Wuolah Free Expresion Genica en Plantas Tecnicas Implicadas

Expresion-genica-en-plantas-tecn...
Investigadora
Fisiología Vegetal Aplicada
4º Grado en Biología
Facultad de Ciencias
Universidad de Granada
Reservados todos los derechos.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
Asignatura: Técnicas y Metodologías
MÁSTER EN AVANCES EN
BIOLOGÍA AGRARIA Y ACUICULTURA
EXPRESIÓN GÉNICA EN PLANTAS – TÉCNICAS

1. TEORÍA CELULAR E INFORMACIÓN GENÉTICA
En el s. XIX se instaura la “Teoría Celular” y así se consiguió terminar con muchas ideas que ya
había.
No hay vida si no hay célula. La vida se define de una determinada manera y solamente la
célula es capaz de cumplir esa serie de características. Definir el concepto de vida es muy

complejo.
Teoría Celular → todos los seres vivos (unicelulares o pluricelulares) son la unidad de la vida.
En el interior de cada célula existe ARN que está en el interior de los núcleos de todas y cada
una de las células. Mientras que el ADN está deshilachado en forma de cromatina. Tenemos del
orden de 46 cromosomas (23 provienen del padre y 23 provienen de la madre). El ADN es el
responsable en última instancia de la vida.
2. GEN, EXPRESIÓN GÉNICA Y FUNCIÓN CELULAR
Un gen es un fragmento de ADN que codifica un producto génico activo para la célula.
Toda función celular depende directa o indirectamente de la expresión de un gen.
Un gen se expresa cuando se transcribe: el ARN polimerasa se une a un trozo de ADN y hace
una copia del ADN en ARN, e implica que el gen se ha expresado.
3. ESTRUCTURA DE UN GEN Y EXPRESIÓN GÉNICA
La secuencia transcrita se basa en que el ARN polimerasa hace una copia. Mientras que la
secuencia reguladora es la secuencia de ADN y está compuesta por fragmentos de ADN que van
a ser reconocidos por factores de transcripción. Los factores de transcripción son proteínas
reguladas, que inducen o reprimen la expresión de un gen.
Una vez que se transcribe el ARNm, hay varias modificaciones. Las hebras de ARN son muy
inestables porque hay ARNasas fuertemente activas y se pierden los intrones.
El ARNm sale al citoplasma y se encuentran con ribosomas que sintetizan proteínas. Las
proteínas son secuencias aminoácidas acordes a la secuencia del fragmento traducible.
a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-4643798
En las dos últimas décadas se ha observado que los productos génicos activos no son solo
proteínas, también ribosomas, entre otros.
En los últimos años aparece en escena los microARNs (trozos de ARN que tienen una función
reguladora).
si lees esto me debes un besito

4. TÉCNICAS MOLECULARES (de menos a más modernas, sofisticadas, caras y datos)

 Técnicas basadas en la presencia de ARN
Se usa la complementariedad de bases en los ácidos nucleicos.
 Northern blotting
Identifica la presencia de un ARN específico (habitualmente ARNm) en una

mezcla de ARN previamente aislado, por medio de la hibridación e identificación
con una sonda complementaria marcada (fluorescencia, radiactiva, etc.). La
cantidad de marca puede ser cuantificable.
Es una técnica muy sensible. Se trabaja con extractos de ARN, se coge la

secuencia de genes y se sintetiza un fragmento de ácido nucleico ARN o ADN que
sea complementario a lo que se quiere pescar.
Se extrae el ARN, se carga en una electroforesis de ADN, se carga el ARN y se

separan los ARN en base a su carga eléctrica. Cuando se termina la electroforesis,
se coge el gel y se coloca un papel de nitrocelulosa justo encima. En un bandeja
con una concentración muy concentrada con sal llamada SSC, se pone un papel
que entre en contacto con la solución, junto con el gel y la membrana. El agua
tiende a entrar por capilaridad por los papeles, llega al gel y sube hacia arriba, así
el ARN se pega en el papel de nitrocelulosa y hace una copia de lo que había en el
gel. Se mete dentro de una bolsa cerrada, se inyecta una solución con la sonda
radiactiva y la sonda se une a los sitios donde esté ese ARN. Luego se ponen
marcadores de peso.

 Técnicas basadas en la PCR
Técnica muy poderosa porque permite identificar, e incluso, cuantificar una

secuencia determinada de ARNm a partir de una muestra biológica (expresión
génica).
Se aísla ARN y de ese ARN se sintetiza ADN. Se coge ARN y se sintetiza ADN
complementario y para hacer ese ARN complementario se necesita una
transcriptasa reversa. La transcriptasa reversa es una enzima muy activa que

tiene los retrovirus. Los retrovirus cuando infectan llevan la secuencia de
transcriptasa reversa, que pueden utilizar su ARN, transformarlo en ADN para
que se integre en el genoma luego sale y produce ARN.
PCR semicuantitativa → se usa para saber cuántos genes hay en un determinado

tejido. La cuantificación no es muy exacta. Es decir, intenta cuantificar la
expresión de un gen por una PCR normal.
PCR a tiempo real o PCR cuantitativa → técnica de PCR que permite cuantificar la
cantidad de DNA que se amplifica en cada ciclo de la reacción. Es más precisa y
rápida, aunque más cara.
 Hibridaciones in situ
Técnica muy difícil. Permite detectar la presencia de un determinado ARN en un

corte histológico, y para ello se usa una sonsa marcada de ARN o ADN. Así se
detecta la expresión génica al nivel de la resolución del microscopio
(microscopía óptica: tisular y microscopía electrónica: celular).
 Técnicas basadas en las secuencias reguladoras
 Uso de genes “reporter” o chivatos
Se necesita conocer la secuencia nucleotídica reguladora en 5’ (upstream) de un

gen (atg o +1). Además, se necesita un gen que codifique un producto génico
detectable en el laboratorio ( -glucuronidasa o GUS). Entonces se construye un
gen híbrido que exprese el gen “reporter” (GUS) bajo el control del promotor de
la planta y se introduce en un sistema vivo para analizar.
Se usa para estudios en órganos completos y en extractos proteínicos.
 Captura de factores de transcripción
Los factores de transcripción son zonas donde se unen proteínas que van a
activar o reprimir la expresión del gen.
Se conocen muchos genes codificantes, pero pocos factores de transcripción.
La identificación en las secuencias reguladoras de dominios dianas y de

proteínas que se unen a ellos nos aporta datos funcionales moleculares de mucho
valor.
Diferentes aproximaciones: geles de retardo, identificación predictiva “online”,

confirmación por co-inmunoprecipitación, confirmación in vivo (plantas
transgénicas), Yeast One-Hybrid Systems, etc.

 Técnicas transcriptómicas
El transcriptoma es el conjunto de ARNs o transcriptos presentes en una célula, tejido u

organismo en un momento determinado y una condición fisiológica.
En un genoma determinado hay infinidad de transcriptomas según el tipo tisular o las

condiciones ambientales.
Hay técnicas que permiten conocer y comparar el conjunto de ARNs de un extracto

(genes expresados) de “un golpe”.
Necesidad de soportes bioinformáticos complejos (muchos datos).
 Gene arrays
Se coge una secuencia de ADNA de los genes, se pega en una placa pequeña de
silicio y en cada pocillo se pone un trozo de gen y así se construye un microchip.
Se denomina microchip o macrochip en función del número de genes que tenga.
Se coge un extracto de una hoja, tejido, etc. y donde haya ARN de los genes que se
han expresado se unirán a su secuencia correspondiente, se mete en una
máquina y da un patrón de expresión.
Se basa en la utilización de microchips de polisilicio y se pega un trozo de ADN

representativo de cada uno de los genes que se expresa en la especie.

 Predicciones In Silico
La información obtenida por técnicas transcriptómicas (microarrays) se

aglutinan en ciertos portales de la web y se utilizan con fines predictivos.
Un gen o una condición fisiológica pueden ser examinada online a partir de datos
experimentales obtenidos por otros laboratorios en diferentes especies.
 RNAseq, secuenciación transcriptómica o WTSS
Tecnología reciente para secuenciar ADNAc de una sola muestra o extracto. Es

decir, secuenciación de todos los ARNs de una muestra de ADN complementario.


Wuolah Free Expresion Genica en Plantas Tecnicas Implicadas

Cargado por

Información del documento

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Wuolah Free Expresion Genica en Plantas Tecnicas Implicadas

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Expresion-genica-en-plantas-tecn...

Fisiología Vegetal Aplicada

Reservados todos los derechos.

EXPRESIÓN GÉNICA EN PLANTAS – TÉCNICAS

Reservados todos los derechos.

2. GEN, EXPRESIÓN GÉNICA Y FUNCIÓN CELULAR

Toda función celular depende directa o indirectamente de la expresión de un gen.

3. ESTRUCTURA DE UN GEN Y EXPRESIÓN GÉNICA

Reservados todos los derechos.

si lees esto me debes un besito

Reservados todos los derechos.

Se usa la complementariedad de bases en los ácidos nucleicos.

Identifica la presencia de un ARN específico (habitualmente ARNm) en una

Es una técnica muy sensible. Se trabaja con extractos de ARN, se coge la

Se extrae el ARN, se carga en una electroforesis de ADN, se carga el ARN y se

si lees esto me debes un besito

 Técnicas basadas en la PCR

Técnica muy poderosa porque permite identificar, e incluso, cuantificar una

Reservados todos los derechos.

PCR semicuantitativa → se usa para saber cuántos genes hay en un determinado

Técnica muy difícil. Permite detectar la presencia de un determinado ARN en un

 Técnicas basadas en las secuencias reguladoras

 Uso de genes “reporter” o chivatos

Se necesita conocer la secuencia nucleotídica reguladora en 5’ (upstream) de un

Se usa para estudios en órganos completos y en extractos proteínicos.

 Captura de factores de transcripción

La identificación en las secuencias reguladoras de dominios dianas y de

Diferentes aproximaciones: geles de retardo, identificación predictiva “online”,

Reservados todos los derechos.

El transcriptoma es el conjunto de ARNs o transcriptos presentes en una célula, tejido u

En un genoma determinado hay infinidad de transcriptomas según el tipo tisular o las

Hay técnicas que permiten conocer y comparar el conjunto de ARNs de un extracto

Necesidad de soportes bioinformáticos complejos (muchos datos).

Se basa en la utilización de microchips de polisilicio y se pega un trozo de ADN

si lees esto me debes un besito

La información obtenida por técnicas transcriptómicas (microarrays) se

 RNAseq, secuenciación transcriptómica o WTSS

Tecnología reciente para secuenciar ADNAc de una sola muestra o extracto. Es

Reservados todos los derechos.

si lees esto me debes un besito

También podría gustarte