Tema-3.6.

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Ingenieria Genetica y Biotecnologia

3º Grado en Bioquímica

Facultad de Ciencias Ambientales y Bioquímica de Toledo

Universidad de Castilla-La Mancha

Reservados todos los derechos.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
 Tema 3.6. Análisis y modificación de la expresión génica

Realmente mediante la mutagénesis insercional, o por el sistema CRISPR/Cas9 podemos conocer las
funciones génicas de un cierto producto proteico codificado por un gen, aunque en algunos casos es
de gran utilidad estudiar cómo se regula la expresión de dicho gen.

 Recordamos que además del promotor básico,

que permite la unión de la RNA polimerasa y la
transcripción, existen otros elementos que son
capaces de aumentar la expresión o disminuirla,
los Enhancers y los Insulators.

¡Para ello usamos estructuras que combinan un gen

reportero y un promotor!

Algunos de los más importantes, es el GFP o la luciferasa,

que tras añadir luciferina se transforma en otro producto
y libera energía de muy baja intensidad, pero permite la
cuantificación de la expresión.

¡Incluso con las proteínas fluorescentes podemos conocer el tejido exacto donde se expresar
comparándolo con la expresión de otros genes!

Para conocer los elementos básicos de un promotor se hacen deleciones de cada elementos y se
observa su expresión. Una vez dejamos de ver expresión podemos sugerir que ese elemento es
importante en el promotor.

¡Todo esto también puede realizarse por mutagénesis dirigida!

En el caso de querer estudiar la posición de un promotor a nivel genómico, para ello usamos la
técnica de promotores, donde añadimos genes reporteros sin promotor quedando bajo el control de
un promotor endógeno.

¡Esto nos sirve para poder obtener colecciones de promotores que expresen dicho gen en un tejido
especifico o mediante una inducción de algún factor!

 También podemos ver la técnica de trasposón en Drosophila en donde se añade los

elementos básicos (caja TATA) y en ciertos casos puede quedar el gen englobado en un
Enhancer.

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  Para conocer la localización celular se suelen usar fusiones traduccionales de cDNA con genes
reporteros que nos permiten ver como la localización de las proteínas.

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¡Con esto mediane fluorescencia podemos conocer a donde se dirige la proteína!

Aunque conocer la inactivación de la expresión de un gen es muy importante porque nos permite
inhibir la expresión en un punto exacto. Todo esto se realiza sin alterar la secuencia de un gen.

 Para ello, explotamos la maquinaria celular operando con miRNA o RNA interferente con
ayuda de RISC/Dicer.

Es importante explicar que esos RNA interferentes se crean de un gen que posteriormente madura
en una secuencia de 20-30 nt. Estos niveles actúan a nivel de bloquear la traducción o la
transcripción.

Los vectores que se usan para formar estos RNA interferentes son complejos, aunque requieren de
pocos elementos:

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Banco de apuntes de la
 ¡Recuerda que el RNA debe adquirir la estructura secundaria y en su ultimo paso debe ser
complementaria a la secuencia a silenciar!

En ciertos casos, la expresión de un gen de interés es interesante en una investigación. Entonces,

cuando se expresa dicho gen con un promotor fuerte el fenotipo es letal e impide la investigación.

 Para ello una alternativa es el uso de promotores conocidos con una expresión restringida

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mediante una expresión ectópica. Estos sistemas se basan en GAL4/UAS.

¡GAL4 consiste en un factor transcripcional quimérico que presenta dos subunidades de unión al
DNA y 2 subunidades de dominio transcripcional!

 Mientras tanto, UAS consiste en un sitio de unión de GAL4 que se encuentra en el promotor

Para ello se usan estructuras que permiten la expresión de GAL4 que al unirse a UAS provocan una
amplificación del gen. Entonces, estos genes pasan a estar regulados por el promotor X.

Incluso también pueden seguirse estrategias de expresión condicional, en donde la expresión de un

gen se regula al aplicarse un estímulo inductor. Estos pueden ser:

i. Promotores nativos inducibles

ii. Sistemas inducibles sintéticos

En el caso de los promotores nativos, se conocen algunas colecciones de promotores que son
capaces de activarse en función de estímulos como el choque térmico, la luz u hormonas.

 En el caso de los sistemas inducibles se usan promotores sintéticos que se activan de un

estimulo experimental. Estos estímulos activan a ciertos factores de transcripción que
activan los promotores.

Un ejemplo muy claro de esto es el sistema XVE-Olex inducible por estrógenos:

▪ XVE consiste en un factor de transcripción que presenta un dominio de unión al DNA, un

dominio activador transcripcional y un dominio de unión a estrógenos (B-estradiol).

¡OlexA consiste en el sitio de unión de XVE!

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