MANUAL DE

PRÁCTICAS
Inmunología Clínica
nrc 45051
Maestra: María Teresa Troda Crodd

POR :
CAMPOS GALICIA INGRID AIME
DIAZ ANTONIO JESUS
MONTEJANO PELAYO KELLY SHABITAY
OLIVO AGUILAR EMMANUEL
 Practica 1:
Práctica No.1
“Reacciones febriles”
Método: Aglutinación directa
USO CLÍNICO
El diagnóstico de enfermedades febriles puede establecerse bien sea por el aislamiento del
microorganismo en sangre, orina o heces o por la demostración del título de anticuerpos
específicos, somáticos (O) y flagelares (H) en el suero del paciente. La determinación de
estos anticuerpos forma las bases para el ensayo de Widal que establece que altos niveles
de anticuerpos O y H superiores a 1/100 en suero, es indicativo de infección por estos
microorganismos.
A pesar de que el método definitivo para establecer la etiología de estas enfermedades es a
través del aislamiento del agente patógeno, esto resulta difícil debido a que la investigación
se realiza frecuentemente en períodos tardíos de la enfermedad y luego de una terapia
antibiótica. Por este motivo es de gran importancia diagnóstica la detección de los anticuerpos
específicos producidos en el curso de cada una de estas patologías. Una prueba aislada es
de escaso valor, siendo necesarias 2 o más pruebas seriadas a fin de poner en evidencia
cambios en el título de anticuerpos.

FUNDAMENTO
Las reacciones febriles son una técnica de aglutinación en porta y tubo para la detección y
semicuantificación de anticuerpos anti-Salmonella, Brucella y Proteus en suero humano. Los
reactivos, suspensiones bacterianas, coloreadas y estandarizadas, aglutinan en presencia
del anticuerpo homologo correspondiente en las muestras ensayadas.

MATERIAL
1. Aplicadores. Rotador mecánico (opcional).
2. Control negativo. Suero sanguíneo sin aditivos ni
3. Control positivo. hemólisis. No inactivar ni calentar Pipetas para suero. ya que los
anticuerpos son
4. Placa de vidrio con concavidades termolábiles. o anillos.

REACTIVOS
Antígenos Febriles Salmonella: suspensión en solución salina con conservantes
apropiados, conteniendo los siguientes antígenos bacterianos: - Antígenos Paratyphoid A
(Salmonella, antígeno flagelar a).

− Antígenos Paratyphoid B (Salmonella, antígeno flagelar b).

− Antígenos Typhoid H (Salmonella, antígeno flagelar d).
− Antígenos Typhoid O (Salmonella, antígeno somático D).
Antígenos Febriles Brucella: suspensión de antígenos bacterianos (Brucella abortus, cepa
1119-3) en solución fisiológica con conservantes apropiados. La concentración celular de los
antígenos se encuentra entre el 4 y el 6%. Las bacterias utilizadas se encuentran en fase lisa.

Antígenos Febriles Controles:

− Control Positivo: dilución de suero humano inactivado positivo.

− Control Negativo: dilución de suero humano negativo.

PROCEDIMIENTO
1. Rotular cada círculo de la placa con el antígeno correspondiente y colocar 20 μL de suero e n
cada una.
2. Añadir 1 gota del antígeno correspondiente.
3. Mezclar con ayuda de un aplicador, procurando extender la mezcla en toda la superficie del
círculo. Usar aplicadores separados para cada prueba.
4. Colocar la placa en un rotador mecánico a 80-100 rpm durante 1 minuto.
5. Examinar macroscópicamente con ayuda de una buena fuente de luz indirecta contra fondo
oscuro si presenta aglutinación.
Si presenta aglutinación, repetir el procedimiento con 10 μL de suero y añadir el antígeno
correspondiente

Suero Ag Título Dilución 1:8 con S.S.

20 μL 1 gota 1:80 Suero Ag Título
10 μL 1 gota 1:160 20 μL 1 gota 1:640
5 μL 1 gota 1:320 10 μL 1 gota 1:1280
5 μL 1 gota 1:2560

INTERPRETACIÓN
POSITIVO: El grado de aglutinación es registrado en la forma siguiente:
++++ +++ ++ + +/-
25% de los <25% de los
100% de los 75% de los 50% de los organismos son organismos
organismos son organismos son organismos son aglutinados son
aglutinados aglutinados aglutinados
aglutinados

Generalmente títulos de 1:40 o 1:80 son sospechosos de enfermedad. Sólo títulos mayores
de 1:80 pueden considerarse probatorios de diagnóstico de enfermedad cuando estén
acompañados de la sintomatología clínica. Títulos mayores de 1:320, son concluyentes.
Títulos de Salmonellas: Títulos de Brucella Títulos de Proteus
≥1:80: Ag somático ≥1:80 ≥1:160
 ≥1:160: Ag flagelar

NEGATIVO: No se observó aglutinación.

INFORME DE RESULTADOS
Prueba Resultado
Ausencia de
Tífico “O” aglutinación
Ausencia de
Tífico “H” aglutinación
Ausencia de
Paratífico A aglutinación
Ausencia de
Paratífico B aglutinación
Ausencia de
Brucella aglutinación
Ausencia de
Proteus OX19 aglutinación

Debido a que los resultados obtenidos fueron negativos, no se continuó con títulos más
pequeños para la prueba.

MANEJO DE RESIDUOS

1. Separar los residuos generados durante la práctica en diferentes categorías, como

materiales biológicos, muestras de sangre, materiales punzocortantes y materiales no
biológicos.

2. Asegurarse de utilizar contenedores de residuos designados para cada categoría, siempre

usando recipientes resistentes, rígidos y a prueba de fugas para desechar los residuos
biológicos y punzocortantes.

3. Antes de desechar los residuos biológicos, asegurarse de desactivarlos adecuadamente con

un desinfectante apropiado, comúnmente se utiliza cloro para la desinfección de estos,
como las muestras sanguíneas. Esto ayudará a reducir el riesgo de contaminación y
propagación de enfermedades.

4. Es importante etiquetar adecuadamente los contenedores utilizados para residuos,

haciendo uso de la simbología de color adecuada.

FUENTES
Antígenos Febriles. (2000). Wiener Lab.
https://access.wienerlab.com/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/anti
genos_febriles_sp. pdf

Antígenos Febriles. (2020, abril). Grupo Mexlab.

https://grupomexlab.com/wpcontent/uploads/2020/12/4001221-FEBRILES.pdf

Determinación cualitativa de anticuerpos febriles IVD. (2016, 9 junio). Spinreact.

https://spinreact.com.mx/public/instructivo/SEROLOGIA%20Y%20SEROLOGIA%2
0FEBRIL/1205010.C%20KIT%20DE%20FEBRILES.pdf

Práctica No.2
“Rosa de Bengala”
Método: Aglutinación directa
USO CLÍNICO
El diagnóstico de la brucelosis puede establecerse bien sea por el aislamiento de del
microorganismo en sangre o heces, o por la demostración de la presencia de anticuerpos
específicos en el suero del paciente. El reactivo, debido a su formulación en un tampón de
pH ácido, es capaz de reaccionar con anticuerpos IgG o IgM, por lo que es muy útil para el
diagnóstico de individuos en fase crónica de la enfermedad, los cuales presentan un nivel
elevado de anticuerpos IgG difícilmente detectables por el método tradicional de aglutinación
en tubo (Wright).

FUNDAMENTO
El Rosa de Bengala es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y
semicuantitativa de anticuerpos anti-Brucela en suero humano. La suspensión bacteriana y
coloreada, es aglutinada por anticuerpos IgG o IgM presentes en el suero del paciente.

MATERIALES
Aplicadores. Rotador mecánico (opcional).
Pipetas para suero. Suero sanguíneo sin aditivos ni
Placa de vidrio con concavidades o anillos. hemólisis. No inactivar ni
calentar ya que los anticuerpos
son termolábiles.

REACTIVOS

Suspensión de Brucella abortus cepa S99, en Tampón Lactato

Rosa de Bengala
1mol/L, fenol 5g/L, Rosa Bengala, pH 3.6.

Control + Tapón rojo Suero animal, con un contenido de anticuerpos antiBrucella ≥ 50

UI/mL. Conservante.
 Control –
Tapón azul Suero animal. Conservante.

PROCEDIMIENTO
1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo
disminuye a temperaturas bajas.
2. Adicionar 30 μL de suero en un círculo de la placa y una gota de cada uno de los controles
Positivo y Negativo, sobre círculos distintos.
3. Colocar 30 μL del reactivo en los mismos círculos.
4. Mezclar con ayuda de un aplicador, procurando extender la mezcla en toda la superficie del
círculo. Usar aplicadores separados para cada prueba.
5. Colocar la placa en un rotador mecánico a 80-100 rpm durante 4 minutos. El exceso de
tiempo de agitación puede originar la aparición de falsos positivos
6. Examinar macroscópicamente con ayuda de una buena fuente de luz indirecta contra fondo
oscuro si presenta aglutinación.

INTERPRETACIÓN
Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente
después de retirar la placa del agitador.
POSITIVO: La presencia de aglutinación indica una concentración de anticuerpos
antiBrucella igual o superior a 25 UI/mL. La concentración aproximada de anticuerpos
antiBrucella en la muestra del paciente se obtiene de la siguiente manera:
25 x Título de anti-Brucella = UI/mL NEGATIVO: No se observó aglutinación.

INFORME DE RESULTADOS

(1), control negativo; (2), control positivo; (4), muestra del paciente.
Durante esta práctica se realizaron los controles positivo y negativo de la misma. En el círculo
1 tenemos un control negativo, se puede apreciar que carece de aglutinación, por el contrario,
el círculo 2 fue el control positivo, en el cual se logra apreciar una aglutinación.

En el círculo 4 se realizó la prueba del paciente, cuyo resultado fue negativo, ya que carece
de aglutinación.

MANEJO DE RESIDUOS
1. Separar los residuos generados durante la práctica en diferentes cate gorías, como
materiales biológicos, muestras de sangre, materiales punzocortantes y materiales no
biológicos.

2. Asegurarse de utilizar contenedores de residuos designados para cada categoría, siempre

usando recipientes resistentes, rígidos y a prueba de fugas para desechar los residuos
biológicos y punzocortantes.
 3. Antes de desechar los residuos biológicos, asegurarse de desactivarlos adecuadamente con
un desinfectante apropiado, comúnmente se utiliza cloro para la desinfección de estos,
como las muestras sanguíneas. Esto ayudará a reducir el riesgo de contaminación y
propagación de enfermedades.

4. Es importante etiquetar adecuadamente los contenedores utilizados para residuos,

haciendo uso de la simbología de color adecuada.

FUENTES
Rosa de Bengala. (2013, junio). Monlab.
https://monlab.com/document/Microbiologia/Rosa%20de%20bengala/IFU%20rosa
%20bengala%20monlabtest.pdf

Rosa de Bengala. (2020, 16 marzo). Spinreact.

https://www.spinreact.com/files/Inserts/Serologia/SGIS07_Rosa_Bengala_2020.pdf

Práctica No.3
“Monotest (Ac. Contra mononucleosis infecciosa)” Método: Hemaglutinación
USO CLÍNICO
La prueba de MI-Látex MonlabTest es una técnica de aglutinación en porta para la detección
cualitativa y semicuantitativa de anticuerpos heterófilos (HE) específicos de la mononucleosis
infecciosa (MI) en suero humano. Las partículas de látex recubiertas con un extracto
antigénico de membranas de hematíes bovinos, son aglutinadas por anticuerpos heterófilos
específicos de la MI presentes en el suero del paciente.

FUNDAMENTO
La MI es una enfermedad causada por el virus Epstein-Barr, que afecta al sistema
reticuloendotelial, y presenta un amplio espectro de manifestaciones clínicas, que van desde
una forma asintomática hasta una forma severa. Los pacientes normalmente desarrollan
anticuerpos HE del tipo IgM y presentan un cuadro anormal de células blancas, así como
disfunciones hepáticas.
El diagnóstico de la enfermedad se efectúa mediante la determinación de los anticuerpos HE
o de Paul-Burnell, o de anticuerpos anti-antígenos estructurales del virus. Los primeros
generalmente disminuyen a lo largo de la enfermedad, mientras que los segundos persisten
a lo largo de la vida del paciente.
Los anticuerpos HE son casi exclusivos de la IM aunque existe una incidencia elevada de
falsos resultados positivos.
MATERIAL
Aplicadores. Rotador mecánico (opcional).
Pipetas para suero. Suero sanguíneo sin aditivos ni
Placa de vidrio con concavidades o anillos. hemólisis. No inactivar ni
calentar ya que los anticuerpos
son termolábiles.

REACTIVO
Suspensión de partículas de látex cubiertas con un extracto
Látex antigénico de hematíes bovinos, en tampón fosfato, pH 7,2.
Conservante.
Control + Tapón rojo Suero animal con un título de anticuerpos anti-IM 1/4.
Conservante.
Control –
Tapón azul Suero animal. Conservante.

PROCEDIMIENTO
1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo
disminuye a temperaturas bajas.
2. Adicionar 40 μL de suero en un círculo de la placa y una gota de cada uno de los controles
Positivo y Negativo, sobre círculos distintos.
3. Colocar 1 gota del reactivo en los mismos círculos.
4. Mezclar con ayuda de un aplicador, procurando extender la mezcla en toda la superficie del
círculo.
5. Colocar la placa en un rotador mecánico a 80-100 rpm durante 2 minutos. El exceso de
tiempo de agitación puede originar la aparición de falsos positivos
6. Examinar macroscópicamente con ayuda de una buena fuente de luz indirecta contra fondo
oscuro si presenta aglutinación.
Método semicuantitativo

1. Realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9 g/L.

2. Proceder para cada dilución, como en la prueba cualitativa.

INTERPRETACIÓN
Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente
después de retirar la placa del agitador.

POSITIVO: Aglutinación visible con formación de agregados grandes. La presencia de

aglutinación indica un título 1/28 de anticuerpos específicos MI por el método de Davidsohn.

En el método semicuantitativo, se define el título como la dilución mayor que da resultado

positivo.
NEGATIVO: Suspensión uniforme sin aglutinación macroscópica.
INFORME DE RESULTADOS

(3 y 6), resultado de la muestra del paciente, ausente de aglutinación.

Se realizó la prueba de Monotest para la detección de Ac contra mononucleosis infecciosa.

Los resultados del paciente fueron negativos, ya que careció de una aglutinación
macroscópica, la cual es característica de una prueba positiva.

MANEJO DE RESIDUOS
1. Separar los residuos generados durante la práctica en diferentes categorías, como
materiales biológicos, muestras de sangre, materiales punzocortantes y materiales no
biológicos.

2. Asegurarse de utilizar contenedores de residuos designados para cada categoría, siempre

usando recipientes resistentes, rígidos y a prueba de fugas para desechar los residuos
biológicos y punzocortantes.

3. Antes de desechar los residuos biológicos, asegurarse de desactivarlos adecuadamente con

un desinfectante apropiado, comúnmente se utiliza cloro para la desinfección de estos,
como las muestras sanguíneas. Esto ayudará a reducir el riesgo de contaminación y
propagación de enfermedades.

Es importante etiquetar adecuadamente los contenedores utilizados para residuos,

haciendo uso de la simbología de color adecuada.

Práctica No. 4 Influenza A y B

Método: inmunoensayo de flujo lateral

• Uso clínico
La prueba rápida de influenza A+B es un inmunoensayo de flujo lateral para la detección
cualitativa de los antígenos de influenza A y B en muestras de hisopo nasofaríngeo, hisopo
de garganta o espirado nasal. El objetivo de esta prueba es ayudar en el diagnóstico
diferencial rápido de las infecciones virales de influenza A y B. La influenza (comúnmente
conocida como “gripe”) es una infección viral altamente contagiosa, aguda de las vías
respiratorias. Es una enfermedad que se transmite fácilmente a través de la tos y los
estornudos de las gotas aerosol que contienen el virus vivo. Los brotes de influenza ocurren
cada año durante los meses de otoño e invierno. Los virus tipo A son más frecuentes que los
de tipo B y están asociados con epidemias de influenza más graves, mientras que las de tipo
B suelen ser más leves.

• Fundamento
La prueba rápida de casete de influenza es un inmunoensayo cualitativo de flujo lateral para
la detección de nucleoproteínas influenza A y B en las muestras de hisopo o garganta frotis
nasal o aspirado nasal. En esta prueba, los anticuerpos específicos a las nucleoproteínas de
la influenza A y la influenza B están recubiertos separadamente en las regiones la línea de
prueba del casete de prueba. Durante la prueba, el espécimen extraído reacciona con los
anticuerpos a y b que se recubren sobre las partículas. La presencia de una línea de color en
una o ambas de las regiones de prueba indica un resultado positivo. Para servir como control
del procedimiento, una línea de color siempre aparecerá en la región de control si la prueba
se ha realizado correctamente.

• Insumos requeridos:
1. Casete empacado individualmente en un sobre metalizado.
2. Desecante de sílica.
3. Gradilla de unicel.
4. Tubo de ensaye.
5. Tira reactiva.
6. Botella de buffer.
7. Hisopo.
8. Gotero.
9. Tipo de muestra: hisopado nasofaríngeo

• Procedimiento
1. Muestra de hisopado nasofaríngeo: inserte un hisopo esterilizado en una cavidad
nasal de forma segura de una fosa nasal y recoger mucoepidermis limpiando el
cornete varias veces.
2. permitir que la prueba, la muestra y el buffer de extracción se equilibre a temperatura
ambiente antes de la prueba.
3. Sacar la prueba del casete metalizado sellado y usarla lo antes posible. Los mejores
resultados se obtienen si el ensayo se realiza inmediatamente después de abrir el
sobre.
4. Coloque el tubo de extracción en el puesto de trabajo. Mantenga la botella de buffer
de extracción boca abajo verticalmente. Exprimir la botella y dejar caer la solución en
el tubo de extracción libremente sin tocar el borde del tubo. Añadir 10 gotas de
solución al tubo de extracción.
5. Colocar la muestra de hisopo en el tubo de extracción. Girar el hisopo durante
aproximadamente 10 segundos mientras se presiona la cabeza contra la parte interior
del tubo para liberar el antígeno en el hisopo.
6. Retire el hisopo mientras que presiona la cabeza del mismo contra el interior del tubo
de extracción para expulsar la mayor cantidad de líquido posible. Desechar el hisopo
de acuerdo con el protocolo de eliminación de residuos de riesgo biológico.
7. Ajustar la punta del gotero en la parte superior del tubo de extracción. Colocar la
prueba en una superficie limpia y plana.
8. Añadir 3 gotas de la solución al pozo de la muestra y luego empezar el temporizador.
Lee el resultado a los 15 minutos. No interpretar un resultado después de minutos.

• Intervalos de referencia
1. Positivo influenza A: dos líneas de color aparecen. Una línea de color debe estar en
la región de control y otra línea de color debe estar en la región de la influenza A. Un
 resultado positivo en la región de la influenza tipo A indica que el antígeno se detectó
en la muestra.
2. Positivo influenza B: dos líneas de color aparecen. Una línea de color debe estar en
la región de control y otra línea de color debe estar en la región de la influenza tipo B.
Un resultado positivo en la región de la influenza tipo b indica que el antígeno se
detectó en la muestra.
3. Positivo influenza A y B: tres líneas de color aparecen. Una línea de color debe estar
en la región de control y dos líneas de color debe estar en la región de la influenza A
y la región de la influenza B.
4. Negativo: una línea de color aparece en la región de control. No hay línea de color
evidente en las regiones de la prueba.
5. Inválido: la línea de control no aparece. Volumen de muestra insuficiente o incorrecta
son las razones más frecuentes del fallo de la línea de control.

• Informe de resultados
Al ingresar la gota en el casete éste se tornó de un color en el lado de control (C), por lo tanto,
la muestra fue negativa a influenza de cualquier tipo. Fue lo mismo con la tira reactiva.

• Manejo de RPBI
1. Identificación y clasificación: Se deben identificar adecuadamente para su
manipulación segura. Esto incluye etiquetar los recipientes y las bolsas de
transporte con símbolos y advertencias de peligro.
2. Recolección y almacenamiento: Las muestras se deben recolectar y almacenar
en recipientes herméticos y resistentes a la rotura, como frascos de vidrio o
bolsas de plástico de alta resistencia. Estos recipientes deben estar diseñados
para contener líquidos y deben cerrarse de forma segura para evitar fugas
durante el transporte y almacenamiento.
3. Transporte: Se deben seguir las regulaciones y pautas específicas para los
RPBI. Esto puede implicar el uso de contenedores de transporte aprobados,
con aislamiento y etiquetados adecuadamente.
 4. Tratamiento: Las muestras, una vez utilizadas para su propósito previsto,
deben ser tratadas de manera segura antes de su eliminación final. Esto
generalmente implica la inactivación del virus mediante métodos adecuados,
como la aplicación de agentes químicos desinfectantes o la exposición a altas
temperaturas.
5. Eliminación: las muestras de influenza inactivadas deben eliminarse de
acuerdo con las regulaciones ambientales y de salud locales.

Práctica No. 5 Determinación de grupo sanguíneo y factor Rh

Método: aglutinación directa

• Uso clínico
La determinación del grupo sanguíneo y el factor Rh es esencial antes de realizar una
transfusión de sangre. Esto se debe a que es necesario que el grupo sanguíneo del donante
sea compatible con el del receptor para evitar reacciones inmunológicas graves. Si se
administra sangre incompatible, los anticuerpos presentes en el receptor pueden reaccionar
con los antígenos en la sangre del donante, lo que puede provocar una reacción transfusional
hemolítica. La determinación del grupo sanguíneo y el factor Rh en mujeres embarazadas es
fundamental para prevenir la enfermedad hemolítica del recién nacido.

• Fundamento

El fundamento de la determinación del grupo sanguíneo y el factor Rh se basa en

reacciones de aglutinación o hemólisis. Se utilizan sueros que contienen anticuerpos
específicos para determinar la presencia de los antígenos en los glóbulos rojos.

• Insumos requeridos
1. Tubos de ensaye.
2. Gradilla.
3. Gotero.
4. Pipetas automáticas.
5. Placa de cristal.
6. Agitador de madera.
7. Reactivo Anti-A; Anti-B; Anti-AB y Anti-Rh.
8. Solución salina.
9. Tipo de muestra: sangre con EDTA.

• Procedimiento
1. Prepare una suspensión de eritrocitos al 5% son solución salina.
2. Coloque una gota del reactivo en cada tubo (Anti-A; Anti-B; Anti-AB y Anti-Rh).
3. Agregar a cada tubo una gota de suspensión de eritrocitos al 5%.
4. Mezclar y centrifugar a 1000 rpm por 15 segundos.
 5. Resuspender suavemente el botón y observar si existe aglutinación.

• Intervalos de referencia
Anti-A Anti-B Anti-AB Anti-Rh Grupo sanguíneo y Rh
- - - + O+
- - - - O-
+ - + + A+
+ - + - A-
- + + + B+
- + + - B-
+ + + + AB+
+ + + - AB-

• Informe de resultados
Al poner las gotas de los Anti correspondientes, en algunos casos aglutinaron, esto nos daba
el resultado para saber el tipo de sangre que es la persona, como se ve a continuación.
 • Manejo de RPBI
1. Recolección y almacenamiento: La sangre debe ser recolectada en recipientes
seguros y adecuados para contener líquidos, como bolsas de recolección de sangre
diseñadas específicamente para este propósito. Estas bolsas de recolección de
sangre suelen tener características de seguridad, como cierres herméticos y sistemas
antivuelco para prevenir derrames y fugas durante el almacenamiento y transporte.
2. Identificación y clasificación: Las bolsas de recolección de sangre deben estar
debidamente etiquetadas y marcadas como RPBI para su identificación y clasificación
adecuada. Esto incluye el uso de etiquetas con símbolos y advertencias de peligro,
así como información detallada sobre el contenido y los riesgos asociados.
3. Transporte: Durante el transporte de las bolsas de recolección de sangre, se deben
seguir las regulaciones y pautas específicas para los RPBI. Esto puede implicar el uso
de contenedores de transporte aprobados y resistentes a la rotura, que minimicen el
riesgo de derrames y aseguren la integridad de las bolsas de sangre.
4. Tratamiento y procesamiento: Una vez que la sangre ha cumplido su propósito
previsto, se puede someter a diferentes procesos de tratamiento y procesamiento
según el contexto. Esto puede incluir la separación de componentes sanguíneos,
como plasma, plaquetas y glóbulos rojos, mediante centrifugación y filtración. Cada
componente se trata y almacena adecuadamente según sus requerimientos
específicos.
5. Eliminación: Los residuos derivados del tratamiento y procesamiento de la sangre, así
como las bolsas de recolección de sangre usadas, deben eliminarse de acuerdo con
las regulaciones ambientales y de salud locales. Esto puede implicar la incineración
en instalaciones autorizadas, el entierro en lugares designados o el tratamiento en
plantas de tratamiento de residuos especializados.

Práctica No. 6 Detección cualitativa de Ac IgG del Virus de Epstein-

Barr

Método: aglutinación directa

• Uso clínico
El virus de Epstein-Barr (EBV) es un virus perteneciente a la familia de los herpes,
conocidos por causar mononucleosis infecciosa. Esta infección puede demostrarse
mediante una gran variedad de síntomas clínicos. La mayoría de los contagios primarios se
transmiten mediante saliva y ocurren durante la niñez y son subclínicos. También se han
reportado infecciones de EBV relacionadas a transfusiones.

• Fundamento
El suero diluido del paciente es agregado a los micropozos recubiertos con antígeno
purificado. El anticuerpo IgG específico, en caso de estar presente, se une al antígeno.
Todos los materiales no unidos son lavados y el conjugado enzimático es agregado para
unirse al complejo anticuerpo-antígeno, en caso de estar presente. El exceso conjugado
enzimático es lavado para luego agregar el substrato. La microplaca es incubada a efectos
de permitir la hidrolización del substrato por la enzima. La intensidad de color generada es
proporcional a la cantidad de anticuerpo IgG específico en la muestra.

• Insumos requeridos
1. Agua destilada.
2. Pipetas de precisión.
3. Puntas de pipetas desechables.
4. Lector de micro Elisa.
5. Papel absorbente o toalla de papel.
6. Papel cuadriculado.
7. Placa de cerámica.
8. Agitadores de madera.
9. Jeringa de 5 ml.
10. Control positivo y negativo.
11. Conjugado enzimático.
12. Sustrato TMB.
13. Solución de frenado.
14. Muestra: sangre por venopunción y separar el suero de inmediato.

• Procedimiento
Previo al ensayo, todas las muestras y reactivos deben ser llevados a temperatura ambiente.
Mezclar gentilmente todos los reactivos previos a su uso.
1. Corte el número de pozos a utilizar. Cierre y selle el resto de los pozos no utilizados y
refrigérelos a 2 u 8 °C.
2. Los controles y el calibrador están listos para su uso. Prepare una dilución de las
muestras de 1:21, agregando 10 um. de la muestra a 200 u. del diluyente. Mezclar
bien.
3. Dispense 100 um. del suero diluido, calibrador y controles en los pozos designados.
Para el reactivo blanco, dispense 100 um. de diluyente de la muestra en la posición
1A. Golpeé el pozo para remover las burbujas de aire de líquido y mezclé bien. Incubar
por 20 minutos a temperatura ambiente.
4. Retire el líquido de los pozos. La ve en 3 tiempos con solución de lavado a 1x. Golpee
los pozos sobre una toalla o papel absorbente.
5. Dispense 100 um. de conjugado enzimático en cada pozo e incube por 20 minutos a
temperatura ambiente.
6. Retire el conjugado enzimático de los pozos. La ve en 3 tiempos con solución de
lavado. Golpee los pozos sobre una toalla.
7. Dispense 100 um. de sustrato TMB e incube por 10 minutos a temperatura ambiente.
8. Agregue 100 um. de solución de frenado.
9. Lea la densidad óptica a 450 nanómetros con un lector de placa de micro valoración
en un plazo de 15 minutos después de haber agregado la solución de frenado.

• Intervalos de referencia
<0.9 anticuerpo no detectado de EBV - VCA IgG.
 0.9 – 1.1 sobre el límite positivo se recomienda otra identificación clínica.
>1.1 anticuerpo detectado de EBV – VCA IgG.

• Informe de resultados
Cálculo de resultado:
1. Chequear el factor de calibración (CF) valorado en el frasco del calibrador. Este
valor puede variar de lote a lote.
2. Calcule el valor del punto de corte. Calibrador (OD) por factor de calibración.
3. Calcule el anticuerpo (Ab) para cada determinación, dividiendo el valor (OD) de cada
muestra entre el valor del punto de corte.

1. Factor de calibración: 0.5

2. (0.5)(1.157) = 0.5785
3. (0.472)(0.5785) = 0.8159
Esto quiere decir que el anticuerpo no fue detectado de EBV.

• Manejos de RPBI
• Recolección y almacenamiento: La sangre debe ser recolectada en recipientes
seguros y adecuados para contener líquidos, como bolsas de recolección de sangre
diseñadas específicamente para este propósito. Estas bolsas de recolección de
sangre suelen tener características de seguridad, como cierres herméticos y sistemas
antivuelco para prevenir derrames y fugas durante el almacenamiento y transporte.
• Identificación y clasificación: Las bolsas de recolección de sangre deben estar
debidamente etiquetadas y marcadas como RPBI para su identificación y clasificación
adecuada. Esto incluye el uso de etiquetas con símbolos y advertencias de peligro,
así como información detallada sobre el contenido y los riesgos asociados.
• Transporte: Durante el transporte de las bolsas de recolección de sangre, se deben
seguir las regulaciones y pautas específicas para los RPBI. Esto puede implicar el uso
de contenedores de transporte aprobados y resistentes a la rotura, que minimicen el
riesgo de derrames y aseguren la integridad de las bolsas de sangre.
 • Tratamiento y procesamiento: Una vez que la sangre ha cumplido su propósito
previsto, se puede someter a diferentes procesos de tratamiento y procesamiento
según el contexto. Esto puede incluir la separación de componentes sanguíneos,
como plasma, plaquetas y glóbulos rojos, mediante centrifugación y filtración. Cada
componente se trata y almacena adecuadamente según sus requerimientos
específicos.
• Eliminación: Los residuos derivados del tratamiento y procesamiento de la sangre, así
como las bolsas de recolección de sangre usadas, deben eliminarse de acuerdo con
las regulaciones ambientales y de salud locales. Esto puede implicar la incineración
en instalaciones autorizadas, el entierro en lugares designados o el tratamiento en
plantas de tratamiento de residuos especializados.

Práctica # 7
Cuantificación de inmunoglobulina E
Método: ELISA

Aplicación clínica
La IgE es un anticuerpo que juega un papel importante en las respuestas alérgicas
del sistema inmunológico, su concentración en el organismo suele ser muy baja, por
lo que cierto nivel de este anticuerpo en la sangre puede servir como un indicador o
referencia de una producción continua, causada por una alergia en el paciente, como
por ejemplo asma, fiebre del heno o alergias alimentarias. También se eleva en otras
enfermedades causadas por parásitos, mielomas de IgE y hepatitis. También se
puede utilizar para evaluar la eficacia del tratamiento de la alergia.
En la práctica clínica, la cuantificación de IgE se utiliza junto con la historia clínica del
paciente, los síntomas y otras pruebas para diagnosticar y evaluar la alergia. Si se
encuentra una cantidad alta de IgE en la sangre del paciente y se correlaciona con
los síntomas clínicos, esto puede ser una indicación de una alergia.

Fundamento
La cuantificación de IgE por el método ELISA se basa en la capacidad de los
anticuerpos para reconocer y unirse específicamente a la IgE. El método ELISA utiliza
una técnica de inmunoensayo, que permite la detección y cuantificación de la cantidad
de IgE presente en una muestra biológica, como la sangre o el suero.
El fundamento del método ELISA para la cuantificación de IgE implica varias etapas.
En primer lugar, se recubre una placa de microtitulación con un anticuerpo específico
para la IgE. Luego, se agrega la muestra biológica, que contiene IgE, y se incuba para
permitir que la IgE en la muestra se una al anticuerpo recubierto en la placa.
En segundo lugar, se agrega un segundo anticuerpo específico para la IgE, que está
conjugado con una enzima. Este anticuerpo se une a la IgE ya unida al anticuerpo
recubierto en la placa, formando un complejo anticuerpo-antígeno-anticuerpo.
En tercer lugar, se agrega un sustrato para la enzima conjugada, que produce una
señal detectable. La cantidad de señal producida es proporcional a la cantidad de IgE
presente en la muestra.
Por último, se mide la señal producida, generalmente mediante espectrofotometría, y
se compara con una curva de calibración que se realiza con muestras de IgE de
concentraciones conocidas. De esta manera, se puede calcular la cantidad de IgE
presente en la muestra biológica.
En resumen, la cuantificación de IgE por el método ELISA se basa en la capacidad
de los anticuerpos para unirse específicamente a la IgE, permitiendo la detección y
cuantificación de la cantidad de IgE presente en una muestra biológica. Este método
es sensible, específico y permite una medición cuantitativa precisa de la IgE, lo que
lo convierte en una herramienta valiosa en la práctica clínica.

Insumos requeridos
Material:
▪ Microplaca de pozos
▪ Cinta adhesiva
▪ Solución salina
▪ Papel o sanitas
Equipo:
▪ Baño de agua a 37ºC.
▪ Espectrofotómetro o fotómetro con cubeta termostatizable a 37ºC para
lecturas a 570 (560-580nm).
Reactivos:
▪ Diluyente (R1): Tampón glicina, pH, 8,3. Azida sódica 0,95 g/L.
▪ Látex (R2): Partículas de látex cubiertas con IgG de ratón anti-IgE humana,
pH, 7,3. Azida sódica 0,95 g/L.
Tipo de muestra:
▪ Suero fresco. Estable 7 días a 2-8ºC o 3 meses a -20ºC.
▪ Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de usar.
▪ No utilizar muestras altamente hemolizadas o lipémicas.
▪

Procedimiento
1. Coloque 25 µL de muestra en un pozo.
2. Agregar 100 µL de biotina y agitar.
3. Cubrir e incubar a temperatura ambiente por 30 minutos.
 4. Retirar el líquido de los pocillos, lavar 3 veces y secar.
5. Agregar 100 µL del reactivo enzimático, cubrir e incubar a temperatura
ambiente por 30 minutos.
6. Retire el líquido, lavar 3 veces y secar.
7. Adicionar 100 µL de TMB sustrato.
8. Incubar 15 minutos a temperatura ambiente.
9. Adicionar 50 µL de solución stop y mezclar.
10. Leer la absorbancia a 450 nm.

Intervalos de referencia
Hombres < 250 UI/ml
Mujeres < 175 UI/ml

Resultados
Std UI/ml D.O.
0 0.157
5 0.259
25 0.506
50 0.788
150 1.714
400 2.886
Absorbancias de la muestra:
1. 2.919
2. 2.859
Promedio: 2.889

Regla de 3:
400 – 2.886
X – 2.889

La muestra pertenecía a un paciente masculino, independientemente de los valores

de referencia y del paciente, el resultado está alterado, ya que en la práctica se lavó
con agua y no con

Manejo de residuos químicos y/o biológico infecciosos

-La aguja con la que se tomó la muestra del paciente debe ir en un contenedor rígido
de polipropileno rojo, ya que se trata de un objeto punzocortante.
-La muestra recolectada que ya no se ocupará más debe ir en un recipiente hermético
rojo.

Fuentes de consulta
-Determinación cuantitativa de inmunoglobulinas E (IgE) IVD. (s. f.). En SPINREACT (N.o

1107050). Recuperado 1 de mayo de 2023, de

https://www.spinreact.com.mx/public/instructivo/TURBIDIMETRIA/1107050%20Ig

E%20.pdf

Práctica # 8
Eosinófilos en moco nasal
Método: Tinción
Aplicación clínica
La práctica de "eosinófilos en moco nasal" se utiliza en la evaluación de pacientes
con sospecha de rinitis alérgica y otros trastornos relacionados con la inflamación
nasal. Los eosinófilos son un tipo de glóbulo blanco que juega un papel importante en
la respuesta alérgica y en la inflamación. La presencia de eosinófilos en el moco nasal
es un indicador de la inflamación en la mucosa nasal, que es común en pacientes con
ciertas alergias.
Se realiza mediante la toma de una muestra de moco nasal del paciente y su análisis
en un laboratorio. La cantidad de eosinófilos presentes en la muestra se cuantifica y
se utiliza como indicador de la presencia y gravedad de la inflamación nasal.
La aplicación clínica de esta práctica incluye la evaluación del grado de inflamación
en pacientes con rinitis alérgica y la monitorización de la respuesta al tratamiento.
También puede ser útil en la diferenciación de otros trastornos que pueden tener
síntomas similares a la rinitis alérgica, como la rinitis no alérgica y la sinusitis. En
general, la práctica de eosinófilos en moco nasal es una herramienta útil en la
evaluación y el manejo de pacientes con trastornos inflamatorios nasales.

Fundamento (descripción)
El fundamento se basa en el hecho de que los eosinófilos son un tipo de glóbulo
blanco que desempeña un papel importante en la inflamación y la respuesta alérgica.
En condiciones normales, los eosinófilos se encuentran en pequeñas cantidades en
el moco nasal y en otros tejidos del cuerpo. Sin embargo, en presencia de una
respuesta alérgica o una inflamación crónica, la cantidad de eosinófilos en el moco
nasal puede aumentar significativamente.
La medición de la cantidad de eosinófilos presentes en el moco nasal puede ser útil
para evaluar la gravedad de la inflamación en la mucosa nasal. Los niveles elevados
de eosinófilos en el moco nasal son un indicador de la presencia de una respuesta
alérgica o inflamación crónica, lo que puede sugerir un diagnóstico de rinitis alérgica
u otro trastorno relacionado. Además, la medición de los niveles de eosinófilos en el
moco nasal puede ser útil para evaluar la respuesta al tratamiento y la eficacia de los
medicamentos utilizados para tratar la inflamación nasal.

Insumos requeridos
Material:
▪ Portaobjetos
▪ Isopo
▪ Agua
▪ Aceite de inmersión
Equipo:
▪ Microscopio
Reactivos:
▪ Eosina 1 %
▪ Azul de metileno 1 %
▪ Alcohol metílico
Tipo de muestra:
▪ Moco nasal

Procedimiento
1. Tomar una muestra de moco nasal, de modo que el paciente se siente en
caso de ser necesario, o alce la cabeza para poder tomarla con cuidado y sin
causar dolor (el paciente puede hacerlo por sí mismo también).
2. Colocar la muestra en un portaobjetos.
3. Fijar la lámina al calor o esperar que seque.
4. Cubrir la muestra durante un minuto con EOSINA AL 1%. Lavar con agua y
escurrir. Cubrir la lámina con ALCOHOL METILICO por 5 segundos.
5. Escurrir sin enjuagar.
6. Cubrir con AZUL DE METILENO AL 1% por 1 minuto.
7. Lavar con agua corriente.
8. Cubrir con ALCOHOL METILICO por 5 segundos.
9. Lavar con agua corriente y dejar secar a temperatura ambiente.
10. Leer al microscopio en objetivo de inmersión.

Intervalos de referencia
Eosinófilos: 0-5% de 100 leucocitos

Informe de resultados
Ya que en la práctica no se logró observar ningún eosinófilo, se optó por mostrar cómo
se ven mediante fotografías obtenidas de internet:
Link de la página de dónde se obtuvieron las fotos:
http://laboratorioareaclinica.blogspot.com/2017/04/eosinofilos-en-moco-nasal.html
#4 Eosinofilia moco nasal Clínica de Asma y Alergia Managua Nicaragua tel
22781169

Manejo de residuos químicos y/o biológico infecciosos

-Tirar el isopo con el que se recolectó la muestra en una bolsa de polietileno.
-Colocar la laminilla con la muestra en un recipiente con cloro o alcohol. Puede lavarse
directamente con jabón.

Fuentes consultadas
-COLORACION EOSINOFILOS EN MOCO NASAL. (s. f.). En Albor Químicos.

Recuperado 1 de mayo de 2023, de https://quimicosalbor.com/wp-

content/uploads/2018/04/INS-Eosinofilos-en-moco-nasal-2017-1.pdf

-UPC - Estudios. (s. f.). https://upc.com.mx/examenes/v/302

Práctica # 9
Perfil reumático (PCR, FR, AEL)
Método: Aglutinación indirecta

Aplicación clínica o propósito de la prueba (uso clínico)

El perfil reumático es un conjunto de pruebas de laboratorio que se utiliza en la
evaluación de pacientes con sospecha de enfermedades autoinmunitarias y
enfermedades reumáticas. Este perfil incluye varias pruebas que evalúan diferentes
aspectos del sistema inmunológico y pueden ayudar en el diagnóstico y seguimiento
de enfermedades como la artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico,
esclerodermia, entre otras.
Las pruebas que se incluyen en el perfil reumático varían según el laboratorio, pero
generalmente incluyen la medición de los niveles de anticuerpos antinucleares (ANA),
factor reumatoide (FR), antiestreptolisina (AEL), proteína C reactiva (PCR) y velocidad
de sedimentación globular (VSG). Estas pruebas pueden proporcionar información
sobre la presencia y gravedad de la inflamación, la actividad de la enfermedad y la
posible respuesta al tratamiento.

Fundamento
PCR
La Proteína C Reactiva (PCR) es una proteína producida por el hígado en respuesta
a la inflamación en el cuerpo. En el contexto del perfil reumático, la medición de la
PCR se utiliza como una prueba de laboratorio para evaluar el grado de inflamación
sistémica en el cuerpo, que es común en muchas enfermedades autoinmunitarias y
enfermedades reumáticas.
La PCR se puede medir en suero o plasma mediante una prueba de
inmunoturbidimetría, que se basa en la capacidad de la PCR para unirse a ciertas
pruebas y formar complejos inmunológicos. Los niveles de PCR pueden aumentar
rápidamente en respuesta a la inflamación aguda en el cuerpo y disminuir cuando la
inflamación se resuelve. En el perfil reumático, los niveles de PCR se pueden utilizar
para monitorear la actividad de la enfermedad, guiar el tratamiento y evaluar la
respuesta de éste.

Factor reumatoideo (FR)

El Factor Reumatoideo es un anticuerpo que se encuentra en el suero de algunos
pacientes con enfermedades autoinmunitarias y enfermedades reumáticas, como la
artritis reumatoide. El FR se une a la región Fc de las inmunoglobulinas IgG y forma
complejos inmunes que pueden contribuir a la inflamación y el daño tisular en las
articulaciones. El FR se detecta mediante la aglutinación de partículas de látex o la
nefelometría.
Es importante tener en cuenta que la presencia de FR en el suero no es diagnóstica
de artritis reumatoide o de otras enfermedades reumáticas, ya que también se puede
encontrar en personas sanas y en pacientes con otras enfermedades. Además, la
ausencia de FR no descarta el diagnóstico de artritis reumatoide o de otras
enfermedades reumáticas. Por lo tanto, la evaluación clínica completa y la
interpretación cuidadosa de los resultados de las pruebas son esenciales para llegar
a un diagnóstico preciso.
Insumos requeridos
Material
▪ Placa de vidrio para aglutinación
▪ Aplicadores de madera
▪ Marcador
Equipo
▪ Agitador mecánico
Reactivos
▪ Látex: Suspensión de partículas de látex cubiertas con gamma-globulina
humana, pH, 8,2. Azida sódica 0,95 g/L.
▪ Controles positivos y negativos.
Tipo de muestra
▪ Suero fresco. Estable 7 días a 2-8ºC o 3 meses a -20ºC.
▪ Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de la
prueba.
▪ No utilizar muestras hemolizadas o lipémicas.

Procedimiento
PCR
1. Colocar 50 µL de suero del paciente y de los controles en un pocillo cada
uno.
2. Depositar una gota del reactivo junto con la gota de suero.
3. Mezclar con un aplicador, extendiendo en toda la superficie del círculo.
4. Colocar en un agitador mecánico de 80-100 rpm durante 2 minutos.
5. Observar presencia o ausencia de aglutinación.
6. En caso de ser positivo hacer diluciones dobles (1:2, 1:4, 1:8) con SS y
repetir el procedimiento.

FR sensibilidad 3.1 UI/ml

Si es positivo hacer diluciones dobles a partir de 1:20
VRcF: Menor de 1:20
AEL VRcF = 200 UI/ml Sensibilidad: 200 IU/ml

Intervalos de referencia
Hasta 6 mg/L
Aglutinación: Muestra positiva
No aglutinación: Muestra negativa
NOTA: Tomar como referencia los controles.

Cálculos
6 x título de PCR = mg/L

Informe de resultados

Las pruebas salieron negativas ya que no hubo aglutinación en ninguna de ellas.

Manejo de residuos químicos y/o biológico infecciosos

-La aguja con la que se tomó la muestra del paciente debe ir en un contenedor rígido
de polipropileno rojo, ya que se trata de un objeto punzocortante.
-La muestra recolectada que ya no se ocupará más debe ir en un recipiente hermético
rojo.

Fuentes consultadas
-Prueba de factor reumatoideo (FR). (s. f.). https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-

laboratorio/prueba-de-factor-reumatoideo-fr/

-Prueba de proteína C reactiva (PCR). (s. f.). https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-

laboratorio/prueba-de-proteina-c-reactiva-pcr/
 Practica 10: Anticuerpos anti-VIH
Método: Elisa
La prueba de anticuerpos anti-VIH por el método de ELISA es utilizada para detectar la presencia de
anticuerpos específicos contra el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) en muestras de sangre.
Aplicación clínica: La prueba de anticuerpos anti-VIH por ELISA se utiliza para el diagnóstico de la
infección por VIH. También se emplea en programas de detección y en estudios epidemiológicos para
evaluar la prevalencia de la infección en diferentes poblaciones.
Fundamento: El ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) se basa en la detección de la
interacción entre los anticuerpos presentes en la muestra del paciente y antígenos específicos del VIH
presentes en el kit de prueba. Se utiliza un sustrato cromogénico para generar una señal visual o una
señal óptica que puede ser cuantificada. Si hay anticuerpos anti-VIH presentes en la muestra, se
produce una reacción enzimática que indica un resultado positivo.
Insumos requeridos: Los insumos necesarios para realizar la prueba de anticuerpos anti-VIH por
ELISA incluyen:
Kit de prueba de ELISA para la detección de anticuerpos anti-VIH.
Muestras de sangre (suero) del paciente.
Equipo de laboratorio, que puede incluir pipetas, placas de microtitulación, lavadores de placas, lector
de placas, etc.
Reactivos y soluciones necesarios según las instrucciones del kit de prueba.
Procedimiento:

1. Añadir 50 ul de suero en un pozo.

2. Incubar durante 30 minutos a 37°C.
3. Lavar 6 veces y secar.
4. Añadir 50 ul de enzima conjugada.
5. Incubar a 37°C durante 30 minutos.
6. Lavar 6 veces y secar.
7. Adicionar 50 ul de sustrato A + 50 ul de sustrato B.
8. Incubar a 37°C durante 30 minutos.
9. Adicionar 50ul de solución stop.
10. Leer abs a 450 nm.

Cálculos del resultado: valor de corte = 0.1004 x CN. Si la abs de x CN es menor de 0.05, entonces
usar 0.05 para calcular el valor de corte.
𝐴𝑏𝑠 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝑟𝑒𝑙𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 =
𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑟𝑡𝑒

Interpretación: relación de muestra <1.0 no reactivo, >1.0 reactivo.

Manejo de residuos químicos y/o biológicos infecciosos: El manejo de los residuos químicos y/o
biológicos infecciosos generados durante la prueba debe seguir las pautas y regulaciones establecidas
por las autoridades sanitarias y ambientales correspondientes. Esto puede incluir la utilización de
recipientes adecuados para la recolección de residuos, su etiquetado y posterior eliminación de
acuerdo con los procedimientos establecidos para la gestión segura de este tipo de desechos. Es
importante seguir los protocolos de seguridad y bioseguridad establecidos en el laboratorio para
minimizar los riesgos asociados con la manipulación de materiales infecciosos.

Practica 11: VDRL y RPR

Método: Floculación

La prueba de VDRL (Venereal Disease Research Laboratory ) y RPR (Rapid Plasma Reagin) son
pruebas de laboratorio utilizadas para detectar la presencia de anticuerpos contra el Treponema
pallidum, la bacteria que causa la sífilis. Estas pruebas se basan en el método de floculación.
Aplicación clínica o propósito de la prueba: La prueba de VDRL y RPR se utiliza para el diagnóstico
y seguimiento de la sífilis, una infección de transmisión sexual. También se puede utilizar para
detectar la sífilis en recién nacidos de madres infectadas y en donantes de sangre.
Fundamento: El VDRL y el RPR se basan en la detección de anticuerpos no treponémicos en la
sangre del paciente. Estos anticuerpos se producen como respuesta a la infección por Treponema
pallidum. El principio de la prueba de floculación es la formación de un complejo antígeno-anticuerpo
que da lugar a la formación de flóculos o grumos visibles a simple vista.
Insumos requeridos: Los insumos necesarios para realizar la prueba de VDRL y RPR por el método
de floculación incluyen suero o plasma del paciente, reactivos de floculación, agitador de vidrio,
pipetas y portaobjetos.
Procedimiento VDRL:

1. Colocar una gota de suero en un círculo de la placa.

2. Agregar 50 ul de reactivo VDRL.
3. Agitar durante 4 min a 180 rpm.
4. Observar al microscopio, hacer diluciones.

Si es positivo hacer diluciones dobles con SS 1:2, 1:4, 1:8 y repetir el procedimiento.

Interpretación: reactivo si presenta floculación

no reactivo si no presenta floculación.

Procedimiento RPR:

1. Colocar una gota de suero en la placa.

2. Agregar 50 ul de reactivo RPR carbón con el gotero, mezclar ambas gotas por todo el pozo
de la placa agitar 100 rpm durante 8 minutos.
3. Observar presencia o ausencia de floculación.

Interpretación: reactivo si presenta floculación y no reactivo si no presenta floculación.

Manejo de residuos químicos y/o biológicos infecciosos: Los residuos químicos y biológicos
generados durante la realización de la prueba de VDRL y RPR deben ser manejados de acuerdo con
las regulaciones y pautas locales para el manejo de residuos médicos. Esto puede incluir la
eliminación adecuada de pipetas y portaobjetos contaminados, así como la desinfección de los
instrumentos utilizados. Es importante seguir los protocolos establecidos para minimizar el riesgo de
contaminación y propagación de infecciones.

Practica 12: AEL “O”

Método: ELISA

La prueba de antiestreptolisina por el método de Elisa se utiliza clínicamente para detectar y

cuantificar la presencia de anticuerpos contra la estreptolisina O, una toxina producida por la
bacteria del grupo A de estreptococos (Streptococcus pyogenes). Esta prueba se utiliza
principalmente en el diagnóstico de infecciones causadas por esta bacteria, como la fiebre
reumática y la glomerulonefritis postinfecciosa.
El fundamento de la prueba se basa en la detección de anticuerpos específicos en suero o
plasma humano que se unen a la estreptolisina O. El método de Elisa (Enzyme-Linked
Immunosorbent Assay) utiliza una técnica de inmunoensayo en la cual los anticuerpos
presentes en la muestra del paciente reaccionan con la estreptolisina O marcada con una
enzima. La presencia de anticuerpos se detecta mediante la medición de la actividad
enzimática, lo que indica la cantidad de anticuerpos presentes en la muestra.
Los insumos requeridos para la prueba de antiestreptolisina por Elisa incluyen:
➢ Antígeno de estreptolisina O: es necesario contar con estreptolisina O purificada o
recombinante marcada con una enzima, como la peroxidasa de rábano picante.
➢ Suero o plasma humano: se requiere la muestra del paciente para evaluar la presencia
de anticuerpos contra la estreptolisina O.
➢ Reactivos de enlace: se utilizan para fijar la estreptolisina O al fondo de las placas de
microtitulación.
➢ Soluciones de lavado: se emplean para eliminar residuos y contaminantes durante los
pasos de lavado.
➢ Sustrato cromogénico o fluorogénico: se utiliza para generar una señal de color o
fluorescencia que indica la presencia de anticuerpos.

El procedimiento de la prueba de antiestreptolisina por Elisa generalmente sigue los

siguientes pasos:
Modo de activarla
1.- Se reconstituye con agua destilada al volumen indicado en la etiqueta del frasco.
2.- Para cada 5 ml de la estreptolisina reconstituida se adiciona el hidrosulfito de sodio
contenido en uno de los tubos capilares que se adjuntan.
3.- Se agita por inversión hasta disolución total, para obtener su forma activa. (estable por 24
horas).
Suspensión de glóbulos rojos al 5%
1. Centrifugar la sangre a 2000 rpm durante 5 minutos, descarte el sobrenadante y lave
el paquete de glóbulos rojos con solución salina al 0.85%, mezclar por inversión y
 centrifugar nuevamente, desechar el sobrenadante. Este proceso se repite tres veces,
debiendo ser claro el sobrenadante.
2. Realizar un último lavado con solución amortiguadora, mezclar por inversión y
centrifugar nuevamente, desechar el sobrenadante.
3. Los glóbulos rojos se suspenden en solución amortiguadora a una concentración final
del 5%.
Diluciones del suero problema
1. Preparar una dilución 1:10 y otra 1:60 del suero con solución amortiguadora.
2. Agregar 50 ul de buffer en los pozos o tubos del A1 al A12, 50 ul en el B11 y 75 ul en
el B12.
3. De la dilución 1:10 añadir 50 ul al pozo o tubo A1, mezclar y pasar 50 ul al pozo A2,
mezclar y continuar así en los pozos A3, A5, A7, A9, A11 y A12, desechando de este
50 ul.
4. De la dilución 1:60 agregar 50 ul al pozo o tubo A4, mezclar y pasar 50 ul al pozo A6,
mezclar y continuar así en los pozos A8 y A10 desechando de este 50 ul.
5. Agregar 25 ul de estreptolisina activada a los pozos o tubos A1 a A12 y B11. Mezclar.
6. Cubrir con cinta Diurex o papel Parafilm.
7. Incubar 15 minutos a 37°C.
8. Retirar la cubierta y agregar 25 ul de la suspensión de glóbulos rojos al 5% a todos los
pozos.
9. Mezclar y cubrir nuevamente e incubar 45 minutos a 37°C, mezclando y revisando
cada 15 minutos.
Interpretación: el título de anticuerpos contra la estreptolisina se expresa en unidades Todd.
El título de antiestreptolisina corresponderá al último pozo o tubo de la máxima dilución
capaz de inhibir totalmente la hemolisis.

Los intervalos de referencia, es decir, los valores considerados normales, pueden variar
dependiendo del laboratorio y de las unidades utilizadas. Generalmente, se informan como
títulos o unidades específicas de anticuerpos antiestreptolisina por mililitro (U/mL) y se
establecen rangos de referencia basados en la población local.
Títulos de 240 o inferiores, se consideran normales para nuestra población.
El informe de resultados de la prueba de antiestreptolisina por Elisa incluirá la concentración
de anticuerpos antiestreptolisina detectada en la muestra del paciente. Se comparará con los
intervalos de referencia establecidos para determinar si los niveles son normales o si indican
una infección activa o reciente por Streptococcus pyogenes.
El manejo de residuos químicos y/o biológicos infecciosos generados durante la realización
de la prueba de antiestreptolisina por Elisa debe seguir los protocolos establecidos por las
normativas locales y las buenas prácticas de laboratorio. Esto puede incluir la adecuada
disposición de reactivos y materiales contaminados, la desinfección de superficies y equipos,
y la manipulación segura de residuos biológicos. Es importante seguir las pautas y
regulaciones pertinentes para garantizar la seguridad y minimizar el riesgo de propagación de
agentes infecciosos.
 Practica 13:

Práctica #14
Gonadotropina coriónica humana (HGC) en orina y suero
Método: Aglutinación indirecta (látex)

Aplicación clínica
La hCG es una hormona secretada por la placenta de la mujer embarazada que
aparece relativamente pronto en sangre y orina después de 7 a 10 días de
implantación del embrión fecundado.
Puede ser detectada en orina a partir del tercer día de la pérdida del periodo menstrual
con el método de aglutinación, o de 7 a 10 días posteriores a la concepción por
inmunoensayo cromatográfico, y su concentración sigue aumentando hasta alcanzar
niveles muy altos después de las 10 semanas de gestación.

Fundamento
Inmunoensayo cromatográfico
STICK hCG es un inmunoensayo por cromatografía de flujo lateral. El método emplea
una combinación única de conjugado anticuerpo monoclonal-colorante y anticuerpos
policlonales en fase sólida para identificar selectivamente hCG presen te en las
muestras, con un elevado grado de sensibilidad. En menos de 5 minutos, pueden
detectarse niveles de hCG tan bajos como 10 mIU/ml. Cuando se aplica una cantidad
suficiente de muestra en la porción absorbente, ésta migra por capilaridad a través de
la tira. El conjugado anticuerpo-colorante se une a la hCG formando un complejo
anticuerpo-antígeno. Este complejo se une al anticuerpo anti-hCG de la zona de
reacción positiva produciendo una banda coloreada rosa cuando la concentración de
hCG es mayor de 10 mIU/ml. En ausencia de hCG, no se observa banda alguna en
la zona de reacción positiva. La mezcla de reacción continua la migración a través de
la tira hasta la zona control. El conjugado libre aún, se une a los reactivos de la zona
control formando una banda coloreada rosa, demostrando el correcto funcionamiento
del test.
Aglutinación indirecta (latex)
La prueba de hCG-Látex es una técnica de aglutinación en porta para la detección
directa cualitativa de la hCG en orina. Las partículas de látex recubiertas con
anticuerpo monoclonal anti-hCG son aglutinadas por moléculas de hCG presentes en
la muestra del paciente.

Insumos requeridos (material, equipo, reactivos, tipo de muestra)

Material:
▪ Pipetas de 50 µL
▪ Pipetas de 100 µL
▪ Aplicadores
▪ Un tubo de ensayo
▪ Gradilla

Equipo:
▪ Agitador Vortex
Reactivos:

Aglutinación indirecta (látex)

Suspensión de partículas de látex cubiertas con anticuerpo

Látex monoclonal anti-hCG humana.

Control + Orina humana con una concentración de hCG > 1600 UI/L

Control - Suero animal.

Inmunoensayo cromatográfico
 Ninguno, se trabajó con tiras reactivas que ya incluían un control positivo.

Tipo de muestra:
▪ Suero
▪ Orina

Procedimiento
Aglutinación indirecta:
1. Depositar 100 µL de la muestra en la placa o portaobjetos.
2. Agregar 50 µL del reactivo anti-HGC látex.
3. Mezclar con un aplicador, extendiendo la mezcla en toda la superficie del
círculo.
4. Agitar durante 2 minutos (80 – 100 rpm)

Inmunoensayo cromatográfico:

1. Tomar una tira y colocarla en la muestra de orina o suero con las flechas
señalando hacia abajo. No sumergir por encima de la línea máxima MAX de
la tira.
2. Dejar de 10 a 15 segundos.
3. Retirar la tira y colocarla en una superficie plana.
4. Leer los resultados a los 3 minutos si es muestra de orina y a los 5 si es de
suero.

Intervalos de referencia
Aglutinación indirecta:
Resultado positivo: Se observará aglutinación a simple vista, lo cual indica que hay
una concentración de HGC igual o superior a 200 UI/L.
Valor cuantitativo: 50 – 5,000 UI/L entre 1 – 2.5 semanas de embarazo.
Resultado negativo: No hay aglutinación.
Inmunoensayo cromatográfico:
Informe de resultados
Prueba de aglutinación indirecta (látex)

La prueba salió positiva, debido a que los reactivos llevaban un año caducados.

Inmunoensayo cromatográfico:

La prueba resultó negativa, descartando los falsos positivos de la prueba de

aglutinación indirecta.

Manejo de residuos químicos y/o biológico infecciosos

 ▪ Tener precaución a la hora de tomar la muestra sanguínea, evitando
pincharse con la aguja ya usada.
▪ Para desechar la aguja se requiere un recipiente rígido de poliprepileno rojo.
▪ Para el desecho de la muestra sanguínea se requiere un recipiente hermético
rojo.
▪ Para el desecho de reactivos caducados dentro de su contenedor, se
requiere una bolsa de polietileno amarilla.

Fuentes consultadas
▪ Prueba de Embarazo de un paso. (2012). En STRIPPREG1 (1.0 21/10/13). CE. Recuperado 22
de mayo de 2023, de https://diagnosticoencasa.com/instrucciones/STRIPPREG.pdf
▪ Determinación cualitativa de la hormona gonadotropina coriónica humana (hCG). (2015). En
SPINREACT (N.o SEIS02-E 15/12/15). SPINREACT. Recuperado 22 de mayo de 2023, de
https://www.spinreact.com.mx/public/instructivo/SEROLOGIA%20Y%20SEROLOGIA%20FEB
RIL/1200601.02%20hCG.pdf
▪ Ensayo immunocromatrográfico para la detección cualitativa de embarazo (hCG) en suero
y/u orina. (s. f.). En SPINREACT (N.o 1501130). SPINREACT. Recuperado 22 de mayo de 2023,
de https://www.spinreact.com.mx/public/_pdf/1501130.pdf

Practica 15: Anticuerpos antinucleares “ANA”

Método: ELISA
La prueba de anticuerpos antinucleares (ANA) por el método de Elisa es utilizada clínicamente para
detectar la presencia de anticuerpos dirigidos contra componentes del núcleo de las células, los cuales
pueden estar asociados con enfermedades autoinmunes, como el lupus eritematoso sistémico y la
artritis reumatoide.
Aplicación clínica o propósito de la prueba: La prueba de ANA por Elisa se utiliza para diagnosticar y
monitorear enfermedades autoinmunes, especialmente aquellas que están asociadas con la producción
de anticuerpos antinucleares. También puede ser útil en la evaluación de enfermedades reumáticas y
sistémicas, así como en la detección de trastornos del tejido conectivo.
Fundamento: La prueba de ANA por Elisa se basa en la capacidad de los anticuerpos antinucleares
presentes en la muestra de un paciente para unirse a antígenos nucleares específicos que están
recubiertos en una placa. Después de la unión de los anticuerpos, se detecta su presencia mediante una
reacción enzimática y se mide la intensidad de la señal generada, la cual es propo rcional a la
concentración de anticuerpos antinucleares en la muestra.
Insumos requeridos: Los insumos necesarios para realizar la prueba de ANA por Elisa incluyen:

→ Placas de microtitulación recubiertas con antígenos nucleares específicos.

→ Muestras de suero o plasma del paciente.
→ Conjugado enzimático, como peroxidasa de rábano picante o fosfatasa alcalina, que se une a
los anticuerpos antinucleares.
→ Sustrato cromogénico o fluorogénico para generar una señal visual o fluorescente.
→ Reactivos de lavado para eliminar las sustancias no unidas.
→ Calibradores o controles de referencia con concentraciones conocidas de anticuerpos
antinucleares.
Procedimiento:
Preparar una dilución 1:21 de la muestra (10 ul de suero + 200 ul de diluyente de muestra).
Controles y calibrador listos para su uso
1. Dispensar 100 ul de suero diluidos en un pozo e incubar 20 minutos a temperatura ambiente.
2. Lavar 3 veces, secar.
3. Agregar 100 ul de enzima conjugada.
4. Incubar 20 min a temperatura ambiente.
5. Lavar 3 veces, secar.
6. Agregar 100 ul de TMB e incubar 10 minutos temperatura ambiente.
7. Adicionar 100 ul de solución stop.
8. Leer a 450 nm.

Informe de resultados: El informe de resultados de la prueba de ANA por Elisa proporciona

información sobre la presencia y concentración de anticuerpos antinucleares en la muestra del
paciente. Los resultados se expresan en términos de títulos, unidades o índices, y se comparan con los
intervalos de referencia establecidos. Un resultado positivo puede indicar la presencia de
enfermedades autoinmunes, aunque se requiere una evaluación clínica adicional para un diagnóstico
definitivo.
Manejo de residuos químicos y/o biológicos infecciosos: El manejo de los residuos químicos y
biológicos generados durante la realización de la prueba de ANA por Elisa debe seguir los protocolos
de bioseguridad y las regulaciones locales aplicables. Los residuos biológicos infecciosos, como las
muestras de suero o plasma, deben ser manejados y eliminados de acuerdo con los procedimientos
establecidos para desechos biológicos. Los residuos químicos, como los reactivos, deben ser
manipulados y desechados de acuerdo con las regulaciones de manejo de productos químicos
peligrosos y residuos químicos establecidas en el lugar de trabajo. Es importante seguir las pautas y
regulaciones específicas para garantizar un manejo adecuado y seguro de los residuos generados.