
• Circular (extremos unidos covalentemente entre sí)(plasmido y nucleoide)(procariotas)
• Linear (extremos libres)(eucariootas)

Localización:
• Genómico
• Cromosómico(Eucariotas)
• Nucleoide(Procariotas)
• Extra-cromosomal
• Plasmídico (bacterias)
• Organelos (mitocondria/cloroplasto)

Helices

 Doble cadena antiparalela enlazadas por puentes de hidrógeno.

 Los grupos fosfatos proyectados al exterior.
 Bases nitrogenadas al interior.
 Surco mayor y menor.
 Periodicidad: 10 nucleótidos (36 A).
Levogiro Gira en sentido contrario de las agujas del reloj
Dextrogiro Gira en el mismo sentido de las agujas del reloj

. Forma A Forma B Forma Z

Sentido de la Dextrogira Dextrogira Levogira
helice
Es la que tenemos en Obtenida en laboratorio
nuestro ADN

Ejemplos:

 Friedrich Miescher (1868) - DNA aislado por primera vez (nucleolina)

 Avery y col (1944) - Demostraron que es el DNA es el que contiene el material
genético.
 Watson y Crick (1953) - Modelo de doble hélice del DNA
 Rosalind Franklin -

Propiedades del material genético

• Auto-replicativo
• Puede codificar información (Secuencia de nucleótidos)
• Variabilidad (mutaciones)
• Sistema estable (información con respaldo)

ARN (ribonucleotido)
Molécula similar al ADN, formada por ribonucleótidos de cadena sencilla

Tipos de material genético:

• mRNA (RNA mensajero)
• tRNA(RNAdetransferencia)
• rRNA(RNAribosomal)
• Reguladores
• miRNAs*
• siRNAs*
• lncRNA(longnoncodingRNA)*
• snRNA(smallnuclear)
• snoRNA(smallnucleolar)
• scyRNA(smallcytoplasmaticRNA)

Monocistrónico Los mRNAs monocistrónicos, presentes en procariotas y típicos de

eucariotas,codifican un solo polipéptido .
 Ello implica que la traducción se inicia en un solo sitio del mRNA, el
codón de inicio, para finalizar en otro sitio, un codón de
terminación.
Policistrónico Los mRNAs policistrónicos, presentes en procariotas(bacterias)
codifican varios polipéptido .

Paso de ARN a ADN es la transcripción inversa.

 La transcriptasa inversa es una enzima de tipo ADN polimerasa que tiene como
función sintetizar ADN de doble cadena utilizando como molde ARN
monocatenario, es decir, catalizar la retrotranscripción o transcripción inversa. Se
encuentra presente en los retrovirus.

Ácidos Nucleicos.
 Polímeros de nucleótidos
 Guardan y transfieren la información
 ARNs pueden tener otras funciones:
o Fx enzimáticas: R
o Receptores: Ribozwitches
o Fx estructural de componentes celulares: ribosomas

Los ácidos nucleicos está formados de tres partes:

1. Base nitrogenada (1er carbono)
2. Azúcar
3. Grupo fosfato (5to carbono) -> enlace fosfodiéster (5´-3´)
a. Extremo OH está libre (3`)
Polinucleotido Más de 50
Oligonucleotido Menos de 50

Bases nitrogenadas:

Características

1. Absorben la luz UV(los enlaces dobles ayudan a esto; calidad del ADN)
2. Parcialmente hidrofóbicas(cuando están solas y con mayor numero de enlaces, pero
si se unen los grupos fosfato, se vuelven polares)

o AMPc (segundo mensajero)

 o Entre el enlace fosfodiester y el puente de hidrogeno (el enlace es fosfodiester es
más fuerte)
o El fosfato da el estremo hidrofilico

Purinas (semiplanares) Pirimidinas (planares)

o Adenina o Timina
o Guanina o Uracilo
o Citosina

o Nucleosido: Azucar + Base Nitrogenada

 Adenosina
 Guanosina
 Citidina
 Uridina
 Timidina

o Nucleotido: Azúcar + Base Nitrogenada + Pi

 Adenilato
 Guanilato
 Citidilato
 Uridilato
 Timidilato

Azúcar: Vía de las pentosas

o En el carbono anomérico se sustituye la base.

o El carbono 5 queda sustituido con un grupo fosfato.
o La Ribosa tiene un grupo OH en el carbono 2 y la desoxirribosa solo un grupo
hidroxilo
o La base nitrogenada en 1er carbono

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Las bacterias tienen un solo cromosoma
Clase 2

Exones: Región codificante (tienen el material necesario para producir una

proteína).
Intrones: Regiones no codificantes (no codifican a proteínas).
Exomas: Conjunto de exones.
Región UTR: En genética se denomina región no traducida o UTR al sector extremo
de los genes.

Se habla generalmente de una región no traducida cinco prima y de una

región no traducida tres prima que son las dos partes no traducidas de
cada gen.

Postulados

1. Todos los seres vivos estan constituidos por células.

2. Las. Células son las unidades básicas de la estructura y función de los seres vivos.
3. Toda célula procede de otra célula.

Genoma Bacteriano

 Los virus no tienen manera de replicarse por eso no son organismos vivos.
 Circulares.

Tamaño: 500kb-10Mb
Alta densidad # genes /Kb
Génica:
Genes Regiones reguladoras; regulan la expresión de los genes
organizados en
operones
Origen de Único
Replicación:
Nucleoide Asociación con proteínas no histónicas y organizado en
subsecciones (Dominios topológicos)

En las células procarióticas se denomina nucleoide a la región

citoplasmática en la que se encuentra el ADN dispuesto en una
sola molécula circular.
Plásmido: Resistencia a antibióticos: información genética que sirve para
transformar una célula. Presentes en bacterias son moléculas de
ADN extra-cromosómico (independientes al cromosoma).
 Ciclo Lítico El fago infecta a una bacteria, la secuestra para hacer un montón
de fagos y luego mata a la célula al hacerla explotar.

1. El fago se une a una bacteria

2. El fago ingresa a la célula huésped
3. El ADN es digerido
4. El ADN del fago se replica
5. La célula huésped transcribe y traduce el ADN del fago y
produce proteínas del Fago.
6. Se completa el ensamblaje de los nuevos fagos. Una enzima
codificada por el fago provoca la lisis de la célula.
7. Los nuevos fagos se liberan para que el ciclo comience.
Ciclo Los virus atenuados o profagos, no destruyen las células que
Lisogénico infectan y su genoma pasa a incorporarse al ADN de la célula
hospedadora o célula lisogénica .

1. El fago se une a una bacteria.

2. El fago ingresa a la célula huésped.
3. El ADN del fago se integra al cromosoma bacteriano y se
convierte en un profago.
4. El profago se replica. Esta replicación puede continuar
durante muchas divisiones celulares.
5. El profago puede separarse y la célula entrará en el ciclo
lítico.

*Los fagos son virus que infectan bacterias de forma específica*

Recombinación bacteriana

Célula competente Tiene un membrana con huecos, por el cual puede ingresar el
plásmido.
Célula Ya contiene el plásmido; varias colonias de bacterias con estos
Transformada genes se empiezan a transcribir y se lisan las bacterias(matriz de
cefarosa).
Se denomina episoma a un plásmido incorporado al cromosoma bacteriano.

Pasos:

1. El ADN extracelular se una a la célula competente en el lugar del receptor.

2. El ADN penetra en la célula y las cadenas se separan.
3. Una cadena de ADN transformante se degrada, la otra cadena se empareja de
manera homóloga con el ADN de la célula huésped.
4. El ADN transformado se recombina con el cromosoma huésped reemplazando a su
región homóloga, formando un heterodúplex.
 5. Después de una ronda de división celular se ha producido una célula transformada y
otra no transformada.

T4-> Infecta un bacterias

Virus

o Es una partícula de código genético, ADN o ARN, encapsulada en una vesícula de

proteínas (cápside).
o Los virus no se pueden replicar por sí solos.
o Daña o mata a la célula huésped en el proceso de multiplicación.
o Importancia médica.
o Los virus son estructuras acelulares inactivos fuera de la células.
o Cuando las moléculas del virus están en el exterior se les conoce como "Viriones"
o Retro transcripción / Transcripción Inversa

Tipos de virus

Genoma Eucariote

• Lineales
• Gran tamaño
• Baja densidad génica
• Asociados con histonas

Genoma Humano
Cromatina: material genético dentro del núcleo.

El DNA cromosómico – Cromatina

Histonas

Nucleosoma: unidad fundamental de la estructura de la cromatina

Eucromatina contiene la mayoría de los genes, los que son

transcritos activamente y los inducibles. Acetilada.
Heterocromatina DNA que se encuentra transcripcionalmente
inactivo/reprimido (se tiñe más oscuro). Metilida.

Estructura del cromosoma

Partes:

 Telomero
-Secuencias con función estabilizadora situadas en los extremos, también en tándem.
Telomerasa ( Se trata de la enzima responsable del mantenimiento de la longitud
de los telómeros mediante la adición de secuencias repetitivas ricas en guanina,
es decir, agrega la secuencia de telómeros TTAGGG a los extremos de los
cromosomas).

 Centromero
-Punto de unión del cromosoma a los microtúbulos del huso mitótico durante la
división celular.
- Segregación correcta y ordenada de los cromosomas entre las células hijas.

130 pb, ricas en A-T

Super enrrollamiento: (topoisomerasa)

 El DNA debe estar altamente compactado.

  Alto grado de organización estructural.
 El plegamiento debe a su vez permitir el acceso a la información contenida en DNA
para replicación y transcripción (separación transitoria).

 Supercoli
 Coli

El nucleosoma, la unidad fundamental de la cromatina, está formado por un

octámero de las histonas H2A, H2B, H3 y H4, el DNA y la histona H1 . La H1
participa en la regulación de la compactación de la cromatina y de la expresión
génica.

 Solenoide
Otro grado de enrollamiento; formado por nucleosomas.

Clase 3
Replicación (Fase S)
Obtenemos 2 ADN identicos; a partir de 1
Doble helice
 Cadena Molde 5´a 3´
 Hebra complementaria 3´a 5´

ADN
Molécula que contiene las instrucciones genéticas usadas en el desarrollo y
funcionamiento de los organismos vivos y es el responsable de la transmisión
hereditaria.

• Semiconservativa. porque siempre se va a conservar la mitad de la información.

• Tiene un origen y es bidireccional (las eucariotas son bidireccional y la procariotas
unidireccinal)
• Va de 5 ́-3 ́
• Semidiscontinua .
• Siempre habrá un punto de donde sale, el adn
• Sistema estable (que está protegido; ya que es nuestro respaldo )

Origen de replicación.
Las procariotas tiene un punto de inicio solamente (horquilla; oriC).
Las eucariotas tiene varios puntos que se llaman (ORC)

Enlace Fosfodiester : Etremo 3´ + Gupo fosfato del extremo 5`

Los nucleotidos tienen 3 fosfatos pero solo se usa uno, los otros dos se liberan.
El oxigeno tiene electrones libres (6; con carga negativa)
El magnesio bloquea la carga negativa de los oxígenos y permite que se hagan los
enlaces fosfodiester .

Necesitamos:
 Cadena molde
 dNTPs (precursores) (Nucleotidos, para generar nuevos cadenas de ADN)
a. ddNTP - Carecen de OH
 Requiere de un extremo 3 ́- OH libre (iniciador, cebador o primer)
 En el extremo 5`está el grupo Fosfato
 Mg2+ como iniciador (bloquea las cargas del OH)
 Tener ADN Polimerasa

Experimento (repasar)
 Usaron ADN pesado
 Tambien usaron ADN ligero
Tenemos tres tipos de ADN polimerasa (enzima que sintetisa el ADN)
ADN polimerasa. Pega Desoxirribunocleotido

 Pol I (dos funciones: pega nucleotidos y quita por exonucleasa;degrada

cadenas de ADN en ambos sentidos)
 Pol II (Repara daños que pueda tener)
 Pol III (Repara daños y elongación, es decir pega nulceotidos de corrido)

El inicio de la replicación en oriC comienza con la formación de un complejo que

finalmente requiere seis proteínas:
DnaA, DnaB, DnaC, HU, gyrase y SSB.

De las seis proteínas, DnaA llama nuestra atención como la única involucrada en
el proceso de iniciación. DnaB, un ATP hidrólisis dependiente de 5 a 3 helicasa,
proporciona el "motor" de la iniciación después de que el origen se ha abierto (y el
ADN es de una sola hebra) por su capacidad para desenrollar aún más el ADN.
Estos eventos solo ocurrirán si el ADN en el origen está completamente metilado
en ambas hebras.

Tenemos tres tipos de Helicasas

  Dna d (Se unen para irse al origen de la replicación)
 Dna c (Se unen para irse al origen de la replicación)
 Dna a Reconoce secuencia Orice (sitios especifícos; separa el duplex)

*En la Fse G1-S se empieza este proceso *

Pasos:
 Dam Metilasa (se encarga de la metilación de la secuencia 5´-GATC-3´ en
las dos cadenas).
 Usamos la proteína Dna A para la Identificación del sitio de inicio (oriC)
 Se une la HU (estimula la iniciación).
 La Enzima Topoisomerasa desdobla la cadena
a. Enzima Girasa evita que durante el proceso se vuelva a enrollar
 Separamos las 2 helices
a. Ruptura de puentes de Hidrogeno (Dna B)
b. Enzima Helicasa (abre las cadenas)
c. Proteínas SSB se unen a la cadenas molde, para que no se vuelvan a
juntar las dos cadenas.
 Enzima ARN primasa (Dna G) inicia el proceso
a. Crea una pequeña cadena de ARN ->Primer -> Punto de inico de la
Cadena Complementaria
 Enzima ADN Polimerasa III se une al primer
a. Elongación
b. Se agregan desoxirribonucleotidos
Cadena continua:
 Sentido 5´a 3´
Cadena discontinua/rezagada:
 Se replica en dirección contraria
 La Enzima ARN primasa sintetiza varios primers
 Luego la Enzima ADN Polimerasa III luego sintetiza fragmentos de ADN
entre un primer y otro (fragmentos de okazaki)
 Sentido 5´a 3´
 La Enzima Exonucleasa (ADN polimerasa I) elimina todos los primers de
ARN
 La Enzima ADN polimerasa I rellena todos los espacio que quedaron vacios.
 La Enzima ADN ligasa une todos los fragmentos a las cadenas (es como un
pegamento)
 La Enzima Topoisomerasa vuelve. A enrollar la cadena.

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--------------
 Ligasa en conjuto con la ADN pol I, agrega nucleotido nuevos y ligasa pega
y crea el enlace fosfodiester

 Exonucleasa puede quitar primers de 5´a 3´y 3´a 5

  ¿En el caso de las bacterias quien regula la replicación?
a. En el Oric, hay puntos de para Dna: Cajas de dnaA (Sitio de unión
para la proteína DnaA)

 Entre estas hay 11 sitios de metilación (para que se pueda reconocer;

Secuencias consenso para sitio de unión )

 En las células eucariotas si tenemos una polimerasa para cada cadena

(rezagada y molde)

Sistema de reparación

Si son fragmentos cortos los que se deben reparar, la misma Pol I pone nucleótido.
Si son fragmentos grandes llega Pol III, esta es la que pone los nucleótidos.

También sucede algo así en los telomerosa; hay pequeños fragmentos de ARN
por lo que se ocupa el ADN Pol (Telomerasa).
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--------------

Replicación en Eucariotas

 Punto de origen de replicación ORC(hay muchos orígenes de replicación).

 En Fase G1 el aumento de E2F permite que pasen por un punto de
restricción. También el complejo CDK4/6 es el que permite el transito de G1
a S.
 Síntesis de Histonas

Pasos:
 Reconocimiento ORC: (ORC1-6)
Cdc6 se une a ORC + Cdt1que se une a Mcm2 -7(que son las helicasas, pero
estan inactivas).
Se unen también Cdc7 -Dbf4 para. Actuvar.
Esto se llama complejo de pre-repliación.
 Fosforilación de la Cdk
(Sld2) y Sld3 recluta Dbp11 para iniciar el complejo CMG (helicasa)
(aquí se inactivan Cdc6 y Cdt1; se destruiran en el proteosoma)
 Se crea el complejo CMG (helicasa)
está formada por las helicasas Mcm2 -7 y las proteínas Cdc45 y GIN.
(este complejo separa las cadenas)

 RPA se une a la hebra individual de DNA (SSB en bacterias)

 Sintesis de ARN primer

a. DNA pol α – primasa

 DNA pol δ – cadena rezagada

  DNA pol ε – cadena líder

 Sintesis de i-DNA: initiador DNA

 Replication Factor C (RFC )
 El antígeno nuclear de células en proliferación (PCNA), es una proteína
nuclear sintetizada en la fase G1y S. Esta localizad a en el núcleo y favorece
la síntesis de DNA (cofactor DNA pol δ)
 Rnasa
 PCNA, abrazadera.
 DNA pol β – reparación por escisión de bases.

*RPA Es el SSB de las eucariotas

*PCNA Estabiliza el proceso de replicación
Cargador de PCNA (para que no se desestabilice el
proceso)
Para que sea hagan más largas las cadenas
*CMG helicasa Es a Dna B
*Fen1 5`-3`exonucleasa Se usan para quitar el primer
*Dna 2 helicasa
*Nucleasa/ Rnasa H
*DNA ligasa Liga los fragmentos discontinuos
*DNA Topoisomerasa I (cadenas super enrolladas)
*DNA Topoisomerasa II (Cadenas hijas; nuevas)

Subuinidades de la ADN Polimerasa III de eucariotas

Alfa -> Primasa (Comienza elongación)
Beta ->
Gamma -> Solo en ADN mitocondrial
Delta -> Replicar Rezagada (Continua sintesis)
Epsylon -> Replicar la líder (Ayuda en replicación y repar)

Metafase
Clase 4

Transcripción (Fase..)

Proceso mediante el cual obtenemos una Molécula de ARN a partir de ADN

 No requiere de cebador
 Iniciación, Elongación y Terminación.
 La cadena Molde y Codificante pueden tener la función contraria.
 Va en sentido 5´a 3´ la cadena molde, y la cadena codificante 3´a 5´ (solo en
síntesis; pero pueden cambiar de sentido).
 Todas la polimerasas ponen de. 5´a 3´.
 Cuando el ARN está mal escrita, se degradan (aquí no hay mecanismo.
 En procariotas, mientras se replican se transcriben y en otros casos de
traduce (todo en el citoplasma)
 En eucariotas, Replicación y transcripción se hacen al mismo tiempo en el
nucleo junto con la maduración (arn m) y en el citoplasma se hace la
tradución.

La secuencia del RNA es complementaria al molde e idéntica a la cadena

codificante.

Unidad transcripcional: secuencia de DNA que será transcrita a RNA y que va de

un promotor(iniciador; "sitio de inicio de la transcripción"; UTR) a un terminador
(punto donde se termina de transcribir el gen).

En la región de inicio hay un +1 :

Río arriba(hacia la izquierda)Secuencias reguladras(Caja TATAA) Son los
promotores. Negativo.
Río abajo (hacia la derecha). Son todas las secuencias que se transcriben y el
terminador. Positivo.

Dos tipos de promotores:

Secunecia de ADN donde se va unir la polimeras e inicia la transcripción.

 Promotor Fuerte: Dirigen la expresión de genes que se requieren en

abundancia. Ejemplo metabolismo.

 Promotor Débil: Regulan la expresión de proteínas raras o ARN´s.Ejemplo:

telomerasa en Adultos es Débil, pero en replicación es fuerte.

Caja TATAAT. Genes de proteína (ubicación 31 pares de bases rio arriba).

Considerada como la principal secuencia del promotor, es el sitio de unión tanto de
los factores de transcripción como de las histonas (la unión de factores de
transcripción bloquea la unión de las histonas y viceversa) y está implicada en el
proceso de transcripción por la ARN polimerasa. (Ubicado en el ARNm; es un tipo
de secuencia concenso)

Caja TTGACA

Tipos de genes

 Policistrónico: Un gen que corresponde a su ARNm (eucariotas)

 Monocistrónico: Regiones intronicas (no codificantes) y Regiones exonicas
(codificantes)(procariotas)

Splicing : Proceso por el cual se eliminan regiones intrónicas (proceso de

maduración)

3 Tipos de ARN Polimerasa (eucariotas)

 Pol I -> Nucleolo (-200 a -100;
a. Transcribe ARN Ribosomal 28s, 18s, 5s
 Pol II -> Nucleoplasma
a. Transcribe genes que generan proteínas (ARNm)
 Pol III -> Nucleoplasma
a. ARNm no codificantes y pequeños (ARNt, ARNr 5s)

E coli. Subunidades Alpha y Beta

 ARN Pol IV - Exclusiva de plantas

Diferencias entre transcripción

Procariotas Eucariotas
Se puede transcribir todo el ADN en Solo se puede transcribir el ADN que
cualquier momento constituye la eucromatina (Cromatina
descondensada)
Se transcribe la mayor parte del La mayor parte de ADN genómico no
ADN genómico. se tranbscribe (solo se transcribe el 35
%)
El ARN transcrito primario es El ARN transcritoo primario sufre en
funcional (no es precisa maduración el núcleo el procesamientoo de
postatranscripcional) maduración o postranscripcional.
Los ARNm se empiezan a traducir Los ARNm deben ser transportados al
segúm van siendo sintetizados citoplasma para participar en la
traducción.
Interviene un solo tipo de ARNpol Intervienen 3 tipos de ARNpol
diferentes (I, II y III) que sintetizan los
distintos tipos de ARN.
 El proceso es más simple El proceso es más complejo
La transcripción y la traducción son La transcripción y la traducción no
procesos simultaneos son procesos simultáneos

En la bacterias no es necesario que arn sufra de modificaciones; todo sucede al

mismo tiempo, estando todo en el citoplasma.

En las eucaritoas no se encuentran muchos genes; la densidad genica es baja.

Ribosomas libres(poliribosomas) y anclados(RER) -> Eucariotas .

Solo hay un tipo de ARN Polimerasa (Procariotas)

 Eucromatina: No condensada
 Heterocromatina: Está condensada

Pasos:
 Una vez que la polimerasa reconoce la secuencia(río arriba; región
promotora):
a. Movimieto de izquierda a derecha(5´a 3´)
b. Crecimiento de cadena de ARN
 Burbuja de transcripción en la ARN Polimerasa
a. Desenrolla ADN
b. Sintetiza ARN
i. Sitio catalítico:
1. Cadena molde ADN
2. Sitio de unión de ARN

Complemnetaria a cadena molde e identica a la cadena…

  Unidad de la holoenzima.
 Reconocimiento del promotor.
 Unión de factores reguladores.
 La entrada del nucleótido es controlada por la RNApol
Canales:
 Canal B y B´: ADN cerrado

Canal Cerrado: ADN abierto

Subunidades de la ARN Polimerasa

 Subunidad Alfa. Se encargan de reconocer los promotores (secuencias de

reconocimiento).
 Subunidad Sigma: Aporta especificidad(se incrementa la afinidad, para que
se situe donde quiera que este el promotor de interes).

Alpha y Gamma empiezan a ocurrir al mismo tiempo.

  Subunidad B: forma el centro catalitico.
 Subunidad B´: forma sitios cataliticos.

 Eventos abortivos.
 Hibrido de ARN y ADN; en punto de alargamiento.

Fin de la Transcripción

Terminadores: Secuencia y/o estructura

 Intrínsecos: se forman estructuras que jalan al RNA y lo separa de su

molde. Secuencias rica en C-G y se forman estructuras que se jale la ARN
pol.

 Dependientes de Rho: proteína que se une al DNA y separa la RNApol. Se

une a cierta secuencia del ARNm.

Represores y activadores

 Un represor se une a una region promotora, y genera que se reprima y que

no se genere la proteina -> Apagar la expresón de genes (impedimos que la
ARN pol se una; actuan en genes que estan activados de forma constitutiva).

 Un activador reconoce sencuencias en el rpomotor que genes que

normalmente esten apagado comiencen a expresarse – Activar la expresión
de genes (promueve que ARN pol se una; actuan en genes que estan
desactivados de forma constitutiva).

 Inductor:
 a. Inactiva al represor (los genes se podran expresar) (control negativo).
b. Activa al activador (favorece la transcripción)(control positivo).

 Corepresor:
a. Activa al represor (los genes se podran expresar) (control negativo)
b. Inactiva al activador (favorece la transcripción)(control positivo)

Factores de Transcripción

Los factores de transcripción son proteínas capaces de unirse específicamente a

secuencias cortas de ADN(con función reguladora) localizadas en los promotores de
genes, y de interactuar con el complejo de pre-iniciación de la transcripción para
inducir o inhibir la actividad de la enzima ARN polimerasa II. Regulan expresiones
de los genes.

Eucariotas nada más.

Tipos de factores de transcripción (de cada

Pol)

TFIB Pol I
TFIIB Pol II
TFIIIB Pol III

Operones (Francois Jacob y Jacques…)

Región o unidad genetica que esta operada por varios
genes; es reguladora, que controlan la expresión de los
genes.

Operon Lac.
Reprsor Lac. Actúa como sensor de la lactosa, deja de
actuar como represor cuando hay lactosa presente.

Proteína Activadora de Catabolitos (CAP). Actúa

como sensor de la glucosa. Activa la transcripción del
operón, pero solamente en niveles bajos de glucosa.

Se inicia la transcripción de genes relacionados al metabolismo de la Lactosa.

Clase 5
Traducción (Fase…)
  Proceso por el cual una célula elabora proteínas usando la información
genética que contiene el RNA mensajero (mRNA).

 El ARN m que acaba de salir de Transcripción necesita madura para poder

salir del nucleo.

Procesamiento del RNA

›› Modificaciones ‹‹
• Adición de 7-metil Guanosina (CAP) en el extremo 5’
• Adición de poli A en el extremo 3’ (poli- adenilación).
• Eliminación de intrones y empalme de exones (splicing – corte y empalme).

5 cap (Protección del ARNmensajero de la exonucleasa)

Pasos:

 La 5 ́trifosfatasa rompe el extremo 5 ́trifosfato. (Quita siempre el extremos o

sea 1 fosfato; Gamma)

 RNA guanililtransferasa forma un complejo GMP y lo transfiere al

difosfato.
a. (Complejo de 3 fosfatos y una Guanina, libera 2 fosfatos y mete dos
fosfatos y una Guanina ).

 La RNA (guanina-7) metiltransferasa metila la guanosina en la posición 7.

 Cambios conformacioneles

 Se agrega un CH3 en la última base nitrogenada

La estructura CAP puede ser reconocida por factores que influencian la
estabilidad del mRNA, splicing, exporte y traducción.

El ultimo nucleotido siempre queda con 3 fosfatos.

Poli A en el extremo 3’

• Zona rica en GU (secuencia de reconocimiento para la Poli A, para que cree la

cola de AAUAA, para iniciar la Traducción, para las Cadenasde Poli A; GC señal
para terminar la Traducción)
• Motivo AAUAA rio arriba
 • 200-250 A en humanos
• 70-90 A en levaduras

La estructura de PoliA protege al mRNA de ataques por nucleasas.

Este procesos solo se da en Eucariotas

Splicing (corte y empalme)

 Quitamos Intrones y unimos a los exones.

 Intrones: Región no codificantes

 Exones: Región codificante

Espliciosoma: 5snRNAs(U1,U2,U4,U5yU6)+proteínas

 U1-> Reconoce Cap 5´

 U2->Reconoce al Branch Poin/Intrón
 U4 ->Ayuda al proceso
 U5->Une a los exones (este es el más importante)
 U6
 Tenemos sitios de reconocimiento para el espliciosoma (se enecuentran
entre cada exon e intron).

La del extremo 5´: Secuencia consenso: Región conservada; o sea que siempre existe,
nunca se cambia.
La del extremos 3´: es más variable.

Pasos:

 U1 se une al sitio de 5´
 U2 se une al branch point
 U5 se encarga de acercar a los dos exones (Exon 1 y exon )
 U4 actua junto con U6 para que ya se unan los dos exones.

Producto final del intrón: Horquilla Lariat

Estas secuencias de intrones que no se utilizan, pasan a degradarse (por
exonucleasa)… para después dar lugar a nuevos nucleotidos.

Splicing Alternativo
Misma secuencia de un pre-mensajero
 Puede haber una combinación
Generación de familias de proteínas (Variabilidad)
Ejemplos: Quertatinas (existen diferentes tipos)
Regiones UTR 5´y 3´:

 Región Promotora: Señales para la union al ribosoma y para el inico de

traducción. (5´)
 Región Terminador: Delimita la secuencia codificante

¿Qué se necesita para la traducción?

 - RNA mensajero (Lleva a cabo la traducción)

 - Ribosomas (Fabrica de proteínas)
 - Aminoácidos (Se unen a ARNt y proteínas)
 - Enzima Aminoacil-tRNA-sintetasa (Forma los compuestos conlos
amionacidos correspondientes)
 - ATP
 - RNA de transferencia (tRNA) (Anticodon)

Pasos:

 Activación de aminoacidoas
Formacion de los 20 aminoacil tRNA
Ocupamos MG
Ocupagmos ATP

 Iniciación
Ocupamos Mg
Ocupamos GTP

 Elongación
Ocupamos Mg
Ocupamos GTP

 Terminación
Ocupamos Mg
Ocupamos ATP

 El ARN llega al robosoma

 ARNt en el ribosoma
 Un brazo tiene que reconocer al amionoacido
 Un brazo se une al triplete
 Una vez leído la secuendia de aminoacidos, el ARNt crea el aminoacido y lo
va sacando en forma de cadena polipetidica
 Una vez termine, se crea la proteína.

Codón: es una secuencia de tres nucleótidos que corresponde a un aminoácido

específico. Se encuentra en el ARNm.

Anticodón: secuencia de tres nucleótidos que se encuentra en el ARN de

transferencia (tRNA). su principal función es brindar especificidad
(complemnetario al codón mensajero) de unión con su codón correspondiente.
Se tiene que cargar/activar por medio del aminoacido especifico.

La estructura del tRNA está definida por cuatro brazos o asas; ordenados de 5'
a 3' son:
•brazo D o DHU
•brazo del anticodón
•brazo T o TΨC
•brazo aceptor del aminoácido

Características del código genético

 4 pares de bases (64 posibles combinaciones, pero solo hay 20

aminoooacidos)
 Código no traslapado (cuando se reconoce el sitio de inicio)
 Marco abierto de lectura (¿dónde inicia?¿dónde termina?) -No pausas,
siempre corrido(una vez inicia).
 Existe un marco de lectura “correcto” (solo determina para esa proteína)
1 codón de inicio: AUG (Metionina)
3 codones de término: UAA, UAG y UGA
 61 codones que codifican aá
 A excepción de triptofano y Metionina solo codifican a un codon, el resto
tiene dos o más codones

Cambios de posiciones de las bases nitrogenadas

  Cambio en la 3era posición generan el mismo amioácido similar (variantes
no patogénicas/significado incierta), al crearse el mismo no hay problema.
 Cambio en la 1era posición se crea uno similar, por uno del mismoo tipo.
 Cambio en 2da posición siempre se da en un aminoacido diferente.

Codones de paro: llegan y determinan a terminar

------------------------------------
¿si nuestra cadena molde va de 3´a 5 como sacamos el ARNm?
Simplemnete la sacamos ARNm

¿si nuetra cadena molde va de 5´a 3´como sacamos el ARNm?

Sacamos la complementaria (3´a 5´)
Y luego sacamos el ARNm

 ADN molde (3´a 5´)

 ADN no molde "codificante" (5´a 3´) (secuencia/fragmento de ADN/ líder)
 mRNA

-Complementaria a la molde e identica a…

DNA Pol simepre ocupa primer

ARN pol no ocupa primer

------------------------------------

>>Código degenerado<<

A partir del intermediario aminoacil-AMP (aá + ATP)

La enzima encargada de catalizar la unión del tRNA a su aminoácido correspondiente es la

aminoacil-tRNA sintetasa (sintetisa aminoacidos unidos a un tRNA) utilizamos ATP

Clase 1:
 Para el resto de los aminoácidos
 Clase2:
 Ala
 Asn
 Asp

A partir de Aminoacil-tRNA pega ATP al aminoacido liberando 2 Fosfato, para despues

popder unirlo al tRNA de transferencia. Hay un tRNA de transferencia para cada
aminoacido.

AMP: Nucleotido

Ribosomas Ecuariotas Ribosomas Procariotas

60s y 40s (80s) 50s y 30s (70s)

Se tiene que unir ambas subunidades para que sea funcional.

Sitios (catalítcos) en el Ribosoma:

 Sitio aceptor-aminoacil (A) (sitio de entrada y reconocimiento del codon y el
anticodon)
 Sitio peptidil (P) (unión entre aminoacidos)
 Sitio de salida (E) (sitio del que salen los aminoacidos que forman parte de
una nueva proteína)

Conforme se va crenado la proteína los sitios de van moviendo y creando nuevos (sitio A
pasa a sitio P, y se crea un nuevo sitio A)
 Factores de inicio:

 IF-1: facilita la interacción del mensajero con el ribosoma. Mantiene la

estabilización del complejo.
 IF-2: forma un complejo entre el tRNA y GTP e interactúa con el anticodón.
Con actividad de GTPasa (rompe GTP) dependiente del ribosoma une al
tRNA al sitio P y con la energía del GTP acopla la sub. 50S.
 IF-3: Unión a la subunidad pequeña del ribosoma ( mientras esté presente
no se puede acoplar la subunidad grande) Unión de 30S al mRNA.
Determina el equilibrio del complejo ribosomal. Si el IF3 no estuviera
presente no se podria realizar transcripcón.

RF -> Factor de liberación de la cadena de proteína y las subinidades que

forman el ribosoma.

La traducción es el segundo paso de la expresión génica y en eucariotas ocurre en el

citoplasma, donde los ribosomas (libres o asociados al retículo endoplasmático rugoso)
leen el código del ARNm y lo descodifican para sintetizar proteínas.

 Factores de Enlongación
 Factores de Liberación de Polipeptidos
 Laboratorio
Proteasa Tipo de enzima que descompone las proteínas en proteínas más
pequeñas o unidades proteínicas más pequeñas, como péptidos o
aminoácidos .

Ablandador de carne cuenta que están hechos de “SAL, DEXTROSA,

BROMELAÍNA (SUAVIZADOR) Y SILICATO DE CALCIO
(AGREGADO PARA QUE NO SE AGLOMERE)” la
bromelina es una enzima de origen animal extraída de los tallos
de la piña, esta enzima es capaz de disponer los aminoácidos, de
ahí hace sentido que ablande la carne ya que rompe los
aminoácidos.
Detergente /Lisis La finalidad de la lisis celular es romper las membranas para
liberar los ácidos nucleicos para su solubilización en solventes
adecuados
Solución salina
Etanol ultrapuro de grado biológico molecular se utiliza para
la purificación y precipitación de biomoléculas como ácidos
nucleicos y proteínas.
Trizol permite el aislamiento de ARN, ADN y proteínas a partir de la
misma muestra. Es utilizado debido a que ofrece una capacidad
de lisis superior, incluso con tipos de muestras difíciles, como
en nuestro caso, tejido hepático.
Cloroformo formar las fases orgánicas y acuosas, desnaturalizar proteínas e
inactivar nucleasas.
Isopropanol precipita el DNA porque compite con este por el agua,
deshidratando y llevándolo al fondo del tubo
Etanol disminuye la constante dieléctrica del solvente acuoso,
provocando una disminución en la solubilidad del ADN, que en
presencia de altas concentraciones de ventas, precipita; es decir
que este es utilizado como una forma de concentrar ADN.

Extracción DNA Extracción RNA

-Las sustancias utilizadas fueron:
detergente, proteasas, solución salina,
estanol.
-Para preservar el DNA añadimos
proteasas (para eliminar DNAsas), a la
mezcla.
-Se añade solución salina para hacer el
DNA menos soluble en el extracto celular.
-Toda la extracción es de más corta
duración.
-El DNA puede conservarse a temperatura
ambiente.
-Relativamente es un proceso fácil de
llevar a cabo.
-Las sustancias utilizadas fueron: trizol,
cloroformo, isopropanol y etanol.
-Para separar el DNA, utilizamos TRIzol.
-Se añade etanol para separar la sal del RNA.
-Es de más larga duración ya que en las
centrifugaciones debes esperar varios
minutos.
-Para conservar el RNA son necesarias
temperaturas de -70°C para evitar su
degradación.
-Es un proceso más complejo con reactivos
más peligrosos y hay un mayor margen de
error.

Explica por qué se utilizan 2 tipos de alcohol para la precipitación del RNA.
-Primero utilizamos isopropanol para precipitar el DNA. La manera en la que esto sucede
es que el isopropanol compite con el DNA por el agua, deshidratándolo y llevándolo al
fondo del tubo. Así podemos separarlo del RNA. Posteriormente, agregamos etanol para
poder dejar ahora sí el RNA completamente aislado (separamos la sal).

Explica qué diferencia existe entre almacenar el RNA en agua estéril libre de RNAsas
y agua DEPC

El agua DEPC se ha desarrollado específicamente para su uso en ensayos de ARN debido

a la inactividad de la ARNasa durante el tratamiento con DEPC . El ARN libre circulante
en plasma materno es una molécula inestable con una vida media más corta que el ADN, la
cual es altamente degradada y fragmentada

a) Recoger las células Pasar cepillo por el interior de la mejilla

b) Disolver las membranas Añadir solución de detergentes
c) Precipitar el DNA Añadir alcoholo frío sobre el extracto celular
d) Romper proteínas Añadir proteasa, incubar a 50°C
e) Hacer al DNA menos soluble en agua Añadir sal

Electroforesisis

¿Cómo se pueden los fragmentos de DNA separar unos de otros?

La electroforesis del gel de agarosa es un procedimiento usado para separar fragmentos de

DNA de acuerdo con sus tamaños. El DNA es una molécula que contiene muchas cargas
eléctricas negativas. Los científicos han utilizado este hecho para diseñar un método para
separar los fragmentos de DNA.

Imagina el gel como tamiz con poros minúsculos, los cuales permiten que las partículas
pequeñas se muevan a través de él rápidamente. Cuanto más grande es el tamaño de las
partículas, más lento se filtran a través del gel. Después de un período de exposición a la
corriente eléctrica, los fragmentos de la DNA se acomodarán por tamaño. Los fragmentos
que son del mismo tamaño tenderán a acercase a través del gel y formar bandas.

La electroforesis de ácidos nucleicos es el método habitual para separar, identificar y

purificar moléculas o fragmentos de DNA y RNA. En los amortiguadores de corrimiento
utilizados, los ácidos nucleicos están cargados negativamente y migran hacia el ánodo.
Cada molécula aporta una carga negativa (procedente del grupo fosfato), por lo que la
relación carga/tamaño es prácticamente constante e idéntica para todas las moléculas,
independientes de su tamaño (un nucleótido tendrá la misma movilidad que un fragmento
de doble cadena de 800pb o unos de 5kb).

La electroforesis de RNA se lleva a cabo en geles de agarosa. Este soporte es restrictivo

para los ácidos nucleicos, de modo que los diferentes fragmentos (al tener la misma
relación carga/tamaño), migran en función de su tamaño y/o conformación.

Una vez terminado el protocolo de obtención de RNA a partir de muestra de tejido animal,
el siguiente paso consiste en determinar la concentración del material obtenido,
comúnmente se realiza una curva de absorción dentro del espectro de luz ultravioleta en un
rango de longitud de onda entre 260 y 280 nm; posteriormente para evaluar la integridad
del material genético obtenido, se procede a realizar una electroforesis en gel de agarosa
utilizando amortiguador de acetato TAE y una corriente eléctrica alterna de 100V por un
periodo aproximado de 30 minutos.

En un gel de ADN, los fragmentos más largos migran por el gel más lentamente y se
mantienen más cercanos a los pozos (donde se cargan inicialmente al gel). Los fragmentos
de ADN más cortos migran más rápidamente por el gel y se acercan más al extremo más
lejano (más alejado de los pozos).

Enzimas de la restricción- tijeras moleculares

Los virus llamados bacteriófagos, son enemigos naturales de las bacterias. Estos virus
infectan a las bacterias inyectando su propio DNA para forzarlas a replicarlos. Las bacterias
han respondido desarrollando un mecanismo de defensa natural llamado enzimas de
restricción, las cuales pueden cortar y destruir el DNA invasor. Las bacterias previenen en
la digestión de su propio DNA modificando ciertas bases, lo que permite que protejan su
propio DNA mientras que el DNA extraño es cortado. Esto se podía considerar un sistema
inmune muy primitivo.

Las enzimas de la restricción buscan en el DNA viral las secciones palindrómicas

específicas de pares de bases, tales como GAATTC (Fig. 14), y cortan en estos sitios.
Algunas enzimas de restricción pueden reconocer una porción de pares de bases y cortar el
DNA dejando extremos pegajosos en el sitio del DNA en donde cortan. Algunas otras
enzimas de restricción hacen un corte a recto en ambas hebras, creando fragmentos dobles
de DNA, denominados extremos romos.

La enzima de restricción corta los enlaces moleculares a lo largo del genoma en donde
encuentre sitios consenso. Una secuencia palindrómica se puede repetir varias veces en una
molécula de DNA y la enzima especifica cortará todos los palíndromos, sin importar el
origen o la especie del DNA.

 Una secuencia en una hebra de DNA y su secuencia complementaria en la otra

hebra pueden formar un palíndromo, por ejemplo: GATTC - CTTAAG
 Los palíndromos se pueden detectar por las enzimas de la restricción
 Las enzimas de la restricción cortan los palíndromos en los sitios de restricción
 Las enzimas de la restricción reconocen palíndromos específicos
 El tamaño del fragmento se puede determinar por el número de pares de bases que
contiene