CASOS entregar hoja 3

Caso 1. La ausencia de proteínas Rh en la sangre se puede deber a la aparición de mutaciones en

homocigosis en los alelos de locus RH o a la pérdida de las proteínas que los glicosilan. En un reciente
estudio se ha encontrado una nueva mutación, IVS4+1G>T, en el gen RHCE. Esta mutación genera una
nueva diana para la enzima de restricción MseI en los individuos que la portan.

En los individuos que componen el pedigrí que se muestra a continuación se ha analizado la presencia
de esa mutación en el DNA genómico mediante amplificación por PCR con oligonucleótidos
complementarios a regiones flanqueantes a la mutación, la posterior digestión con la enzima MseI y la
separación de los fragmentos obtenidos por electroforesis. (Los tamaños de los fragmentos obtenidos
se indican en el gel)

Cuestión 1. Explica los resultados obtenidos en este análisis indicando el genotipo molecular de los
individuos que forman el pedigrí.
Cuestión 2. ¿Qué efectos podría tener esta mutación en el producto proteico final? ¿Qué individuo/s
serían Rh negativos del pedigrí analizado? ¿Qué patrón de transmisión presentará? Justifica todas tus
respuestas.
Cuestión 3. Los investigadores quieren analizar si otras secuencias donadoras cercanas (GT indicados
con cabezas de fecha) puedan estar funcionando como nuevos sitios donadores de splicing. ¿Qué tipo
de experimento/s les aconsejarías para confirmar/descartar su suposición? Descríbelos de forma
precisa.

CASO 2. Las cataratas congénitas son la principal causa de ceguera en niños en todo el mundo. Las
cataratas se caracterizan por una opacificación del cristalino del ojo que se presenta al nacer.
Aproximadamente el 50% de las cataratas congénitas tienen una base genética.
La mayoría de las mutaciones se deben a mutaciones en los genes que codifican para las proteínas
denominadas cristalinas. Las proteínas cristalinas constituyen hasta el 90% de las proteínas solubles en
el cristalino y se componen de tres grupos, α-, β- y γ-cristalinas. La α-cristalina pertenece a la familia de
las proteínas de choque térmico (HSPs), que participan en evitar la formación de agregados por
proteínas parcialmente desplegadas. La familia α-cristalina consta de dos proteínas similares, αA,
codificada por el gen CRYAA, y αB, codificada por CRYAB. Estas proteínas contribuyen al mantenimiento
de la transparencia de la lente y de su correcto índice de refracción.
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En una familia de origen chino con muchos miembros afectados de cataratas congénitas se ha buscado
en una niña de 10 años (IV:1 en el pedigree de panel A) que presenta micro-oftalmia con cataratas
bilaterales congénitas la mutación causante de ese defecto.
Para ello se han secuenciado todos los exones y las regiones flanqueantes de 7 genes asociados con
micro-oftalmia en otras familias (CRYAA, CRYBA4, CRYBB2, CRYGC, GJA8, MAF, y PITX3). Durante este
análisis se ha identificado una mutación c.35G > T localizada en el exón 1 del gen CRYAA (panel B). La
mutación genera una nueva diana para la enzima de restricción SacI, y la región genómica que
comprende el exón 1 ha sido amplificada mediante PCR y digerida con la enzima SacI para otros
miembros de la familia. Los resultados obtenidos se muestran en el panel C (M es el carril del marcador
de peso molecular, los fragmentos de pequeño tamaño no se muestran en la imagen).

A B

Cuestión 1. Explica los resultados obtenidos y discute si los resultados obtenidos permiten confirmar (o
no) que se trata de la mutación asociada al fenotipo.

Previamente en ratones knock-out para CRYAA se había detectado la aparición micro-oftalmia y

opacidad del cristalino, lo que indicaba que la proteína αA-cristalina era importante para el desarrollo y
mantenimiento de la transparencia del cristalino.
Ahora para intentar comprender la fisiopatología de esta nueva mutación los investigadores han
expresado la proteína WT y la proteína con la nueva mutación c.35G > T (produce una substitución en
posición 12 p.Arg12Leu) en células HeLa.
Los resultados que han obtenido mediante su análisis por western blot se muestran en el panel D y su
distribución intracelular en el panel E (los núcleos se muestran en azul y αA-cristalina con marcaje verde).

D E

Cuestión 2. Describe y explica los resultados obtenidos en ambas pruebas. Atendiendo al patrón de
herencia y a las pruebas funcionales presentadas propón un mecanismo por el que la mutación
encontrada pueda causar el fenotipo de aparición de cataratas en los pacientes.