Facultad de Bioanálisis

EXPERIENCIA EDUCATIVA
Inmunología Clínica
DOCENTE
María Teresa Croda Todd
EQUIPO 1

PRÁCTICA 10 Antiestreptolisina
PROPÓSITO DE LA PRUEBA

La antiestreptolisina O (ASTO por sus siglas en inglés) es una prueba de

laboratorio que mide los anticuerpos que se producen en un individuo como
respuesta a una infección por Streptococcus pyogenes (estreptococo
betahemolítico del grupo A, EBHGA) (Shet y Kaplan 2002, Winn et al. 2008, 2010).

FUNDAMENTO

Los estreptococos del grupo A son cocos Gram positivos, catalasa negativa que
se agrupan en cadenas (Winn et al. 2008). Por muchos años se le ha atribuido a
Streptococcus pyogenes los cuadros de faringoamigdalitis bacteriana en niños y
adultos y como agente que desencadena secuelas postestreptocócicas como la
fiebre reumática y glomerolunefritis (Martin et al. 2004, Sevenic y Enoz 2007,
Sitkiewicz y Hryniewicz 2010).

En los últimos años han adquirido importancia clínica los estreptococos de los
grupos C y G, sobre todo como productores de faringoamigdalitistis bacteriana
(Lindbaek et al. 2005, Winn et al. 2008, Bramhachari et al. 2010, Little et al. 2012,
Lopardo 2013). Todos los seres humanos son igualmente susceptibles a la
infección estreptocócica, sin importar el género, la edad y la raza. Sin embargo, se
ha observado que la edad es un factor importante en la etiología microbiana de la
faringitis y amigdalitis; así se observa que en niños y adolescentes es muy
frecuente las afecciones mencionadas, aunque los virus son los agentes
etiológicos más comunes, tanto en niños como en adultos.

Los anticuerpos antiestreptolisina O (ASLO) están dirigidos frente a la

estreptolisina O, una toxina producida por la bacteria Streptococcus pyogenes
(estreptococo del grupo A). Los ASLO y los anti-DNasa B son los anticuerpos que
el sistema inmunitario del organismo produce con más frecuencia, como respuesta
a una infección por el estreptococo del grupo A. Esta prueba mide la cantidad
(título) de antiestreptolisina O en la sangre.

. INSUMOS REQUERIDOS  MATERIAL

1) Pipeta automática (10-100 μL)

2) Puntillas limpias para pipeta automática

3) Papel parafilm

4) Placa de 96 pozos

5) Tira de micropocillos

6) Jeringa

7) Papel absorbente 2023

 EQUIPO

1) Centrífuga

2) Estufa a 37°C

 REACTIVOS

1) Estreptolisina activada

2) Solución de lavado
3) Solución amortiguadora

4) Agua destilada o desionizada

5) Solución salina

 TIPO DE MUESTRA

1) Biológica (suero humano)

2) Biológica (sangre total obtenida por venopunción)

PROCEDIMIENTO

Modo de activación de la estreptolisina:

1. Se reconstituye con agua destilada al volumen indicado en la etiqueta del

frasco.

2. Para cada 5 ml de la estreptolisina reconstituida se adiciona el hidrosulfito de

sodio contenido en uno de los tubos capilares que se adjuntan.

3. Se agita por inversión hasta disolución total, para obtener su forma activa. Para
la suspensión de glóbulos rojos al 5%: 1. Centrifugar la sangre a 2000 rpm durante
5 minutos, descartar el sobrenadante y lavar el paquete de glóbulos rojos con
solución salina al 0.85%, mezclar por inversión y centrifugar nuevamente,
desechar el sobrenadante. Repetir el procedimiento 3 veces. El sobrenadante
debe ser claro. 2. Realizar un último lavado con solución amortiguadora, mezclar
por inversión y centrifugar nuevamente, desechar el sobrenadante.

4. Los glóbulos rojos se suspenden en solución amortiguadora a una

concentración final del 5%. Diluciones del suero problema: 1. Preparar una
dilución 1:10 y otra 1:60 del suero con solución amortiguadora. 2. Agregar 50 μL
de buffer en los pozos del A1 al A12, 50 μL en el pozo B11 y 75 μL en el pozo
B12. 3. De la dilución 1:10 añadir 50 μL al pozo A, mezclar y pasar 50 μL al pozo
A2, mezclar y continuar así en los pozos A3, A5, A7, A9, A11 y A12, desechando
de este 50 μL. 2023 4. De la dilución 1:60 agregar 50 μL al pozo A4, mezclar y
pasar 50 μL al pozo A6, mezclar y continuar así en los pozos A8 y A10
desechando de este 50 μL.

5. Agregar 25 μL de estreptolisina activada a los pozos A1 a A12 y B11. Mezclar.

6. Cubrir con papel parafilm.

7. Incubar 15 minutos a 37°C. 8. Retirar la cubierta y agregar 25 μL de la

suspensión de glóbulos rojos al 5% a todos los pozos. Mezclar, cubrir nuevamente
e incubar 45 minutos a 37°C, mezclando y revisando cada 15 minutos.

INTERVALOS DE REFERENCIA/ INTERPRETACIÓN

Rango normal (Unidades Todd) ≤ 240 (para nuestra población) El título de

anticuerpos contra estreptolisina se expresa en unidades Todd. El título de
antiestreptolisina corresponderá al último pozo de la máxima dilución capaz de
inhibir totalmente la hemólisis. Los títulos (Unidades Todd) serán: Pozo 1 2 3 4 5 6
7 8 9 10 11 12 Unidades Todd 20 40 80 120 160 240 320 480 640 960 1280 2560
Pozo B11: Control de estreptolisina. Pozo B12: Control de eritrocitos.

INFORME DE RESULTADOS

El último pozo donde se inhibió totalmente la hemólisis fue el A5, el título en

Unidades Todd fue de 160. El título del paciente se encuentra inferior al límite que
es 240 Unidades Todd, por lo que se considera en un rango normal.

MANEJO DE RESIDUOS QUÍMICOS Y/O BIOLÓGICOS INFECCIOSOS

En esta práctica se realizó venopunción por lo que tanto la aguja como el tubo
vacutainer fueron desechados de la siguiente manera: Los pozos usados en la
práctica, así como las puntillas de pipetas automáticas fueron desechadas en un
contenedor con cloro.

FUENTES CONSULTADAS

Gutiérrez, C. N., Chacón, M. Z., Pérez-Ybarra, L. M., Guzmán, N. A., & Luis-León,
J. J. (2015). Título de Antiestreptolisina o y frecuencia de estreptococos
betahemolíticos en estudiantes de 10 a 15 años del municipio Francisco Linares
Alcántara, estado Aragua, Venezuela. Saber (Cumana, Venezuela), 27(3), 414–
421. 2023 https://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1315-
01622015000300007

Título de antiestreptolisina O. (s/f). Medlineplus.gov. Recuperado el 26 de

noviembre de 2023, de https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/003522.htm
Antiestreptolisina O (ASLO). (s/f). Labtestsonline.es. Recuperado el 26 de
noviembre de 2023, de https://www.labtestsonline.es/tests/antiestreptolisina-o