INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA GENERAL
PRÁCTICA No.2 REACCIONES DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS
ALVA SIFUENTES CARLOS ALBERTO
CHAGOYA SALAME XIMENA
GRUPO: 3IM1
SECCIÓN:2
1.- Introducción formadas en realidad por componentes
más pequeños, los aminoácidos.
Las proteínas son polipéptidos de peso
Desde el inicio del estudio de los
molecular elevado, macronutrientes
aminoácidos, pasaron más de 100 años,
esenciales para el crecimiento y el
para poder conocer las estructuras de
mantenimiento de la estructura corporal.
todos ellos: Siendo en 1806 que se
La proteína se determina por el perfil y
descubrió, en el espárrago, el primer
proporción de los aminoácidos que la
aminoácido, la asparagina y en 1938 el
componen (todos los aminoácidos
último de los veinte esenciales, la
se constituyen del mismo esqueleto
treonina.
fundamental el cual es “Un grupo
carboxilo y una amina
2.- Objetivos.
unidos a un carbono alfa”), aunque
pueden intervenir otros factores como la • Realizar las seis reacciones
solubilidad y el grado de glicosilación. coloridas para
Por medio de este perfil en la proteína, es identificar la presencia de
importante identificar y cuantificar donde aminoácidos que constituyen
se recurre a diversos métodos que se a una proteína.
pueden clasificar en químicos, biológicos • Identificar algunos grupos R que
y microbiológicos. Dichos métodos nos estén presentes en los
ayudan a identificar reacciones coloridas aminoácidos
que dependen de un aminoácido
existente en ellas. 3.- Resultados en forma de tabla.

En la naturaleza existen más de 300

diferentes aminoácidos, de los cuales el
ser humano utiliza solo 20. Los de mayor
interés son los que forman parte
estructural de las proteínas y que desde
1830 dichos compuestos proteicos ya se
habían aislado, nadie se había dado
cuenta de que las proteínas estaban

(Tabla de resultados)
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como para aminoácidos. En aquellos
casos donde no da positiva la prueba de
4.- Fundamentos de las reacciones.
biuret y da positiva la de ninhidrina, indica
Reacción de Plomo que no hay proteínas, pero si hay
Cuando los aminoácidos y las proteínas
aminoácidos libres.
que contienen grupos tiólicos se calientan
en medio fuertemente alcalino, el azufre Reacción de Hopkins-Cole
presente reacciona para formar sulfuros. Es específico del grupo indol
Este sulfuro puede detectarse por la característico del Triptófano. El anillo del
formación de un precipitado negro de indol se hace reaccionar con ácido
sulfuro de plomo por adición de acetato de Glioxálico en presencia de ácido Sulfúrico
plomo. Los grupos tioles también concentrado para formar un compuesto
reaccionan con el nitroprusiato de sodio violeta que se forma en la interfase entre
en presencia de un exceso de amoníaco la solución de proteína y el ácido
para dar un complejo de color rojo. sulfúrico. La estructura exacta del
compuesto violeta no se conoce, pero
Reacción de la Ninhidrina
parece estar relacionado con el producto
La ninhidrina es un poderoso agente y
de condensación del aldehído del ácido
reactivo común para visualizar las bandas
Glioxálico con los nitrógenos de dos
de separación de aminoácidos por
anillos indólicos, como se muestra en la
cromatografía o electroforesis, también es
reacción, ya que también se pueden
utilizada con fines cuantitativos para la
formar complejos con otros aldehídos. La
determinación de aminoácidos.
reacción de Hopkins-Cole es positiva
Reacciona con todos los aminoácidos alfa
sólo para las proteínas que contienen
cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando
Triptófano. Se supone que el ácido
una coloración que varía de azul a violeta
concentrado hidroliza las proteínas en la
intenso. Este producto colorido (llamado
interfase liberando el Triptófano para dar
púrpura de Ruhemann) se estabiliza por
el producto violeta. Sin embargo, el
resonancia, la coloración producida por la
Triptófano puro en solución no da positiva
ninhidrina es independiente de la
la reacción, a menos que se agreguen
coloración original del aminoácido. Esta
agentes oxidantes, por lo que es de
prueba es positiva tanto para proteínas
suponer que el Triptófano de las proteínas
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no se libera como tal, por lo cual la Reacción de Millón
reacción presentada es sólo parcialmente Es específica para el grupo fenólico, por
correcta. lo tanto, la dan positiva todas las
sustancias que poseen esta función,
Reacción de Biuret
como la Tirosina y todas las proteínas que
La reacción debe su nombre al Biuret, una
contengan Tirosina. El primer paso de la
molécula formada a partir de dos de urea
reacción de Millon consiste en la nitración
(H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más
del anillo fenólico de la Tirosina, por el
sencilla que da positiva esta reacción la
ácido Nítrico del reactivo. La Tirosina
presencia de proteínas en una mezcla se
nitrada forma complejos con los iones
puede determinar mediante la reacción
Mercurioso Hg(I) y Mercúrico Hg (II) del
del Biuret. El reactivo de Biuret contiene
reactivo produciendo un precipitado o una
CuSO4 en solución acuosa alcalina (de
solución rojos, ambos resultados
NaOH o KOH). La reacción se basa en la
positivos. Algunas proteínas pueden
formación de un compuesto de color
formar el precipitado rojo desde el inicio,
violeta, debido a la formación de un
mientras que otras primero forman un
complejo de coordinación entre los iones
precipitado blanco, que se debe calentar
Cu2+ y los pares de electrones no
para dar el color rojo indicativo de la
compartidos del nitrógeno que forma
presencia de Tirosina. Cualquier
parte de los enlaces peptídicos. La
sustancia con un grupo fenólico dará
producen los péptidos y las proteínas,
positiva la reacción de Millon y puede
pero no los aminoácidos, ya que se debe
interferir con la detección de Tirosina.
a la presencia del enlace peptídico (-CO-
NH-) que se destruye al liberarse los Reacción Xantoproteica
aminoácidos. Cuando una proteína se Algunos aminoácidos como Fenilalanina,
pone en contacto con un alcalino Tirosina y Triptófano tienen anillos
concentrado, se forma una sustancia aromáticos derivados de benceno y por
compleja denominada Biuret. ello tiene las propiedades químicas del
benceno y sus derivados. Una de estas
propiedades es la reacción de nitración
del anillo bencénico con ácido Nítrico
concentrado. Los anillos bencénicos de
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Tirosina y Triptófano están activados y referencia (Tyr,Trp,Phe) podíamos ver
reaccionan fácilmente, mientras que el que estos tenían la misma coloración y
benceno de la Fenilalanina no tiene por lo tanto había residuos de estos en
sustituyentes que lo activan y reacciona esas proteínas.
con más dificultad.

5.- Interpretación y conclusión de cada

una de las reacciones.

Reactivo de plomo.
En la reacción se observó que la muestra
adquirió una coloración gris o hasta negra
en los tubos de ensayo que contenía la
albúmina y la cisteína, la cisteína es
nuestra muestra referencia y por lo tanto
podemos decir que hay residuos de
aminoácidos que contienen azufre
(cisteína) así como en la albúmina que
también presenta un poco de coloración;
para la gelatina se puede apreciar un poco
sus residuos.
Reactivo de Hopkins-Cole.
Obtuvimos que nuestra muestra de
referencia fue el aminoácido Try ya que
fue el único que presentó un anillo violeta-
rojizo que nos indica puede ser nuestra
muestra de referencia. Por este motivo en
la albumina es donde se encuentra mayor
cantidad de Try, mientras que en la
gelatina existe la menor cantidad de Try.

Reactivo de Millón
En esta ocasión observamos que en el
tubo de ensayo con Tyr existe una
coloración rojiza por lo tanto es nuestro
Reactivo de Ninhidrina.
reactivo muestra y con ello analizamos la
En la prueba se observó que los tubos de
peptona, donde hay más concentración
ensayo que tenían gelatina, peptona y
de este residuo de aminoácido mientras
albúmina presentaban una coloración
que en la albúmina es muy poca la
violácea y por lo tanto si los
presencia.
comparábamos con nuestra muestra de
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6.- Discusión.

Reacción Xantoproteica La reacción de Plomo para grupos SH

Observamos que la reacción en los tubos para la cisteína, donde nuestro control

que contienen muestras de Tyr, Trp por lo positivo fue la albúmina debido a que

tanto estas serán nuestras muestras de presenta grupos sulfhidrilo se realizó en

referencia y si lo comparamos con los medio alcalino para favorecer la

demás reactivos observamos que existe deprotonación permitiendo que los grupos

una mayor concentración de estos 2 S-H fueran expuestos. En la cisteína es

aminoácidos, en la gelatina existe mayor menor la intensidad debido a la

cantidad que en la albúmina. concentración presente de grupos S-H de

Reacción de Biuret.
Como sabemos la reacción de Biuret solo
nos sirve para identificar compuestos que
tengan no menos de 3 residuos de
aminoácidos secuenciados por enlace
peptídico así que en esta reacción no
pudimos obtener una muestra de
referencia porque todos los aminoácidos
marcarían como negativo. Observamos
que en el caso de la gelatina y la peptona
son los que tuvieron una coloración más
violácea a diferencia de la albúmina que
fue una coloración muy pálida (leve).
dicho aminoácido, en comparación con la
Albúmina que es una proteína compleja.
Para la prueba de reacción de Ninhidrina
se tomó como control al triptófano, al ser
una prueba que identifica grupos amino
libres en un compuesto, dio positivo para
todos los aminoácidos y proteínas, pero
no para el agua, debemos recordar que la
coloración es proporcionar a la
concentración del aminoácido, en esta
prueba obtenemos coloraciones azuladas
o violetas. En la prueba de la reacción de
Hopkins-Cole que es específica para
identificar grupos indol, al ser el triptófano
el único aminoácido con este grupo, sé
podría concluir que esta prueba es
específica sólo para este, las soluciones
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problema que dieron positivo a la prueba para gelatina, peptona y albumina estas
fueron la peptona, la albúmina, la gelatina, se tornaron de color violeta mientras que
todas proteínas, y por supuesto el las negativas de azul.
triptófano, la intensidad del color violeta
fue variable entre las sustancias, lo que 7.- Conclusiones generales.

nos habla de la cantidad de triptófano Se puede concluir que al realizar las seis

encontrada en cada una de ellas. reacciones coloridas para

La reacción de millón detecta los grupos identificar la presencia de

fenólicos en un compuesto, tomamos a la aminoácidos que constituyen a una

tirosina como nuestro control debido a proteína se cumple, debido a lo efectivas

que reacciona frente a las sales de que fueron las pruebas para identificar

Mercurio a pH ácido, formando en un una muestra problema (un aminoácido o

principio nitro-tirosina y más adelante una de un oligopéptido, proteína), algunas

sal mercúrica de color rojo. La gelatina, reacciones pueden dar un panorama

albúmina y peptona fueron positivas y se amplio para la identificación de los

observaron diferentes tonos de rojo por la aminoácidos, pero algunas otras apoyan

concentración diferente de la tirosina. en delimitar y enfocarse en aminoácidos

La prueba Xantoproteica da positivo para específicos, lo cual en la industria ayuda

aminoácidos con anillos aromáticos de manera positiva al momento de

activado es decir que tengan resonancia, trabajar con estos aminoácidos que

dio positivo para tirosina y triptófano y constituyen a los 20 que utiliza el ser

nos indicó la presencia de estos humano.

aminoácidos en peptona, albumina y

8.- Bibliografía.
gelatina, los anillos aromáticos
reaccionaron con ácido nítrico
concentrado formando nitroderivados de
color amarillo.
La reacción de Biuret solo da positivo
cuando se tiene mínimo un tripéptido, por
lo menos dos enlaces peptídicos y se
realiza en medio alcalino. Solo dio positivo