ANTISTREPTOLISINA O ( ASTO-ASO-ASLO )

METODO: Aglutinación por látex

Inhibición de la hemolisis
Turbidemetria.
Nefelometria.

FUNDAMENTO DE AGLUTINACION POR LATEX.

La prueba se basa en una reacción inmunoquimica de Aglutinación entre los

Anticuerpos antistreptolisina o presentes en el suero del paciente y el Antígeno
Streptolisina o fijado a las partículas de látex.

MUESTRA.

Suero fresco o conservados en refrigeración ( 2ºC-8ºC) máximo por 8dias o

congelados (- 25ºC) por 3 meses.

PROCEDIMIENTO
TECNICA CUALITATIVA
 Dejar atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente.
 Depositar 50 ul (1 gota) de la muestra a ensayar y una gota de cada control
positivo- negativo en círculos separados de la tarjeta visualizadora.
 Homogeneizar el antígeno con suavidad antes del ensayo. Agregar a cada circulo
una gota de Antígeno ASO-Latex próxima a la muestra a analizar.
 Mezclar con ayuda de un palillo desechable. Procure extender la mezcla por toda
la superficie interior del circulo. Emplee palillos diferentes para cada muestra.
 Agitar a 100 r.p.m. durante dos minutos.

TECNICA SEMICUANTITATIVA
La realizamos cuando cualitativamente nos da una reacción de aglutinación y
queremos saber la tasa aproximada de antistreptolisina o presente en el suero.
También recurrimos a las titulaciones o diluciones para evitar los fenómenos de
prozona o postzona.

1:2 1:4 1:8

50 ul muestra + 50 ul de la 50 ul mezcla
50 ul solución mezcla anterior + anterior +
salina 0.9% MEZCLAR 50 ul solución MEZCLAR 50 ul solución
salina 0.9% salina 0.9%

y así sucesivamente.

Una vez realizadas las diluciones necesarias se agrega una gota del antígeno a cada
circulo .
Mezclar y Agitar a 100 r.p.m. durante 2 minutos.
LECTURA E INTERPRETACION CLINICA
Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación, dentro del
tiempo indicado. La presencia de aglutinación indica un contenido de antistreptolisina
o en el suero del paciente igual o superior a 200 Ul/ml .

En sueros diluidos, se define el titulo como la ultima dilución mayor que da un

resultado positivo.La tasa aproximada de antistreptolisina o presente en la muestra
puede obtenerse multiplicando el limite de sensibilidad (200 UI/ml) por el titulo
obtenido.
Un 95% de la población adulta sana posee títulos de asto igual o menor a 200 UI/ml
siendo este valor superior en poblaciones infantiles sanas en edad escolar (hasta 300
UI/ml).

LIMITACIONES DEL METODO.

FALSOS POSITIVOS.
 Retrasos en la lectura
 Muestras lipemicas hemolizadas.
 Contaminación bacteriana.
 Artritis reumatoidea
 Amigdalitis
 Diversas infecciones streptococcicas
 Portadores sanos

FALSOS NEGATIVOS.
 Infecciones tempranas
 Niños en edad entre 6 meses y 2 años
 La sensibilidad del ensayo disminuye a bajas temperaturas.
 Congelación del antígeno ASO-Latex
 Congelación y descongelación sucesiva de muestras a analizar
 Fenómeno de prozona o postzona.

APLICACION CLINICA
La Streptolisina o es una exotoxina elaborada por el streptococcus beta hemoliticum
del grupo A (Pyogenes) C,G.
Los streptococcus del grupo A producen una variedad de procesos que se pueden
clasificar así:

CUADRO SUPURATIVOS INESPECIFICOS.

Infecciones localizadas
Faringitis.
En piel: Impétigo, piodermitis
En mucosas: anginas, sinusitis, abscesos.
Visceral: meningitis, endocarditis (al diseminarse por vía linfática o sanguínea)

Infecciones generalizadas
Sepsis streptococcicas. A partir de heridas y endometrio
CUADRO SUPURATIVOS ESPECIFICOS.
Erisipela.
Escarlatina.

CUADRO NO SUPURATIVOS DE TIPO INMUNOLOGICO.

Son las enfermedades post-streptococcicas
Fiebre reumática. Aparece después de una Faringitis o angina.
Glomerulonefritis Aparece después de una Faringitis e infecciones en piel.

FUNDAMENTO DEL METODO DE INHIBICION DE LA HEMOLISIS.

Se basa en que los anticuerpos antistreptolisina o contenidos en el suero del paciente

al neutralizar la hemolisina ( Streptolisina o ) inhibirán la hemolisis de los glóbulos
rojos, a tanto mayor titulo o dilucción , mayor será la cantidad de anticuerpos. El titulo
se expresa en unidades TODD y se considera que los sueros normales tienen un
titulo máximo entre 120-140 unidades TODD.

FUNDAMENTO DEL METODO POR TURBIDIMETRIA.

El ensayo inmunoturbidimetrico se basa en la reacción que ocurre entre la

Streptolisina o del látex (antígeno) y los anticuerpos contra la Streptolisina o presentes
en el suero del paciente , formando un complejo Antigeno-Anticuerpo, que se mide
turbidimetricamente tras la aglutinación, es decir determinando la cantidad de luz
bloqueada por las partículas cuando la probeta es atravesada por un haz de luz.

La adición de un tampón con Polietilenglicol (PEG), permite alcanzar un punto final

rápido, aumenta la sensibilidad, reduce el riesgo a medir falsos negativos en muestras
con exceso de anticuerpos.

FUNDAMENTO DE NEFELOMETRIA.

El ensayo inmunonefelometrico se basa en la reacción que ocurre entre la

Streptolisina o del látex (antígeno) y los anticuerpos contra la Streptolisina o presentes
en el suero del paciente , formando un complejo Antigeno-Anticuerpo, que se mide
nefelometricamente tras la aglutinación, cuando la luz es dispersada por las
pequeñas partículas en ángulo recto respecto al haz de luz, incidente sobre la
probeta.
 FACTOR REUMATOIDEO ( R.A TEST, A.R TEST, R.F TEST, F.R TEST).

OBJETIVO DEL APRENDIZAJE.

Definir los conceptos básicos, fundamentales y relevantes en la determinación del

factor reumatoideo.

Conocer los diferentes métodos, que existen en un laboratorio para determinar factor
reumatoideo y en que se fundamentan cada uno de ellos.

Procesar el examen inmunológico R.A test, teniendo claro y preciso los conceptos
básicos que lo determinan.

Interpretar de manera analítica y reflexiva los resultados obtenidos y relacionarlos

con la clínica del paciente.

META. Al cumplir los objetivos, estamos en capacidad de apoyo al diagnostico de las

diferentes patologías, logrando así mejorar la calidad de vida de los pacientes y por
consiguiente su entorno psico-social y económico, contribuyendo con su desarrollo
humano.

.
 FACTOR REUMATOIDEO ( R.A TEST, A.R TEST, R.F TEST, F.R TEST).

GENERALIDADES.

El Factor reumatoideo es un anticuerpo tipo Inmunoglobulina M en su mayor

proporción, también puede se Ig G, Ig A, que elabora el sistema inmunológico, contra
los antígenos situados en la fracción constante (FC) de una molécula de
Inmunoglobulina G alterada.

Producción de Factor reumatoideo. Se puede producir por:

1. Al reaccionar la Ig G con un antígeno (virus Epstain y Barr o proteína A
staphylococcica ), al ocurrir esto, hay alteración de la molécula de Ig G , haciendo
que se expongan sitios antigenicos ocultos, de tal manera que el sistema inmune
lo considera como extraño y desarrolla anticuerpos contra ellos (FR).
2. Catabolismo incompleto de la molécula de Ig G .En los cuales estos restos no son
reconocidos como propio y el sistema inmune produce anticuerpos.
3. Interacción del Factor reumatoideo con otros antígenos tales como: DNA
Desnaturalizado, Lipopolisacaridos, grupos nitrofenilos.
4. La luz ultravioleta, altera la Ig G y se liberan radicales libres de aminoácidos,
cisteina, triptofano, tirosina y lisina.
5. Pacientes con Artritis reumatoidea, Enfermedad inflamatoria del colon y personas
sanas durante su vejez presentan oligosacaridos agalactosilados, pegados a la
membrana de la Ig G , lo que hace que se produzca la formación de anticuerpos
(FR).

METODO: Aglutinación por látex

Turbidemetria.
Nefelometria.

FUNDAMENTO DE AGLUTINACION POR LATEX.

Se basa en la reacción de aglutinación entre el factor reumatoide de la muestra
del paciente y la Inmunoglobulina humana G (Ig G), que cubre las partículas
de látex de poliestireno. Una reacción positiva es indicada por una marcada y
visible aglutinación macroscopica de las partículas de látex en el área de la
lamina.

MUESTRA.

Suero fresco o conservados en refrigeración ( 2ºC-8ºC) máximo 48 horas o

congelados (- 20ºC) por 4 semanas.
PROCEDIMIENTO

TECNICA CUALITATIVA
 Dejar atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente.
 Identifique correctamente su muestra a procesar.
 Depositar 50 ul (1 gota) de la muestra a ensayar y una gota de cada control
positivo y negativo en círculos separados de la tarjeta visualizadora.

 Homogeneizar el reactivo con suavidad antes del ensayo. Agregar a cada círculo
una gota de RF-Latex próxima a la muestra a analizar.
 Mezclar con ayuda de un palillo desechable. Procure extender la mezcla por toda
la superficie interior del círculo. Emplee palillos diferentes para cada muestra.
 Agitar a 100 r.p.m. o manualmente durante dos minutos.

TECNICA SEMICUANTITATIVA
La realizamos cuando cualitativamente nos da una reacción de aglutinación y
queremos saber la tasa aproximada de Factor reumatoideo presente en el suero.
También recurrimos a las titulaciones o diluciones para evitar los fenómenos de
prozona o postzona.

1:2 1:4 1:8

50 ul muestra + 50 ul de la 50 ul mezcla
50 ul solución mezcla anterior + anterior +
salina 0.9% MEZCLAR 50 ul solución MEZCLAR 50 ul solución
salina 0.9% salina 0.9%

Una vez realizadas las diluciones se agrega una gota del RF-Latex a cada circulo .
Mezclar y Agitar a 100 r.p.m. o manualmente durante 2 minutos.

LECTURA

Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación, dentro del

tiempo indicado. La presencia de aglutinación indica un contenido de Factor
reumatoideo en el suero del paciente. Que dependiendo de la sensibilidad de la
técnica utilizada,( 10 o 30 UI/ml dependiendo del reactivo) así serán las UI/ml de
factor reumatoideo.
La tasa aproximada de Factor reumatoideo se obtiene de multiplicar el valor de
sensibilidad por el factor de dilución ultimo o mayor donde ocurrió aglutinación.
Nota: Realice ejemplos.
LIMITACIONES DEL METODO.

o FALSOS POSITIVOS.

Errores técnicos

 Retrasos en la lectura pueden ocasionar una sobrevaloracion de la tasa de FR

 Muestras lipemicas y hemolizadas.
 Contaminación bacteriana

Causas Intrínsecas

 Personas de edad avanzada

 Lupus Eritematoso.
 Portadores sanos ( 3-5% )
 Poliartritis nudosa.
 Mononucleosis infecciosa.
 Hepatitis.
 Sífilis.
 Síndrome de Sjogren.
 Tuberculosis.
 Lepra.
 Rubéola.
 Citomegalovirus.
 HIV.
 Cáncer.

FALSOS NEGATIVOS.

 Cuando el factor reumatoideo (en su mayoría Ig M) es de naturaleza diferente (Ig

G, A, ) a la detectada en el método que es Ig M.
 Niveles no detectados por el método.
 Muestras y reactivos a temperaturas bajas.
 Congelación de reactivo de RF-Latex.
 Congelación y descongelación de muestra a procesar.
 Fenómenos de Prozona y/o Postzona.

INTERPRETACION CLINICA.
Un resultado negativo indica que en la muestra no existe el factor reumatoideo o
concentraciones por debajo de la sensibilidad de la técnica utilizada.
Un resultado positivo indica que esta presente el factor reumatoideo y debe
cuantificarse.
Un 80% de los pacientes con Artritis reumatoidea son seropositivos.
Esta prueba es positiva frecuentemente en los procesos activos a largo termino, que
en las artritis reumatoidea menos activas y en las primeras etapas, solo un 30% es
seropositivos al comienzo de la enfermedad con títulos 1:20, 1:80 y aumentando
dentro de 12-18 meses. Por eso se dice que hay correlación entre la gravedad de la
enfermedad y la presencia de factor reumatoideo
Un 20% de los pacientes con Artritis reumatoidea seronegativos puede deberse a
factor reumatoideo tipo Ig G o Ig A , puesto que el que se analiza con mayor
frecuencia es el tipo Ig M.
Solo un 10% de las Artritis reumatoidea juveniles son seropositivas.

FUNDAMENTO DEL METODO POR TURBIDIMETRIA.

El ensayo inmunoturbidimetrico se basa en la reacción que ocurre entre el Factor

reumatoideo de la muestra del paciente y la Inmunoglobulina G humana que cubre las
partículas de látex de poliestireno, formando un complejo Antigeno-Anticuerpo, que se
mide turbidimetricamente tras la aglutinación, es decir determinando la cantidad de luz
bloqueada por las partículas cuando la probeta es atravesada por un haz de luz.

La adición de un tampón con Polietilenglicol (PEG), permite alcanzar un punto final

rápido, aumenta la sensibilidad, reduce el riesgo a medir falsos negativos en muestras
con exceso de anticuerpos.

FUNDAMENTO DE NEFELOMETRIA.

El ensayo inmunonefelometrico se basa en la reacción que ocurre entre el Factor

reumatoideo de la muestra del paciente y la Inmunoglobulina G humana que cubre las
partículas de látex de poliestireno, formando un complejo Antigeno-Anticuerpo, que se
mide nefelometricamente tras la aglutinación, cuando la luz es dispersada por las
pequeñas partículas en ángulo recto respecto al haz de luz, incidente sobre la
probeta.