UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

NÚMERO DE PRÁCTICA: IQ.05.02 – 07

NOMBRE DE LA PRÁCTICA: Análisis de bacterias coliformes en el agua.

1. DATOS INFORMATIVOS.
INTEGRANTES:

 Árevalo Carpio Daniel Vladimir  Llivipuma Zhuzhingo Ginger

 Alonso Blacio César David Tatiana

 Aguilar Tibanta Geovanny Joel  Matamoros Chuchuca Samantha

 Blacio Paladines Diego Andres Lizbeth

 Castillo Mendoza Judith Mabel  Perez Carvallo Carlos Issack

 Castillo Jiménez Melkin Francisco  Pico Sisalima AnthonyAlexander

 Celi Córdova Juley Elizabeth  Ordinola Agurto Kevin Mauricio

 Choez Tobo Cristopher Manuel  Ramírez Bravo Jonathan David

 Díaz Barrezueta Jhonny Alexander  Tapia Galarza Eliana Milagros

DOCENTE: Ing. Juan Gabriel Sánchez Sánchez, Mgs.

CARRERA: Ingeniería Química

ASIGNATURA: Microbiología general

CICLO/NIVEL: Quinto semestre “A” Diurna

FECHA: 22 de febrero del 2023

1. FUNDAMENTACIÓN.

Las bacterias del grupo coliformes se utilizan desde el inicio del siglo XX como
indicadoras de contaminación fecal. Fueron definidas siempre como bastoncillos
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gram negativos, no formadoras de esporas, que pueden crecer en presencia de
sales biliares o de otros agentes tensoactivos y que fermentan la lactosa a 37°C,
con producción de ácido (ácidos orgánicos y aldehídos) y gas en 24 horas (Galvín,
2014).
Los coliformes totales son clasificados como bacilos gram negativos aerobios y
anaerobios facultativos no esporulados que fermentan la lactosa con producción de
ácido y gas después de incubación durante 24-48 horas a 35°C. Incluye los géneros
Citrobacter spp., Klebsiella spp., Enterobacter spp., en este último se encuentra la
E. coli, exclusiva de heces animales homeotérmicos.
Los coliformes fecales constituyen un subgrupo de los coliformes totales, y se
diferencian de los anteriores por ser tolerantes a temperaturas más altas, creciendo
a 44.5°C, (Galvín, 2014). Se denominan termotolerantes por su habilidad de
soportar temperaturas más elevadas.
LAS BACTERIAS COLIFORMES.
Los coliformes reagrupan ciertas especies bacterianas pertenecientes a la familia
Enterobacteriaceae, de morfología bacilar, Gram negativas, aerobias o anaerobias
facultativas, oxidasa negativa, no esporuladas y que fermentan la lactosa con
producción de ácido a 37ºC en 24-48 horas.
Del grupo coliformes forman parte varios géneros: Escherichia, Enterobacter,
Klebsiella, Citrobacter.
 Escherichia coli produce dolor abdominal, diarrea, náuseas, vómitos y
fiebre.
 Klebsiella produce enfermedades respiratorias.
 Citrobacter produce alteraciones a nivel del colon y a nivel intestinal.

La puesta en práctica de la bioseguridad personal antes, durante y después de la

práctica en el laboratorio de microbiología y parasitología dependen en gran medida
de la aplicación de los conocimientos adquiridos por los alumnos en clases teóricas,
se ha considerado que estas se adapten a los recursos disponibles en el laboratorio,
a los procedimientos de trabajo y que sean aplicables al nivel de conocimiento y
formación profesional. Manual de Bioseguridad en laboratorio (Fontalvo, 2020).

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2. RESULTADOS DE APRENDIZAJE.

Describe y comprende las técnicas microbiológicas que se aplican al control de

calidad del agua, mediante microscopía para garantizar la calidad de la misma.

3. OBJETIVOS ESPECÍFICOS.

 Identificar la presencia o ausencia de bacterias coliformes, a través del

análisis de unas muestras de agua de la ciudad de Machala para establecer
su calidad.
 Aplicar los conocimientos de microbiología, mediante el desarrollo de la
técnica de laboratorio para detectar presencia de contaminación por
coliformes en muestras de agua.

4. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS.

Materiales Equipos Reactivos u otros

 6 tubos de ensayo con  Caldo de peptone

 Baño María
tapa
 Incubadora
 2 tubos de dilución  Caldo Lactosado con
 Mezcladora
 Gradillas. verde brillante y bilis
tubo ensayo
 Pipetas estériles de 10ml al 2 %.
(1), 5ml (2) y 1 ml. (6)
 Campanas de Durham (3)  Agua destilada
 Pera
 Papel absorbente

5. PROCEDIMIENTO.
El director del laboratorio y el profesor de la asignatura son los responsables de
asegurar que se realicen de modo oportuno las evaluaciones del riesgo más
apropiadas y de colaborar estrechamente con la seguridad, con el finde velar por
que se disponga del equipo y los medios apropiados para el trabajo practico que
está previsto (Calvo, 2014).
Preparación de las diluciones caldo peptona.

1. Agitar bien la muestra de manera que se homogenice en su totalidad.

2. Con la ayuda de una pipeta tomar una alícuota de 10ml y poner en un vaso
de precipitación o tubo de ensayo. (Solución A).
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 3. Con la ayuda de una pipeta de 1 ml tomar de la solución A 1ml y depositar
en el tubo de ensayo a llevar a cabo el factor de dilución (1:10). Dilución
1/10: 1ml de la solución A + 9 ml de caldo de peptona. (solución B)
aseguramos con la tapa rosca del tubo.
4. Con la ayuda de una pipeta de 1 ml tomar de la solución B 1ml y depositar
en el tubo de ensayo a llevar a cabo el factor de dilución (1:100). Dilución

1/100: 1ml de la solución B + 9 ml de caldo de peptona. (solución C)

aseguramos con la tapa rosca del tubo.
5. Con la ayuda de una pipeta de 1 ml tomar de la solución C 1ml y depositar
en el tubo de ensayo a llevar a cabo el factor de dilución (1:1000). Dilución
1/1000: 1ml de la solución C + 9 ml de caldo de peptona. (solución D)
aseguramos con la tapa rosca del tubo.
Preparación diluciones lactosa bilis verde brillante.

1. Con la ayuda del agitador de tubos de ensayo homogenizar la solución B, C

y D en su totalidad.
2. Con la ayuda de una pipeta de 1 ml tomar de la solución B 1ml y depositar
en el tubo de ensayo a inocular, donde adicionamos 9 ml de lactosa bilis
verde brillante con la ayuda de una pipeta de 10ml (se le añade un tubo de
Durham invertido), y aseguramos con la tapa rosca del tubo.
3. Con la ayuda de una pipeta de 1 ml tomar de la solución C 1ml y depositar
en el tubo de ensayo a inocular, donde adicionamos 9 ml de lactosa bilis
verde brillante con la ayuda de una pipeta de 10ml (se le añade un tubo de
Durham invertido), y aseguramos con la tapa rosca del tubo.
4. Con la ayuda de una pipeta de 1 ml tomar de la solución D 1ml y depositar
en el tubo de ensayo a inocular, donde adicionamos 9 ml de lactosa bilis
verde brillante con la ayuda de una pipeta de 10ml (se le añade un tubo de
Durham invertido), y aseguramos con la tapa rosca del tubo.
5. Depositar en una gradilla los tubos inoculados y llevar a Incubar a 37ºC (+/-
1ºC) durante 24 ó 48h.
Lectura e interpretación.
A. Si se observa crecimiento bacteriano con producción de gas entre las 24
a 48 horas o antes, la presencia de bacterias coliformes fecales se
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 considerará positiva o confirmada.

B. Si no se observa crecimiento bacteriano o producción de gas entre las

24 a 48 horas, la presencia de bacterias coliformes fecales se
considerará negativa o ausencia de bacterias coliformes.
6. RESULTADOS OBTENIDOS.

Antes de realizar la práctica

1. Pedir de manera anticipada los materiales a la encargada del laboratorio de

Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias Químicas y de la salud,

perteneciente a la Universidad Técnica de Machala.

2. Contar con todas las medidas de bioseguridad (guantes, mascarilla, bata, zapatos

cerrados, la cofia y las gafas protectoras)

3. Lavar los materiales con mucha precaución.

Revisión de la tabla Número Más Probable

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 Cuadro de resultados

MUESTRA 1:10 SI NO

TUBO 1 X

TUBO 2 X

TUBO 3 -

MUESTRA 1:100 SI NO

TUBO 1 X

TUBO 2 X

TUBO 3 -

Muestra 1:1000 SI NO

TUBO 1 X

TUBO 2 -

TUBO 3 -

4. Se observa que en los 2 tubos de ensayo con dilución 1:10 son positivos, los 2

tubos de ensayo con dilución 1:100 son positivos, mientras que el tubo de ensayo de

dilución 1:1000 es negativo.

5. Basándonos en la Tabla para 3 tubos tomando como referencia 2-2-0, podemos

establecer que el NMP correspondiente es de 21 NMP/ml. Tomando en cuenta una

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confianza del 95% el intervalo de error del resultado sería de entre 8NMP/ml a

63NMP/ml.

6. Suponiendo un ensayo de 3 tubos se toma como referencia 3-3-0, podemos

establecer que el NMP correspondiente es de 200 NMP/ml. Tomando en cuenta una

confianza del 95% el intervalo de error del resultado sería de entre 100NMP/ml a

1400NMP/ml.

Lectura e interpretación.

A. Si se observa crecimiento bacteriano con producción de gas en un tiempo

48 horas desde que se realizó la práctica en el laboratorio para lo cual se

verifica o confirma la presencia de bacterias coliformes fecales.

B. Se considera como negativa o ausencia de coliformes en el tubo de ensayo

1:1000.

7. CONCLUSIONES

En el Laboratorio de Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias

Químicas y de la Salud de la Universidad Técnica de Machala se realizó con éxito la

correspondiente práctica. Acotando se dio como positiva o confirmada la presencia de

bacterias coliformes fecales, ya que se observó el crecimiento de microorganismos en

los tubos de ensayos 1:10 y 1:100, a excepción del tubo de ensayo 1:1000 en el cual

no se verificó colonias pero si un pequeño precipitado.

Con ayuda de la tabla NMP para tubos 2-2-0 se pudo establecer el NMP

correspondiente es de 200 NMP/ml, teniendo en cuenta la confianza del 95% en el

intervalo del error lo cual es 100NMP/ml a 1400NMP/ml.

7
Con ayuda de la tabla NMP para tubos 3-3-0 se pudo establecer el NMP

correspondiente es de 21 NMP/ml, teniendo en cuenta la confianza del 95% en el

intervalo del error lo cual es 8NMP/ml a 63NMP/ml.

De igual manera se pudo distribuir la cantidad de sustancia de forma adecuada en los

tubos de ensayos cada una etiquetadas correctamente, trabajando de la mejor

manera con los materiales y equipos dentro del laboratorio.

8. RECOMENDACIONES

 Revisar que todos los materiales que se vayan a utilizar se encuentren en

buen estado.

 Los materiales además deben estar previamente esterilizados.

 Realizar la práctica con las debidas precauciones.

 Es conveniente usar una bata de laboratorio para proteger la ropa de

manchas y salpicaduras. Los zapatos deben ser cerrados (no usar

sandalias) y preferentemente con suela de goma para disminuir

eventuales resbalones.

 Las personas que usan el cabello largo deberán llevarlo recogido. No usar

cadenitas, colgantes, collares, pulseras, pañuelos o bufandas que puedan

engancharse a los elementos de trabajo, produciendo vuelcos y

accidentes.

 Queda terminantemente prohibido comer o beber en el laboratorio o

durante la realización de los experimentos.

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 9. BIBLIOGRAFÍA.

 Marín Galvín, R. (2014). Microbiología de las aguas. Ediciones Díaz de

Santos.https://elibronet.basesdedatos.utmachala.edu.ec/es/ereader/utmach

ala/62909

 Luna Fontalvo, J. A. (2020). Métodos analíticos de microbiología general y

aplicada. Editorial Unimagdalena.

https://elibronet.basesdedatos.utmachala.edu.ec/es/ereader/utmachala/128

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 Calvo de Pablo, P. y Martín Cereceda, M. (2014). Microbiología: cuestiones

y casos prácticos resueltos. Pearson Educación. https://elibro-

net.basesdedatos.utmachala.edu.ec/es/lc/utmachala/titulos/57163

 Silverio Calderón, C. (2015) Microbiología general para Investigaciones de

laboratorio. Machala, Ecuador: Universidad Técnica de Machala.

http://repositorio.utmachala.edu.ec/handle/48000/6642

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 ANEXOS

Ilustración 1. Pesar la muestra Ilustración 2. Preparación de Ilustración 3. Etiquetar los tubos

la muestra de ensayo.

Ilustración 4. Agregar la muestra Ilustración 5. Homogenizar Ilustración 6. Esterilizar la pipeta

en el tubo de ensayo la muestra en el mechero

Ilustración 8. Resultados obtenidos 10

Ilustración 7. Colocar los tubos de ensayo
después de la incubación
en la incubadora.