Revista Tendencias en Docencia Año 4

e Investigación en Química Número 4

2018

Actividad experimental enfocada en la enseñanza

de la glucólisis
Gaviria Romero Lujambio Silvia Idalia, Gaviria González Llaraí Carolina, Jacobo Reyes Diana Xiadani,
López Arredondo Erick José, Vázquez Medrano Josefina, Perales Vela Hugo Virgilio*.

Universidad Nacional Autónoma de México, Módulo de Biomoléculas, Carrera de Biología, Facultad de Estudios
Superiores Iztacala. Avenida de los Barrios Número 1. Los Reyes Iztacala, Tlalnepantla, Estado de México. C.P. 54090.

*Autor para correspondencia: hugo.perales@gmail.com

Recibido: RESUMEN
27/junio/2018
Uno de los objetivos más desafiantes durante la enseñanza de la
Aceptado: bioquímica es la integración de los procesos bioquímicos, por lo que
21/julio/2018 asociarlos con las experiencias cotidianas de los estudiantes puede
facilitar su comprensión. La glucólisis es un proceso ubicuo tanto en
la vida como en los programas de bioquímica del todo el mundo. A
pesar de la importancia de este proceso, son escasas las actividades
Palabras clave experimentales enfocadas en dicha ruta metabólica. El objetivo de
Glucólisis, inhibición, este estudio fue desarrollar una actividad experimental centrada en la
metabolismo observación del proceso de glucólisis en bacterias extraídas de un yogurt
comercial. Esta actividad les permite a los estudiantes observar un
proceso bioquímico en un elemento de su vida cotidiana, mientras que
desarrollan su habilidad práctica en la aplicación de técnicas bioquímicas
básicas, así como su comprensión sobre la glucólisis.
Keywords
Glycolisis, inhibition,
metabolism ABSTRACT

One of the most challenging goals in the teaching of biochemistry is the

integration of biochemical processes, therefore associating them with
student’s daily life experiences might facilitate their comprehension.
Glycolysis is a ubiquitous process both in life as in biochemistry programs
around the world. Despite the importance of this process, there are
few experimental activities focused on said metabolic pathway. The
objective of this study was to develop, and experimental activity focused
on the observation of the glycolytic process in bacteria extracted from a
commercial yogurt. This activity allows students to observe a biochemical
process in an element f their daily life, while at the same time developing
their practical skill in the application of basic biochemical techniques as
well as their understanding about glycolysis.

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Introducción
La bioquímica es una asignatura fundamental del tronco
común de todas las carreras de las ciencias biológicas.
Esta asignatura le permite entender a los estudiantes
los procesos químicos fundamentales que ocurren en
todos los seres vivos. No obstante, la enseñanza de la
bioquímica es un reto constante para los profesores de
esta asignatura debido a la complejidad de los procesos
bioquímicos (Glew, 2003).
Dentro de la bioquímica las vías metabólicas relacionadas
con el metabolismo central energético son las más
estudiadas. Debido a la importancia de este tema el
metabolismo energético debería ser uno de los temas más
populares; lamentablemente, esto rara vez se observa en
el aula (Rabinowitz y Vastag, 2012).
El poco interés en estas vías metabólicas usualmente
se debe a que su enseñanza se reduce a hacer que los
estudiantes memoricen las vías metabólicas (Rabinowitz
y Vastag, 2007). No obstante, se ha observado un
incremento en el interés de los estudiantes después de
realizar actividades experimentales que relacionen el
conocimiento teórico adquirido en las aulas con su vida
cotidiana (Gil et al., 1999).
La mayoría de las actividades experimentales escolares
se diseñan teniendo como referente lo que hacen los
científicos, cuando en realidad deberían ser como un guion
especialmente diseñado para aprender determinados
aspectos de las ciencias, con su propio escenario, es por
esto que en el diseño de este experimento se utilizaron
lactobacilos de un yogurt comercial, permitiendo que
los alumnos puedan relacionar con su vida diaria los
resultados que obtienen y el análisis que realizan a partir
de ellos.
Es posible presentar el metabolismo como una secuencia
realista de reacciones (Novelli y Fernandes, 2007). El
protocolo de la práctica permitió la integración del
conocimiento teórico del proceso de glucólisis con la
observación del incremento en la concentración del
piruvato a diferentes tiempos.
Los experimentos en el laboratorio brindan escenarios
para enseñar y aprender, proporcionan a los estudiantes
oportunidades para pensar, debatir y resolver problemas
reales. Se ha demostrado que los estudiantes aprenden
mejor cuando pueden aproximarse al conocimiento y
se puede lograr, si asumen un papel activo, haciendo
lo que aprendieron (Di Bernardo y Guana, 2016). A
causa de que mejorar la instrucción se ha convertido
en una prioridad (Diane y Hakuta, 1997), desarrollar
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nuevas actividades prácticas permite la transferencia de
entrenamiento que es un elemento fundamental durante
la enseñanza de la ciencia.
A través de las actividades de laboratorio, los estudiantes
llegan a comprender los procedimientos de la
investigación científica, como; el control de variables,
la observación cuidadosa, el registro de datos, y el
desarrollo de conclusiones (Hart et al., 2000).
Dicho lo anterior y considerando que la experimentación
es una base importante del conocimiento y la comprensión
científica (Diane y Hakuta, 1997), diseñamos una
práctica de laboratorio enfocada en el análisis de la
glucólisis. Esta actividad tiene una gran sensibilidad a
errores metodológicos, por lo que además es excelente
para evaluar las habilidades prácticas adquiridas por los
estudiantes. En este trabajo presentamos la metodología
para la realización de la práctica y el resultado obtenido
por un grupo de estudiantes.
Ejemplificar de forma práctica cómo funciona una ruta
metabólica; así como el significado de su inhibición,
constituye una estrategia didáctica útil para abordar
temas como la glucólisis.
Metodología
Materiales y reactivos para la actividad
experimental
Material
4 matraces Erlenmeyer de 125 mL.
2 pipetas de 10 mL.
1 micro centrifuga.
3 vasos de precipitados de 25 mL.
1 incubadora a 37 °C.
1 micropipeta de 20 a 200 µL.
1 micropipeta de 200 a 1000 µL.
16 tubos de micro centrifuga de 1.5 mL.
1 bureta de 50 mL.
1 soporte universal.
1 gradilla para tubos Eppendorf.
18 tubos de ensayo de 13 x 100.
1 gradilla para tubos de vidrio.
Reactivos
Solución de 2,4-DNFH (Dinitrofenil hidracina).
Solución de ácido tricloroacético al 5 %.
Solución NaOH 0.6 M.
Solución patrón de piruvato de sodio 50 mM.
Solución de NaF 5 M.
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Medio mínimo M9 (33.9g/L Na2HPO4,15g/L
KH2PO4,5g/L NH4Cl y 2.5g/L NaCl).
Descripción de las actividades para estudiantes
La actividad experimental consiste en 3 etapas.
Durante la primera etapa los estudiantes aíslan y lavan
lactobacilos de un yogurt comercial, posteriormente
durante la segunda etapa inducen glucólisis en las
células teniendo un grupo de células con NaF que inhibe
la enolasa y detiene la producción de piruvato, además
tienen un grupo control sin NaF. Finalmente, en la tercera
etapa cuantifican el piruvato producido por las células
durante el experimento. A continuación, describimos la
metodología seguida por los estudiantes.
A) Separación de lactobacilos
1. Transfiera 100 mL de yogurt a un tubo de centrífuga,
y centrifugue por 10 minutos a 4000 rpm.
2. Deseche el sobrenadante, resuspenda la pastilla en
20 mL de medio M9 y vuelva a centrifugar por 10
minutos a 4000 rpm.
3. Deseche el sobrenadante y resuspenda la pastilla
en 20 mL de medio M9, (resguarde sus células, las
utilizará dos veces).
4. Deposite las células en un vaso de precipitado de
100 mL y cúbralas con un papel aluminio hasta su
posterior uso.
B) Inducción de la glucólisis
1. Tome 5 mL de las células resuspendidas (mezcle
ligeramente el vaso antes de tomarlas) y colóquelos
en un matraz de 125 mL con 50 mL de medio M9.
2. Inmediatamente agite el matraz y pase 500 μL de la
solución a un tubo eppendorf limpio, adicione 500 μL
de la solución de TCA (ácido tricloroacético) al 5 %, y
etiquete el tubo como control.
3. Adicione 1 ml de la solución de glucosa al matraz 1
(considere el momento en el que adiciona la glucosa
como tiempo 0).
4. Repita el punto 1 y etiquete el tubo como glucosa
tiempo 0.
5. Incube el matraz 1 a 37 °C en agitación constante
(200 rpm).
6. Repita el punto 2 a los 30 y 60 minutos posteriores
a la adición de glucosa y etiquete los tubos como
glucosa tiempo 30 y tiempo 60.
C) Inducción e inhibición de glucólisis
1. Adicione 5 mL de sus células resuspendidas al Medio
M9 con glucosa e inhibidor (matraz 2), (considere
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el momento en el que adiciona sus células como
tiempo 0).
2. Inmediatamente agite y pase 500 μL de la solución
a un tubo eppendorf limpio, adicione 500 μL de
la solución de (ácido tricloroacético) TCA al 5 %,
etiquete el tubo como inhibidor tiempo 0.
3. Lleve el matraz a incubar a 37 °C.
4. También procese las muestras a los 30 y 60 minutos
posteriores a la adición de las células al matraz 2.
D) Cuantificación del piruvato
1. Una vez que tenga sus 7 tubos eppendorf listos,
centrifugue a 14000 rpm durante 5 minutos y
pase los sobrenadantes a tubos eppendorf limpios,
identifíquelos bien, estos constituyen sus muestras
problema.
2. Cuantifique la concentración de piruvato de cada una
de las muestras problema, transfiriendo a un tubo de
vidrio 0.5 ml del problema, 0.5 ml de agua y 1 ml de
solución 0.0125 % de 2,4-Dinitrofenil hidracina.
3. Incube sus tubos por 10 minutos a 37 °C.
4. Adicione 1 ml de NaOH 0.6 N.
5. Simultáneamente prepare su curva patrón utilizando
la tabla 1 como guía, no olvide incubar los tubos y
adicionar el NaOH.
6. Lea en el espectrofotómetro a 420 nm.
Tabla 1. Elaboración de la curva patrón de piruvato.
Tubo PV (mL) DH (mL) Agua mL
1 0 1 1
2 0.020 1 0.980
3 0.040 1 0.960
4 0.060 1 0.940
5 0.080 1 0.920
6 0.100 1 0.900
DH: Solución 0.0125 % de 2,4-Dinitrofenil hidracina, PV: Patrón de piruvato 50
mM
Resultados y discusión
Se preparó la curva con concentraciones conocidas
de piruvato, la cual se utilizó para calcular las
concentraciones de piruvato en el medio M9 con Glucosa
y el medio M9 con Glucosa más NaF (fluoruro de sodio)
como inhibidor (Gráfica 1).
El ácido pirúvico o piruvato, es el producto de la glucólisis
(Viloche y Vargas, 2009), por lo tanto, una manera de
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medir la actividad glucolítica de Lactobacillus sp. y de
identificar el efecto de un inhibidor de su metabolismo
puede lograrse por medio de la medición del piruvato.
Con la estandarización de la medición de la actividad
glucolítica en Lactobacillus sp. se puede demostrar que
entre el medio M9 con Glucosa y el medio M9 con Glucosa
más NaF como inhibidor, hay diferencias de producción
de piruvato.
El aumento de la concentración de piruvato cuando no
hay inhibidor (NaF) en el medio, se observa en la línea
azul de la gráfica 2. Este incremento se debe a que las
bacterias, metabolizan glucosa a través la vía Embden-
Meyerhof en cantidades significativas en un corto periodo
de tiempo (Baeza-Jiménez et al., 2011), al añadir glucosa
al medio que contiene Lactobacillus y mantenerlos a una
temperatura favorable, las bacterias crecieron en un
ambiente ideal.
comienzan a tener un rendimiento bajo en la producción
de piruvato, contrastando con los estudios in vitro
previamente descritos, se demuestra claramente que el
fluoruro puede inhibir el metabolismo de carbohidratos
por microorganismos orales al inhibir la enolasa y,
por consiguiente, el transporte de glucosa a la célula
(Hamilton, 1977).
Por otro lado, el cambio en la concentración del
metabolito que se usa para medir la actividad glucolítica
es pequeño, por lo que el resultado es muy sensible, así
que requiere que los alumnos mantengan la atención a
las actividades que realizan.

Gráfica 1. Curva patrón de piruvato.

Sin embargo, en el medio al que se adicionó el inhibidor

NaF se observa que la concentración de piruvato no
incrementa (Gráfica 2).

El fluoruro inhibe a la enolasa, que está en la última

etapa de la vía glucolítica, pero las enzimas ubicadas en
la cadena metabólica antes de la enolasa permanecen
activas, y continúan metabolizando la glucosa hasta que
se agoten los sustratos (Shalini y Harpreet, 2014), es
por esto que se usó como indicador de inhibición de la
glucólisis, la producción de piruvato.

El efecto del inhibidor de NaF en Lactobacillus se Gráfica 2. Concentración de piruvato en tiempos 0, 20, 40, 60
observa en la Gráfica 2 desde el tiempo 0, las bacterias minutos en grupo experimental y control

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Conclusiones
El objetivo de este trabajo fue el desarrollar una actividad
práctica que les permitiera a los estudiantes observar el
proceso de glucólisis en un sistema cotidiano. La práctica
aquí descrita permite a los estudiantes monitorear e
inhibir el proceso de glucólisis en bacterias obtenidas a
partir de un yogurt comercial, lo que no solo favorece que
los estudiantes desarrollen habilidades prácticas, sino
que actúa como una actividad de refuerzo e integración
para el conocimiento teórico de la glucólisis adquirido
durante su formación en el aula.
Agradecimientos
Se agradece a los alumnos y a la profesora Amanda
Moreno Rodríguez por participar en la realización de la
práctica.
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