Curso de Química Analítica 2023 Unidad de Bioquímica Analítica

Licenciatura en Bioquímica CIN – Facultad de Ciencias

LABORATORIO Nº 1
Calibración de material volumétrico y
preparación de soluciones
- Es obligatorio la asistencia al práctico con túnica y lentes de seguridad.
- El protocolo y el fundamento teórico deben haber sido leídos por el estudiante antes del ingreso al práctico.
- Se debe asistir con un cuaderno de laboratorio donde figurarán los datos y cálculos realizados. El mismo
puede ser solicitado al alumno en cualquier momento a fin de corregir el trabajo realizado.

OBJETIVOS GENERALES

La siguiente práctica corresponde a la primera de una serie de ocho instancias, en las que se abordarán temas
básicos de análisis químico de muestras y buenas prácticas de laboratorio.
En las diferentes prácticas, se introducirá al estudiante en los temas básicos de seguridad y manejo del material
de laboratorio químico, así como en el aprendizaje de técnicas de análisis y el desarrollo de estrategias para
la resolución de problemas de química experimental. Asimismo, se pretende generar en los estudiantes hábitos
de trabajo en el laboratorio, como el uso de la túnica, del material de seguridad y del cuaderno de laboratorio,
como bitácora del trabajo experimental.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

La presente práctica introduce al estudiante en el uso adecuado del material volumétrico, el uso de la balanza
analítica y la preparación de soluciones.

Al final del Laboratorio Nº1 el estudiante deberá ser capaz de:

• Reconocer el material volumétrico por su nombre.

• Identificar las diferencias entre material graduado y aforado.
• Manipular el material de manera adecuada, cumpliendo las normas de seguridad del laboratorio.
• Expresar los resultados de sus medidas con el error asociado.
• Realizar los cálculos y preparar soluciones.

Laboratorio 1 1
Calibración de material volumétrico y preparación de soluciones por dilución
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PROTOCOLO EXPERIMENTAL

PRIMERA PARTE

- Calibración de material volumétrico

Los aparatos volumétricos de vidrio siempre deben controlarse en su exactitud antes de emplearse. El material
volumétrico de vidrio se calibra masando la cantidad de agua pura contenida o emitida a una temperatura dada
y calculando el volumen a partir de la masa. Para obtener el volumen de un recipiente a partir de la masa de
agua contenida en él, es importante tener en cuenta que:

(1) la densidad del agua varía con la temperatura

(2) el volumen del recipiente de vidrio varía con la temperatura
(3) el agua que llena el recipiente se masa en aire

En general, cuando se calibra material de vidrio, se debe tener en cuenta estas correcciones y se debe calcular
el volumen contenido o vertido por el material a 20 ºC. Si se trabaja a temperatura ambiente (cercana a los 20
ºC), la variación del volumen del recipiente con la temperatura es despreciable y se expresará el resultado, a
la temperatura de trabajo considerado. Se tendrá en cuenta en los cálculos la variación de la densidad del
agua con la temperatura y la masada en aire y no en vacío.

- Calibración de una pipeta aforada y de una graduada

AFORO

Quantitative Chemical Analysis, 7th edition. © 2007 W. H. Freeman and Company

Laboratorio 1 2
Calibración de material volumétrico y preparación de soluciones por dilución
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1. Mase un matraz aforado con tapón vacío.

2. Tome una pipeta aforada limpia y, por succión con pera de goma, llene la pipeta con agua por encima de
la marca del aforo. Tape con el índice la parte superior del vástago de la pipeta.
3. Incline levemente la pipeta y seque con papel absorbente cualquier gota de agua que haya quedado en la
superficie exterior de la misma.
4. Enrase la pipeta hasta la marca del aforo. Para ello, apoye el pico de la pipeta en la pared lateral del
recipiente que contiene el agua a fin de evitar que quede una gota suspendida del pico de la pipeta y,
regulando la presión del dedo índice, permita la salida lenta del líquido hasta que la parte inferior del
menisco sea tangente al trazo del aforo. Los ojos deben estar a la altura del trazo de aforo de forma de
ver una sola línea (¡¡Cuidado con el error de paralaje!!).

5. Transfiera el contenido de la pipeta al matraz previamente masado. Para ello, se debe vaciar la pipeta
libremente hasta que cese el flujo. Cuando esto ocurra, apoye la punta de la pipeta en el fondo del matraz
(el cual se inclina de forma que el líquido vertido caiga hacia un lado evitando mojar la punta) y sin levantar,
gire con movimiento rotatorio de 90º en sentido horario, levántela y apóyela nuevamente, girándola 90º en
sentido anti horario. El pequeño volumen que permanece luego de este procedimiento en el pico de la
pipeta, ¡¡no debe ser soplado en la pipeta aforada!! Finalmente, retire la pipeta.
6. Mase nuevamente el matraz tapado y determine la masa de agua vertida por la pipeta.
7. Repita el procedimiento cuatro veces más.
8. Verifique, de acuerdo al Test Q, si los valores calculados de las masas son concordantes.
9. Calcule los volúmenes correspondientes, teniendo en cuenta la temperatura a la cual se encuentra el agua
en el momento de la calibración (Tabla 1).

10. Calcule el volumen de descarga de la pipeta con su correspondiente intervalo de confianza al 95 % ( t)

(Tabla 2, sección Tratamiento de datos).
11. Repita el procedimiento completo empleando en este caso una pipeta graduada serológica (donde sí debe
ser soplado el volumen remanente a la hora de la descarga).

Laboratorio 1 3
Calibración de material volumétrico y preparación de soluciones por dilución
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SEGUNDA PARTE

- Preparación de soluciones por masada directa

En este caso, debe tenerse en cuenta que el sólido a masar no es un patrón primario debido a que es
higroscópico (absorbe humedad de la atmósfera) y presenta una masa molar baja, lo cual aumenta el
error relativo en la masada.

Perlas de NaOH

A su vez, las soluciones alcalinas tienen la propiedad de disolver más fácilmente el dióxido de carbono
atmosférico, generándose las siguientes reacciones:

CO2 (g) → CO2 (ac)

CO2 (ac) + H2O → H2CO3 (ac)

H2CO3 (ac)  HCO3- (ac) + H+(ac)

HCO3- (ac)  CO32- (ac) + H+(ac)

La absorción de dióxido de carbono modifica la concentración de base fuerte debido a la generación de

iones hidrógeno en las dos disociaciones que sufre el ácido carbónico.

NOTA La solución alcalina deberá almacenarse en un recipiente de plástico oportunamente

suministrado por el docente. Esto se debe a que disuelve lentamente el vidrio. No debe
permanecer en el material de vidrio más del tiempo necesario.

Laboratorio 1 4
Calibración de material volumétrico y preparación de soluciones por dilución
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Cálculos previos

1- Efectúe los cálculos previos para determinar la masa de hidróxido de sodio (NaOH) que debe
disolverse para preparar 100 mL de una solución 0,100 mol/L.
2- Mase el analito necesario en una balanza analítica en un vaso de Bohemia, agregue agua con una
piseta (entre 20 y 30 mL) y disuelva el sólido con una varilla de vidrio.
3- Trasvase la solución resultante a una probeta de 100 mL.
4- Con una piseta, agregue agua hasta 1 cm por debajo de la marca.
5- Termine de enrasar empleando una pipeta Pasteur y asegurándose de no mojar el cuello de la probeta.
6- Una vez que finalizó el enrase, transfiera la solución resultante al recipiente de plástico oportunamente
brindado por el docente.
7- Calcule la concentración de la solución con su respectivo error asociado.

DATOS: PM (NaOH) = 39,996 (± 0,001) g.mol-1

Cuestionario

1- ¿Por qué se emplea una probeta para preparar este tipo de soluciones?

2- ¿La concentración calculada tendrá cierta exactitud? Justifique su respuesta.

Laboratorio 1 5
Calibración de material volumétrico y preparación de soluciones por dilución
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- Limpieza del material volumétrico de vidrio

Es importante que todos los aparatos volumétricos estén limpios y que las paredes interiores se hallen libres
de grasa. Para verificar esto, se debe enjuagar el mismo con agua. Si la superficie del vidrio está limpia, libre
de grasa, el agua se extiende y deja una película invisible cuando se deja correr sobre ella. Por lo tanto, antes
de emplear cualquier material en un trabajo volumétrico, se debe examinar si las paredes del recipiente de
medida están engrasadas; si el agua no las humedece uniformemente, se debe limpiar.

Para la limpieza, muchas veces es suficiente una solución de detergente común. En caso de que no fuera
suficiente, se puede emplear una solución de dicromato de potasio o de sodio en ácido sulfúrico concentrado,
la cual debe dejarse un tiempo variable en contacto con la superficie de acuerdo al grado de suciedad.

Otra posibilidad es emplear una solución de hidróxido de potasio en alcohol cuya acción es más efectiva y
rápida que la de las soluciones sulfocrómicas y se emplea cuando estas últimas no son efectivas. Esta
solución, como toda solución alcalina, no debe dejarse mucho tiempo en contacto con el vidrio porque lo ataca
lentamente. También son efectivas las soluciones de hidróxido de sodio con permanganato de potasio, en las
cuales se forma óxido de manganeso (IV) sobre el vidrio en los lugares contaminados con grasa u otras
sustancias orgánicas. Dicha capa de óxido se elimina lavando con ácido clorhídrico bastante concentrado.

Siempre que se emplee una solución de limpieza, el recipiente se lavará cuidadosamente, primero con agua
corriente y después con agua destilada para verificar que las paredes queden uniformemente humedecidas.

El material aforado no debe ser secado en estufa ya que puede provocar distorsión en el vidrio y causar un
cambio en el volumen.

Laboratorio 1 6
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TRATAMIENTO DE DATOS

Tabla 1. Valores de la densidad del agua y el volumen de 1 g de agua por cm 3 a diferentes temperaturas

Temperatura Volumen de 1 g de agua (cm3)

(º C) Densidad del agua A la temperatura Corregido a 20ºC
(g/ cm3) indicada *

0 0.999 842 5 - -
4 975 0 - -
5 966 8 - -
10 702 6 1.001 4 1.001 5
11 608 4 1.001 5 1.001 6
12 500 4 1.001 6 1.001 7
13 380 1 1.001 7 1.001 8
14 247 4 1.001 8 1.001 9
15 102 6 1.002 0 1.002 0
16 0.998946 0 1.002 1 1.002 1
17 777 9 1.002 3 1.002 3
18 598 6 1.002 5 1.002 5
19 408 2 1.002 7 1.002 7
20 207 1 1.002 9 1.002 9
21 0.997995 5 1.003 1 1.003 1
22 773 5 1.003 3 1.003 3
23 541 5 1.003 5 1.003 5
24 299 5 1.003 8 1.003 8
25 047 9 1.004 0 1.004 0
26 0.996786 7 1.004 3 1.004 2
27 516 2 1.004 6 1.004 5
28 236 5 1.004 8 1.004 7
29 0.995947 8 1.005 1 1.005 0
30 650 2 1.005 4 1.005 3
35 0.994034 9 - -
37 0.993331 6 - -

*Considera la corrección por el hecho de masar en aire y no en vacío.

Laboratorio 1 7
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- Cifras significativas e incertidumbre de las medidas

El número de cifras significativas es el número mínimo de dígitos que se necesitan para expresar
científicamente un valor sin que se pierda exactitud. La última cifra significativa de una magnitud tiene siempre
una incertidumbre asociada. La incertidumbre mínima sería ± 1 en la última cifra.

Cuando se realizan operaciones con los datos experimentales, se deberá tener en cuenta que el número de
cifras significativas en el resultado debe conservarse. Para ello, debe aplicarse las reglas para cada tipo de
operación.
La incertidumbre absoluta (i.a.) de una medida es una expresión del margen de incerteza aplicado a una
medición.
La incertidumbre relativa porcentual (i.r. %) es una expresión que compara la magnitud de la incertidumbre
con la magnitud de la medición que le corresponde.
Generalmente, cuando se lleva a cabo una medida, suele ser posible estimar o medir el error aleatorio asociado
a la medición, el cual puede basarse en una estimación de la capacidad que se tiene para efectuar la lectura
con el instrumento de medida. Cuando es posible, la incertidumbre se expresa como la desviación estándar
de una serie de mediciones repetidas.
En la mayoría de los experimentos, es necesario efectuar operaciones aritméticas con diversos números, cada
uno de los cuales tiene un error aleatorio asociado. A fin de calcular la incertidumbre asociada al resultado
final, debe tenerse en cuenta lar reglas de propagación de la incertidumbre.

Para adición y sustracción:

𝑖. 𝑎. = √(𝑖. 𝑎.1 )2 + (𝑖. 𝑎.2 )2

Para multiplicación y cociente:

𝑖. 𝑟. % = √(𝑖. 𝑟. %1 )2 + (𝑖. 𝑟. %2 )2

𝑚𝑒𝑑𝑖𝑑𝑎 𝑥 (𝑖. 𝑟. %)
𝑖. 𝑎. =
100

Laboratorio 1 8
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- Tipos de errores, media, desviación estándar

La media de una serie de datos es el valor numérico que se obtiene de dividir la suma de una serie de medidas
por el número de resultados individuales de la serie.

La precisión de una medida es la reproducibilidad de un resultado. Es la concordancia entre dos o más

resultados obtenidos de idéntica manera.

La exactitud se refiere a qué tan cercano del valor “real” se encuentra el valor medido. El resultado de un
experimento puede ser totalmente reproducible, pero equivocado. En tal caso, la precisión del método es alta
pero la exactitud es baja. Un procedimiento ideal debe proporcionar tanto exactitud como precisión.

Los errores inherentes a un análisis se pueden clasificar, según su origen, en tres categorías: los errores
groseros, sistemáticos y aleatorios.

- Los errores groseros son provenientes de la persona que está realizando la medida. Cuando se detecta
un error de este tipo, se debe descartar la medida.

- Los errores sistemáticos hacen que el resultado esté separado sistemáticamente una determinada
magnitud que va a afectar a todas las medidas por igual. Ejemplos de errores sistemáticos pueden ser,
entre otros, error de paralaje del operario al enrasar o inherentes al método. Por ejemplo, en una valoración
ácido base para detectar el punto equivalente, es necesario añadir una pequeña porción de valorante en
exceso para que provoque el viraje del reactivo indicador. Este tipo de errores son generalmente
detectables y se pueden llegar a suprimir totalmente.

- Los errores aleatorios son errores que provocan desviaciones en cualquier sentido y en cualquier
magnitud. El valor final de cualquier medida será incierto en una cantidad que depende de la magnitud
relativa de las estimaciones realizadas en su evaluación. El planeamiento adecuado de una experiencia
servirá para reducir esta incertidumbre a un límite tolerable, pero no hay forma de que pueda ser
enteramente eliminada. La existencia de errores aleatorios hace que, si se realiza una misma medida
varias veces, los valores obtenidos se van a distribuir según una curva de distribución gaussiana.

Laboratorio 1 9
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Curva normal de error

El máximo de la curva se corresponde con la media aritmética de los valores (µ). El otro parámetro de la curva
es el ancho de la distribución respecto a la media. Ese parámetro viene determinado por el término denominado
desviación normal (σ), el cual es una medida útil de la dispersión de los datos, debido a errores aleatorios.
Cuando los valores experimentales están afectados además por un error sistemático, la curva se desplaza
hacia uno de los lados en el eje x, conservando su forma (efecto observado en la curva C). Cuanto más
precisos sean los datos, más angosta es la campana (compare las curvas A y B). Cuanto más exactos sean,
el máximo de la curva se acerca más al valor real.

En una curva gaussiana, el 95,5% de los datos se hallan dentro del intervalo (µ ± 2σ) y el 99,7 en el intervalo

(µ ± 3σ).

Para estimar estos parámetros a partir de una serie finita de datos experimentales, se emplean las siguientes
ecuaciones:
∑𝑛𝑖 𝑋𝑖
𝑋̅ =
𝑛

∑𝑛𝑖(𝑋𝑖 − 𝑋̅)2
𝑠= √
𝑛−1

donde 𝑋̅ es una estimación de la media, µ, y s de la desviación normal, σ. A partir de un número limitado de

mediciones, es imposible encontrar la media real de la población, µ, o la desviación estándar real, σ. Sin
embargo, éstas se pueden determinar a partir de 𝑋̅ y s.

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El intervalo de confianza de µ está dado por:

𝑡. 𝑠
𝜇 = 𝑋̅ ±
√𝑛

donde s es la desviación estándar, n es la cantidad de observaciones, y t es un número denominado t de

Student. Dicho valor va a depender de las veces que se repita el procedimiento y del nivel de confianza para
la medida. El número de grados de libertad va a estar dado por (n –1). A continuación, la tabla de valores de t
de Student:

Tabla 2. Valores de parámetro estadístico t - Student

Nivel de confianza (%)

Grados de libertad 50 90 95 99

Precauciones

Es imprescindible el uso de guantes y túnica.

Bibliografía:

 Unidades de Medida y Concentración, Error experimental y Estadística; Harris, “Análisis Químico

Cuantitativo”, Capítulos 1, 3 y 4, Editorial Iberoamérica.
 Instrumentos de Laboratorios; Harris, “Análisis Químico Cuantitativo”, Capítulo 2, Editorial Iberoamérica.

Laboratorio 1 11
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APÉNDICE
SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Introducción

Cuando un estudiante trabaja con distintos reactivos, debe conocer sus propiedades (explosivo o inflamable),
su toxicidad (irritantes o lacrimógenos), cómo se manipula (si debe usar guantes o usarlo en campana, o
ambos), cómo se destruye el exceso de reactivo y cómo se eliminan los residuos. El conocimiento de estas
propiedades hará que su trabajo en el laboratorio sea más seguro para usted y para sus compañeros.
Antes de ingresar al laboratorio, lea atentamente la técnica del experimento que va a utilizar; de esta forma,
podrá planificar su trabajo, tanto desde el punto de vista operacional como de seguridad.
Recuerde que todas las normas e indicaciones de seguridad surgen de la experiencia, es decir, que a alguien
ya le ha pasado lo que ellas tratan de prevenir y que “alguien” también pensó: “esto no puede sucederme a
mí”.
Cuando trabaje en un laboratorio, además de saber todo lo anterior, debe tener en cuenta una serie de
precauciones generales.

Recomendaciones generales

✓ No trabaje en forma apresurada.

✓ Informe cualquier incidente o accidente inmediatamente al docente o supervisor.
✓ No realice experimentos no autorizados o debidamente supervisados.
✓ No debe trabajar nunca una persona sola en el laboratorio y muy especialmente en el caso de realizarlo
fuera de horas habituales, por la noche, o realizando operaciones con riesgo.
✓ Nunca abandone el laboratorio mientras esté realizando un experimento sin consultar al docente o al
supervisor.
✓ Si tiene que dejar en marcha una operación toda la noche, tenga en cuenta la naturaleza de las sustancias
involucradas y la escala del experimento.
✓ Cuando se realicen operaciones con riesgo, las personas que no intervengan en ellas deben estar
perfectamente informadas de las mismas.
✓ Ante cualquier duda consulte al docente o supervisor.

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Medidas de protección

✓ Debe tener siempre a disposición los lentes de seguridad. Es recomendable el uso permanente de los
mismos.
✓ Debe conocer y ensayar el funcionamiento de equipos extintores.
✓ Utilice los guantes adecuados para cada tarea que requiera el uso de tales prendas.
✓ Debe conocer la aplicación de los productos de primeros auxilios del botiquín y los mecanismos para recibir
posibles ayudas exteriores.

Hábitos de trabajo

✓ Mantenga su espacio de trabajo limpio y ordenado.

✓ Tape inmediatamente los recipientes que contengan reactivos después de usarlos.
✓ Nunca corra en el laboratorio o a lo largo de los corredores.
✓ No trabaje separado de la mesada.
✓ Deje avisos de advertencia cuando deja aparatos prendidos en forma circunstancial u ocasional.
✓ Vuelva a su lugar los reactivos.
✓ Se debe trabajar, siempre que sea posible y lógico, en campana.
✓ Las puertas de las campanas de extracción deben permanecer cerradas todo el tiempo posible.
✓ Cuide que el material que pone a secar en la estufa sea compatible con los que ya están en la misma;
verifique si el material puede soportar la temperatura a la que va a quedar.
✓ No toque con la mano ni pruebe los productos químicos.
✓ ¡¡¡Nunca pipetee con la boca!!!
✓ No lleve tubos de vidrio ni productos en los bolsillos de la túnica.
✓ Maneje con cuidado los termómetros de mercurio, evitando su ruptura.

Material de vidrio

Existen algunas medidas básicas a tener en cuenta en el manejo seguro del material de vidrio en el laboratorio.
Se entiende por segura, una manipulación que evite daños personales y la rotura del material con la
consecuente pérdida del trabajo.

✓ Antes de realizar cualquier operación, revise atentamente el material de vidrio que va a usar.
✓ Separe el material de vidrio defectuoso; no lo ponga junto con la basura.

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✓ Si se rompe una pieza de vidrio sobre la mesada, no retire los trozos con la mano o sirviéndose de
materiales textiles, utilice un cepillo de cerda o de plástico.
✓ No fuerce la separación de vasos o recipientes que hayan quedado obturados unos dentro de otros.
✓ Tenga puestos los lentes de seguridad siempre que esté manipulando material de vidrio, aun cuando sólo
se trate de transportarlo.
✓ Debe evitarse el calentamiento y enfriamiento locales. Para ello, no caliente con mechero Bunsen sin
utilizar tela de amianto ni apoye directamente sobre la mesa de trabajo el material de vidrio caliente.
✓ No apoye los matraces sobre superficies frías, generalmente se producen rajaduras.

Operaciones que involucran calentamientos

✓ No caliente un aparato cerrado.

✓ No caliente solventes inflamables o sustancias que lo contengan con un mechero o cerca de una llama.
✓ No caliente ni mezcle nada cerca del rostro.
✓ Asegúrese del enfriamiento de los materiales antes de tomarlos directamente con las manos.

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