INTRODUCCIÓN

En los últimos años, la cuestión del papel de la luz en la fotosíntesis ha llevado a la

hipótesis de un modelo en el que se conocen varios componentes, se supone la presencia
de otros, pero sobre algunos no se sabe nada. Según este modelo, la luz proporciona la
energía necesaria para los electrones de la clorofila a 680 en el fotosistema II, que son
transportados al fotosistema a través de una serie de transportadores (Q, plastoquinona,
citocromo b, plastocianina y citocromo f). Cuando la clorofila 700 de I. es excitada por la
luz, el ángulo de torsión provoca una nueva transferencia de electrones al NADP,
formando NADPH H.
Se sabe que los electrones perdidos por la clorofila como resultado del fotosistema II se
recuperan mediante la división del agua (fotólisis). En resumen, en la fase luminosa de la
fotosíntesis, los electrones se transfieren desde las moléculas de agua al NADP, y la luz
proporciona la energía necesaria para llevar a cabo el proceso. ¿Cómo detectamos esta
transferencia de electrones?
En 1939, Robert Hill hizo la misma pregunta en Inglaterra y, para responderla, razonó
aproximadamente de la siguiente manera: "Durante el transporte de electrones, las
sustancias naturales responsables del transporte de electrones dan y reciben electrones.
Ahora podemos detectar esta transferencia si introducimos artificialmente sustancia que
acepta electrones y cambia de color. Por lo tanto, para una sustancia como el azul de
metileno, se puede confirmar que cuando se aíslan los cloroplastos y la luz, el azul de
metileno cambia de azul a incoloro, lo que indica que ha ganado electrones. En ausencia
de luz, los electrones de la clorofila no se excitan y el azul de metileno no cambia. Se
puede lograr un efecto similar al azul de metileno utilizando otro tinte llamado DCPIP
(diclorofenol indoxil).
DCPIP es de color azul y se vuelve incoloro al recibir electrones. Pero ¿qué tiene que ver
lo anterior con determinados herbicidas? Pues bien, como se puede entender, la
presencia de sustancias que detienen el transporte de electrones impedirá (según la
situación): la producción de ATP, la formación de NADPH H, la degradación de las
moléculas de agua, etc., lo que conduce a este tipo de enfermedades, tarde o temprano la
muerte. De este modo, las sustancias están diseñadas para interrumpir el flujo de
electrones de una de estas formas cuando se pulverizan sobre las plantas.
Por ejemplo, los inhibidores del transporte de electrones. En este caso, el compuesto
actúa desactivando uno o más portadores de electrones. Uno de los herbicidas más
conocidos es el diurón.
O también se pueden mencionar los agentes que impiden la formación de ATP. Los
compuestos pueden funcionar en este grupo; desacoplar el transporte de electrones de la
fotofosforilación (es decir, el transporte de electrones continúa pero no se forma ATP y la
energía se gasta en forma de calor), previene directamente la formación de ATP o, en el
tercer caso, hace ambas cosas simultáneamente. Entre los compuestos que actúan de la
manera anterior se encuentran: perfluidona, difenilo, v-fenilcarbamato, acilanilida, imidazol
y bencimidazol sustituidos, benzonitrilo y metazacloro sustituidos, etc.
Por otra parta los aceptores de electrones compiten con ciertos compuestos de la cadena
de transporte de electrones y los aceptan para reducirlos. Estos compuestos incluyen
diquat y paraquat. Tenga en cuenta que si agregamos una solución de DCPIP y diurón
(que actúa después del diurón) a los cloroplastos, el DCPIP (que actúa después del
diurón) permanecerá azul incluso en presencia de luz, porque Diocuron "robó"
previamente los electrones excitados.
MATERIALES Y MÉTODOS.

1. Aislamiento de los Cloroplastos.

5 gr. de hojas de espinacas

1 mortero
1 centrífuga
4 tubos de centrífuga
2 tubos de ensaye
1 embudo
1 pedazo de gasa
hielo en una bandeja
Buffer fosfato pH 6.5 (frío)
Sacarosa 0.5 M (frío)

Metodología

a) Muela en un mortero 5 g de hojas

con 30 mL de sacarosa 0.5 M.

b) Filtre con la gasa para quitar los

restos más grandes.

c) Deposite 13 ml. Del extracto, en un

tubo de PLÁSTICO Ilustración 1. Aislamiento de los cloroplastos.

d) Centrifugue la solución a 2500 rpm durante 10 minutos y deseche el sobrenadante

(los

cloroplastos están en el fondo).

e) Resuspenda el precipitado o residuo con los cloroplastos adicionando 10 mL de

buffer fosfato frío.

f) Coloque los tubos con la solución de cloroplastos en hielo hasta que los use en el
siguiente paso.

2. Reducción del DCPIP y Efecto del Herbicida.

Solución de cloroplastos aislados.

2,6-Dicloro fenolindolfenol (DCPIP) 2.2 x 10-4M (0.007 g/100 ml agua).

4 Pipetas de 5 mL.
2 Pipetas de 2 mL.
1 Vaso de precipitado de 250 mL.
4 Tubos de ensaye.
Solución de Atrazina o Diurón (0.312 g/100 ml de agua).
Papel aluminio.
Foco y conexiones.

Metodología.

a) Numere los tubos de ensaye (del 1 al 3) y los reactivos conforme se muestra en el

Cuadro No. 1:
b) El tubo 1 se cubre con papel aluminio.
c) Los tubos 2 y 3 se dejan a la luz.
d) Coloque los tres tubos en un vaso de precipitado con agua suficiente para cubrirlos (sin
que penetre el agua o floten) y acerque todo a la lámpara encendida. Espere 5 a 10
minutos y compare las coloraciones de los tubos.

Ilustración 2. Reducción del DCPIP y efecto del herbicida.