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OBJETIVOS. Realizar el procedimiento para el aislamiento de Staphylococcus, Enterococcus y Streptococcus.

. Aprende a realizar la toma de muestra para exudado otico y farngeo. Aplicar correctamente la tcnica de inoculacin de exudado otico y farngeo. Hacer el montaje de las pruebas para la identificacin de Staphylococcus, Enterococcus y Streptococcus. Realiza la interpretacin de los resultados.

INTRODUCCION
Staphylococcus aureus: son clulas esfericas alrededor de 1m de dimetro Gram positivo generalmente agrupadas en racimos. Crecen con facilidad en la mayor parte de los cultivos fermentan muchos carbohidratos y producen pigmentos que varan desde el color blanco hasta el amarillo intenso, bajo condiciones aerobias o microaerofilas. Las colonias en los medios slidos son redondas, lisas, convexas y resplandecientes. Los estafilococos son catalasas positivas lo que lo distinguen de los Streptococcus. Los estafilococus patgenos son hemolticos y coagulan el plasma algunos forman parte de la microbiota normal de la piel y mucosas de los humanos. En tanto otros producen supuracin, formacin de abscesos e incluso septicemia.los estafilococos coagulasa negativos tambin forman parte de la microbiota humana normal. Enterococcus spp: son cocos Gram positivos esfricos u ovoides y se disponen en cadenas, las colonias miden de 0.5 a 1mm de dimetro, son lisas, de bordes definidos y producen hemolisis alfa o ninguna. Enterococcus faecalis es la especie ms comn y causa del 85 al 90% de las infecciones enterococicas. estos microorganismos son parte de la microbiota gastrointestinal, vagina y uretra, son la causa ms frecuente de infecciones nosocomiales , los sitios ms comunes de infeccin son las vas urinarias, heridas, vas biliares y sangre, poseen una resistencia a agentes antimicrobianos a los cuales en general son sensibles los estreptococos. Los Enterococcus se diferencian de los estreptococos por su capacidad de desarrollarse a 10 y a 45oC, crecer en concentraciones de NaCl al 6.5 % y por producir la enzima pirrolidonil arilamidasa (pirrolidonasa o PYR) ms del 90% de las cepas poseen el antgeno para el grupo D de Lancefield. Streptococcus del grupo A: son cocos Gram positivos, catalasas negativos que tienden a desarrollarse en pares y cadenas son homofermentadores lo que significa que el nico producto de fermentacin de la glucosa es el acido lctico, son oxidasa negativa, tienen gran capacidad para efectuar diferentes grados de hemolisis. Entre las enzimas ms importantes que elaboran los Streptococcus hemolticos estn desoxirribonucleasa (DNasa), exotoxinas, hemolisinas (estreptolisinas O), hialuronidasa y estreptoquinasa. Streptococus beta hemolticos del grupo A (Streptococcus pyogenes) est asociada a faringoamigdalitis.

Para llevar a cabo el cumplimiento de los objetivos realizamos los diferentes procedimientos en distintos das.
Da # 1 lunes 10/10/2011. Se procedi a realizar la toma de muestra para exudado otico y exudado farngeo de la siguiente forma: Exudado otico.
1.

realizamos una ligera traccin hacia arriba y atrs del pabelln de la oreja e introducimos un hisopo estril rotndolo suavemente.

2. sembramos la muestra del paciente en los medios de agar sangre humana y agar McConkey colocando la muestra con el hisopo en un borde del plato.
3. 4.

tomamos un asa redonda estril y realizamos el rayado. incubamos a 37oC por 24 horas.

Exudado farngeo. 1. Inclinamos ligeramente hacia atrs la cabeza del paciente e iluminamos bien la garganta.
2.

presionamos la lengua hacia abajo con depresor de madera de modo que pueda observarse la parte posterior de la garganta. frotamos el hisopo de algodn estril de arriba hacia abajo contra ambas amgdalas , contra la parte posterior de la faringe y contra cualquier mancha blanca que se encuentre alrededor de las amgdalas. sembramos la muestra del paciente en los medios de agar sangre humana y agar McConkey colocando la muestra con el hisopo en un borde del plato. tomamos un asa redonda estril y realizamos el rayado. incubamos a 37oC por 24 horas.

3.

4.

5.

Luego procedimos al reaislamiento de:

Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis y Streptococcus grupo A en: agar sangre humana. Proteus mirabilis en agar McConkey y agar EMB.

Pseudomona aeruginosa: agar McConkey, EMB y Sangre humana.

Rayamos el plato de la manera convencional e incubamos a 37oC por 24 horas.

Da # 2 Martes 11/10/2011. Procedimos a la lectura de los platos mediante la observacin de las caractersticas morfolgicas de las colonias. Staphylococcus aureus: En el plato que sembramos esta bacteria se observaron colonias de color gris, redondas, convexas, bordes enteros y convexas, con b-hemolisis alrededor de la colonia. Enterococcus faecalis: En el plato que sembramos esta bacteria encontramos colonias pequeas, bordes regulares, redondas, convexas con hemolisis alfa. Streptococcus grupo A: En el plato que sembramos esta bacteria encontramos colonias pequeas, bordes regulares, redondas con hemolisis beta. Proteus mirabilis: observamos colonias lactosa (-), transparentes, medianas, semiconvexas, redondas de bordes regulares y olor a azufre. Pseudomonas aeruginosa: Observamos colonias lactosa (-), transparentes con pigmento rosado, medianas, planas, bordes regulares y olor a tamal pisque. luego procedimos al montaje de las pruebas correspondientes para la identificacin de las bacterias. Staphylococcus aureus: Prueba de catalasa

Fundamento: Staphylococcus aureus posee la enzima catalasa, por lo tanto da reaccin positiva que se caracteriza por la produccin de burbujas al agregar perxido de hidrogeno al 3%. Resultado: positivo, produccin inmediata e intensa de burbujas. prueba de la coagulasa. Fundamento: es una sustancia similar a la trombina presente en los cultivos capaz de convertir el fibringeno en fibrina, lo que da como resultado la formacin del coagulo visible.

procedimiento: 1- en un tubo de ensayo agregamos 1ml de plasma con una dilucin de 1:5.
23-

inoculamos 2 colonias sospechosas de Staphylococcus aureus. se incuba a 37C por un tiempo de 1 a 4horas.

fundamento de la bacteria. Staphylococcus aureus produce coagulasa, protena de tipo enzimtico que coagula el plasma citratado u oxalatado. resultado: positivo, hay formacin de coagulo. Streptococcus -hemoltico del grupo A: prueba de Bacitracina: fundamento: los Streptococcus beta hemolticos del grupo A son susceptibles a bajas concentraciones del antibitico polipeptidico bacitracina. proporciona un mtodo sencillo y econmico para la identificacin presuntiva de este estreptococo. procedimiento: 1. con un asa recta tomamos de 1 UFC del plato de ASH. 2. descargamos el inoculo en el centro de un plato de ASH.
3.

con una asa redonda estriamos el inoculo sobre una rea circular que abarque 2/3 del plato, estriamos en 3 direcciones. con una pinza previamente flameada colocamos un disco de bacitracina de 0,04 unidades( taxo A 0,04).se asegura que el disco

4.

este adherido a la superficie del agar presionando suavemente el mismo.


5.

incubamos de 35-37oC durante 24 horas.

Resultado: hay un halo de inhibicin lo cual nos indica la sensibilidad a la bacitracina.

Enterococcus faecalis. prueba de la optoquina. fundamento. procedimiento. 1. De un cultivo puro inoculamos un plato con agar sangre humana al 5%. 2. Estriamos el inoculo en 4 direcciones para favorecer el crecimiento homogneo del microorganismo.
3.

colocamos el disco de optoquina en el centro del inoculo e incubamos de 12 a 24 en CO2.

4. medimos el tamao de la zona de inhibicin en mm. resultado. Halos de inhibicin menores de 14 mm. son resistentes a la optoquina.

prueba de bilis esculina. Fundamento. Enterococcus spp son tolerantes a las altas concentraciones de bilis, por lo tanto hidrolizan la esculina presente en el disco. procedimiento 1. rotulamos un tubo de ensayo. 2. agregamos 100 um litros de agua destilada esteril. 3. tomamos 3 colonias de un cultivo puro e hicimos una suspensin homognea. 4. con una pinza esteril colocamos el disco de bilis esculina dentro del tubo que contiene la suspensin.

5. incubamos a 37C durante 4 horas. 6. realizamos la lectura. resultado. positiva. se observa ennegrecimiento del disco.

prueba de tolerancia a la sal. fundamento. los Enterococcus spp son halo tolerantes a concentraciones de cloruro de sodio al 6.5% procedimiento. 1. rotulamos un tubo que contiene caldo nutritivo con 6.5% de NaCl. 2. tomamos 3 colonias de un cultivo puro y hacer una suspensin homognea 3. incubar a 37C durante 24 horas. 4. realizamos la lectura. resultado.

positivo. turvides en el caldo por crecimiento de la bacteria. Prueba de PYR. Procedimiento.


1.

con un palillo tomamos 3 colonias de un cultivo puro, realizamos un frotis en la superficie de la lamina de 4 cuadrantes. agregamos una gota de p-dimetil-dimetil-aminocinamaldehido.

2.

3. realizamos la lectura inmediatamente. si no hay desarrollo de color se realiza la segunda lectura al minuto de haber agregado el reactivo. Resultado. positivo, desarrollo en un color rojo cereza oscuro.

Dia #3 miercoles 12/10/2011 Lemos el resultado de Streptococcus -hemoltico del grupo A en la prueba de bacitracina. Resultado: nos dio positiva ya que: hay un halo de inhibicin lo cual nos indica la sensibilidad a la bacitracina. Le dimos lectura a las pruebas bioqumicas de Pseudomona aeruginosa y Proteus mirabilis. Pseudomona aeruginosa: TSI: k/k LIA: (-) MIO: movilidad: (-), indol(+), ornitina(-) Agar OF: (+) Agar F: (+) cetrimida: (+) produccin de pigmento verdoso. catalasa: (+) formacin de burbujas inmediata. Proteus mirabilis: TSI: K/A LIA: R/A lisina desaminasa. CS: (-) MIO: movilidad: (+), indol: (-), ornitina(+) RM: (-) VP: (+) malonato: (-)

CONCLUCION. Con la realizacin de este informe de laboratorio hemos podido llevar a cabo la tcnica correcta para la toma de exudado otico y farngeo, adems hemos re aislado Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis y Streptococcus del grupo A, tambin realizamos el procedimiento correcto para las pruebas especiales para la identificacin correcta y el diagnostico de los mismos.

BIBLIOGRAFIA

1-

Los cocos Gram positivos parte II en Diagnostico Microbiolgico. Elmer W. koneman editor, Cap.12, quinta edicin.,1996. Editorial Medica Panamericana, Buenos Aires, Argentina.

2- Streptococcus spp en Microbiologa Medica de Jawetz, Melnick y Alderger., Geo F. Brooks, editor, cap.15, decima sexta edicin.( de la (vigesima perimera edicin en ingles) 1998, Editorial el Manual moderno S.A de C.V. Mxico D.F

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE NICARAGUA UNAN-MANAGUA. RECINTO UNIVERSITARIO RUBEN DARIO. FACULTAD I.P.S.

CARRERA : BIOANALISIS CLINICO.

PROF: MSC. DIANA SANCHEZ.

TRABAJO DE: MICROBIOLOGIA II AO A REPORTE DE LOS LABORATORIOS.

ELABORADO POR: JANEYRIS DEL CARMEN JIMENEZ LIRA. KEVING JAVIER LACAYO NAVARRO.

REYNA ELIZABETH JARQUIN. GEMA IZAMARA AGUILERA.