INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

CENTRO DE ESTUDIOS CIENTÍFICOS Y TECNOLÓGICOS NO. 15 “DIÓDORO ANTÚNEZ ECHEGARAY “ ACADEMICA

DE: TECNICO LABORATORISTA CLINICO LABORATORIO
DE: ANALISIS INMUNOLOGICOS
Nombre de la práctica: Preparación de células sensibilizadas

Clave: AI-P10 Revisión: 23-03-2015 Fecha de emisión: 25-03-2015 Página: 54 de 71

Adame de la Rosa Leví Miguel Equipo 4

1.- MARCO TEÓRICO

Las células sensibilizadas son ampliamente utilizadas en el laboratorio de inmunohematología con el

propósito de verificar la actividad o viabilidad del suero de Coombs en las pruebas donde se incluye una
fase de Coombs. La prueba de la antiglobulina humana es utilizada en el reconocimiento de reacciones
inmunológicas débiles, donde las células solo se sensibilizan (se cubren de anticuerpos) sin completar la
aglutinación o hemolisis. La fase de Coombs o prueba de Coombs detecta globulinas (anticuerpos IgG
y/o complemento C3) fijadas a las membranas de los eritrocitos. Las pruebas de compatibilidad, prueba
de Du débil, determinación de anticuerpos regulares entre otras incluyen una fase de Coombs.
Por otro lado se debe asegurar la confiabilidad de una prueba de Coombs negativa (sin aglutinación);
adicionando al tubo de reacción una gota de células sensibilizadas “Consumo del Coombs” y después
de un ciclo de centrifugación se obtenga un botón de aglutinación de por lo menos 3 cruces para
considerar como aceptable la reactividad del suero de Coombs. En caso de una prueba de Coombs
positiva no procede realizar consumo de Coombs.

La preparación de células sensibilizadas se realiza con glóbulos rojos grupo “O” Rh positivos que
reaccionan con el suero anti D comercial diluido permitiendo solo la sensibilización de las células
(primera fase de la reacción) y no la aglutinación (segunda fase de la reacción). Para lo cual la agitación,
proporción de antígeno–anticuerpo, distancia entre las células, temperatura y tiempo deben ser
controlados ya que son factores que afectan la reacción de aglutinación.

2.- COMPETENCIA A ALCANZAR

Preparar suspensión de células sensibilizadas útiles para el control de calidad de la prueba de Coombs
del área de Inmunohematología.

F-34 Versión 02
Introducción

F-34 Versión 02
Diagrama de flujo

3.- EQUIPO, MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales Equipo
Equipo vacutainer para la toma de muestra Baño maría
Ligadura Termómetro
Torundas de algodón en alcohol al 70% Centrífuga
1 tubo vacutainer con EDTA Cronómetro
Gradilla Reactivos
2 tubos de 13X100mm Solución salina al 0.85%
Pipeta Pasteur de punta larga (9”) con bulbo. Suero de Coombs
Suero comercial Anti-D

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4.-DESCRIPCIÓN DE EXPERIMENTOS

4.1 Obtener una muestra sanguínea de una persona de grupo “O” Rh positivo en un tubo vacutainer con
EDTA.
4.2 Centrifugar por 5 - 10 minutos a 3500 rpm.
4.3 En un tubo de 13X100mm agregar 10 gotas de glóbulos rojos.
4.4 Hacer 3 lavados con solución salina fisiológica. Para eliminar el sobrenadante; es recomendable
utilizar pipeta Pasteur y evitar decantar para no eliminar parte del paquete celular.
4.5 Después del último lavado eliminar el sobrenadante y resuspender las células.
4.5 Adicionar al tubo aproximadamente 2 mL Solución salina fisiológica.
4.7 Adicionar 10 gotas de suero anti-D, homogeneizar e incubar a 37°C de 30 a 60 minutos, con
agitación constante para evitar la formación del botón de aglutinación; solo permitir la formación de
una aglutinación granienta.
4.8 Posterior a la incubación, hacer 3 a 4 lavados con solución salina fisiológica, para eliminar el suero
anti-D.
4.9 Una vez concluidos los lavados, resuspender las células con solución salina fisiológica para obtener
una suspensión del 3% aproximadamente (color orange crunch).
4.10 Verificar que las células se encuentran sensibilizadas.
 En un tubo de 13X75 mm; adicionar una gota de células sensibilizadas y de 1 a 2 gotas de suero
de Coombs.
 Centrifugar a 3500 rpm por 30 a 60 segundos.
 Interpretar resultados de reacción.
 Debe observarse un botón de eritrocitos aglutinados de por lo menos 3+ para considerar que las
células son útiles.
4.11 Una vez preparadas las células; colocar en un frasco con gotero y etiquetar (equipo, fecha de
caducidad y temperatura de almacenamiento).
4.12 Almacenar en un frasco con gotero a 4-8°C por máximo 48 horas.

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5.- REGISTRO DE RESULTADOS Y OBSERVACIONES
 6.- ANALISIS DE RESULTADOS

En los resultados se puede apreciar en el primer tubo un botón de eritrocitos con una aglutinación 3+, lo
cual nos arroja a ser un resultado positivo y nos indica que las células sensibilizadas son útiles.

Por otro lado en el segundo tubo podemos observar la ausencia de esta aglutinación, lo cual nos indica que
las células sensibilizadas no funcionan, pues estas nos sirven para evaluar la calidad del suero de Coombs
en pruebas de inmunohematología

Para esta, así como las demás pruebas se debe seguir un correcto control de calidad. Inicialmente en la
fase preanalíticas se deberá tomar en cuenta que la toma de muestra se realice de forma adecuada,
evitando la hemólisis en la misma, ya que esto interferirá en el resultado. Por otro lado, debemos tomar en
cuenta que el tubo en el que se tomará la muestra deberá ser el tubo de tapón rojo y además de esto
deberá ser de un paciente de grupo “O” y Rh positivo.

Seguido de esto en la fase analítica se deberá tener una correcta manipulación de los materiales, además
de efectuar una técnica idónea que nos permitirá garantizar la confiabilidad de los resultados, aunado a
esto se deberá tener conocimiento de la interpretación del resultado. También en cuanto al procedimiento,
es necesario tener cuidados en cuanto a la centrifugación y en los lavados con solución salina fisiológica al
0.85%. La eliminación del sobrenadante deberá hacerse con una pipeta Pasteur y no decantando.

Finalmente, en la fase postanalítica el reporte de resultado es importante que se realice cuidadosamente y

de forma adecuada. Siguiendo todos estos pasos se conseguirá tener un resultado confiable, verídico y
certero.

7.- CONCLUSIONES

La preparación de células sensibilizadas es utilizada principalmente en los laboratorios de

inmunohematología como control analítico en un resultado negativo ante la prueba de antiglobulina
humana. La preparación de estas células se realiza con eritrocitos del grupo “O” con Rh positivo, haciendo
reaccionar a estos eritrocitos con suero Anti-D.
Debemos tomar en cuenta que es de gran importancia que se preparen las células con la mayor calidad
posible, pues estas células se utilizaran en pruebas que tienen una fase de Coombs dentro de ellas (la fase
de Coombs o prueba de Coombs detecta anticuerpos IgG y/o complemento C3 fijadas a las membranas de
los eritrocitos), como lo son las pruebas de compatibilidad, la prueba de Du débil y pruebas de Coombs
directamente; por lo que si falla, nos llevará a tener un resultado erróneo; llegando así, a tener
consecuencias fatales para el paciente por ejemplo, un mal manejo de los materiales, o no realizar los
lavados de eritrocitos adecuados puede encubrir una Enfermedad Hemolítica del Recién Nacido.
Está enfermedad se presenta por una incompatibilidad entre la sangre del feto y la sangre de la madre,
siendo así que la madre posee un Rh negativo, mientras que el feto posee un Rh, positivo. En un primer
embarazo, es posible que no ocurra un proceso grave, pero ante un segundo embarazo, la madre ya habrá
creado anticuerpos de tipo IgG que serían Anticuerpos Anti-D, que al atravesar la placenta comenzarán a
actuar contra el feto.  Esto producirá la hemólisis de los eritrocitos del feto, que a su vez desembocará en
una anemia y una hiperbilirrubinemia; después de una desencadenada acción en el corazón, hígado y
sistema capilar del feto, lo llevará a convertirse en un “óbito fetal”. 
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8.- CUESTIONARIO

8.1 Defina el concepto de sensibilización.

Es el mecanismo por el que una respuesta inmune provocada por un antígeno

aparece con mayor intensidad tras una administración inicial. Esto induce a la
creación de anticuerpos específicos o a una respuesta inmune celular, que es
capaz de producir manifestaciones clínicas ante una nueva exposición con dicho
antígeno.

8.2 Defina el concepto de complemento.

Se define el complemento como un sistema funcional de unas 30 proteínas del

suero, que interaccionan entre sí de modo regulado formando una cascada
enzimática, permitiendo una amplificación de la respuesta humoral.

8.3 Menciona en que pruebas son útiles las células sensibilizadas.

En las pruebas de Coombs y en las pruebas de compatibilidad

8.4 Menciona otras causas que afectan la reacción de aglutinación.

Muestras lipémicas o contaminadas

8.5 ¿Porque es importante lavar las células sanguíneas?

Para evitar falsos positivos causados por la contaminación de los eritrocitos.

9.- BIBLIOGRAFIA O REFERENCIA

 Frenes, P. S., Contreras, Y. C., de Jesús Sánchez Bouza, M., Castellón, M. O., Morera, K. R.,
II, & González, S. C., II. (s/f). Preparación de células control para la prueba de antiglobulina
humana. Recuperado el 19 de mayo de 2021, de
Medigraphic.com website: https://www.medigraphic.com/pdfs/patol/pt-2014/pt144h.pdf  
 Prueba de antiglobulina de Coombs (Indirecta y directa). (s/f). Recuperado el 19 de mayo de
2021, de Kaiserpermanente.org website: https://espanol.kaiserpermanente.org/es/health-
wellness/health- encyclopedia/he.prueba-de-antiglobulina-de-coombs-indirecta-y-
directa.hw44015
 Pérez, R. B., Paniagua, M. J., Benítez, J. M., Álvarez, J. R., & Galicia, L. B.
(2003). Medigraphic. Obtenido de El sistema del complemento. Vías clásica y de la
lectina que se une a
la manosa: https://www.medigraphic.com/pdfs/alergia/al-2003/al032b.pdf