Reporte de Laboratorio

PROTEÍNAS;
REVISIÓN DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
Pau Dorado Morán 1, Miguel Eduardo Rodríguez González 1, Omar Emiliano Ortega Torres 1

Resumen
El objetivo general de este compendio de reportes de
laboratorio es dar a conocer nuestra forma de llevar a
cabo trabajos de investigación, planificación y
realización de prácticas de laboratorio, en específico del
laboratorio de Bioquímica, en específico, practicas
acerca de las proteínas, en las cuales debe de resaltar las
pruebas de identificación de estas y el uso de
micropipetas para el fin mismo.
Abstract
The general objective of this compendium of laboratory
reports is to show how we carry out research work,
planning and realization of laboratory practices,
specifically in the Biochemistry laboratory, specifically,
practices about proteins, which should highlight the
identification tests of these and the use of micropipettes for
the same purpose.

Palabras Clave: Práctica, Laboratorio, Bioquímica, Keywords: Practical, Laboratory, Biochemistry,

Identificación, Proteínas, Micropipetas Identification, Proteins, Micropipettes

1
Perteneciente a la Escuela de Ciencias e ingenierías, Campus León, por parte de la Universidad de Guanajuato
Estudiante de Ingeniería biomédica
1
 Reporte de Laboratorio
1. Introducción
Las proteínas, compuestas por aminoácidos, son
fundamentales para la vida y tienen una variedad
de funciones en los organismos vivos [1]. En el
laboratorio de bioquímica, se realizaron varias
pruebas para explorar las propiedades físicas y
químicas de las proteínas.
La Reacción de Biuret es una prueba común para
la detección de enlaces peptídicos. En un medio
alcalino, si la muestra contiene al menos dos
enlaces peptídicos, se forma un complejo de color
violeta-púrpura [2][3].
La Reacción Xantoproteica detecta anillos
bencénicos en aminoácidos y proteínas. El ácido
nítrico actúa sobre el anillo bencénico de los
aminoácidos que lo poseen, formando
nitrocompuestos fenólicos. [4]
La Reacción de Millon, es específica para la
tirosina, un aminoácido. El reactivo de Millon,
que contiene mercurio (Hg) y ácido nítrico
(HNO3), reacciona con el grupo -OH de la
tirosina produciendo una coloración roja
característica. [5]
La Reacción para el azufre de cistina y cisteína, se
realiza para detectar la presencia de azufre en un
estado de oxidación reducido. La cisteína se
cataboliza mediante varias reacciones de
desulfuración que liberan azufre en un estado de
oxidación reducido. [6]
La Reacción de Ninhidrina se utiliza para detectar
la presencia de aminas o α-aminoácidos. En esta
prueba, la ninhidrina, que es un compuesto
químico con la fórmula C9H6O4, se agrega a una
solución de prueba del analito. La aparición de un
color azul profundo indica la presencia de
amoníaco, aminas primarias/secundarias o
aminoácidos en el analito. [7]
Finalmente, la Reacción de Hopkins Cole, se
utiliza para detectar la presencia del aminoácido
triptófano en las proteínas. En esta prueba, una
solución de proteína se mezcla con el reactivo
Hopkins Cole, que consiste en ácido glioxílico. Se
agrega lentamente ácido sulfúrico concentrado
para formar dos capas. Un anillo púrpura aparece
entre las dos capas si la prueba es positiva para el
triptófano. [8]
La segunda parte de la primera práctica se centró
en la desnaturalización de proteínas con metales
pesados. Los metales pesados, que suelen
encontrarse en forma de sales, pueden interactuar
con los puentes de sal entre los aminoácidos.
Además, los metales pesados pueden interrumpir
los enlaces disulfuro debido a su alta afinidad y
atracción por el azufre. Se utilizó cloruro
mercúrico al 5% en albúmina de huevo.
Posteriormente, se repitió la prueba utilizando
AgNO3, acetato básico de plomo, NaCl y
BaCl2.[9]
2. Objetivos
El objetivo de la práctica fue “conocer algunas
propiedades químicas comunes de las proteínas,
especialmente aquellas por las cuales las proteínas
pueden ser distinguidas de otras”, mientras que de la
práctica.
3. Materiales y Métodos
Los materiales usados para la práctica fueron: gradilla
con tubos de ensaye (12 aprox.), parrilla eléctrica, vaso
de precipitado de 600 mL, pipetas de 1 y 5 mL,
espectrofotómetro, gasa, micropipetas de 200 y 50 µL y
tubos Falcon. Mientras que las soluciones utilizadas
fueron: solución de albumina, gelatina, peptona al 1%;
solución de tirosina, triptófano, fenilalanina, cistina y
arginina al 05%; solución saturada de ácido oxálico,
hidróxido de sodio concentrado; ácido acético glacial;
ácido sulfúrico concentrado; piridina; cloruro de bario,
cloruro de sodio, cloruro de mercurio y acetato básico
de plomo al 5%; hidróxido de sodio al 10%; sulfato de
cobre al 0.5%; ácido nítrico concentrado; hidróxido de
amonio concentrado; ninhidrina al 0.1% en etanol;
sulfato de amonio sólido y en solución saturada; etanol
al 96%; oxido rojo de mercurio; nitrato de sodio al 30%;
magnesio metálico en polvo; regulador de acetatos pH
4.7; clara de huevo; albumina sérica bovina 1 mg/mL;
reactivo de Bradford y agua destilada. Esta práctica se
desarrolló por partes, siendo la primera la identificación
por colorimetría, empezando por la reacción de Biuret,
2
 Proteínas

la cual constó de la adición a 1 mL de solución problema

(nuestras proteínas o aminoácidos diluidos y puestos en
tubos de ensaye, marcados y con contenido conocido),
1 mL de hidróxido de sodio al 10% y de 3 a 5 gotas de
sulfato de cobre al 0.5%, se mezclo y se espero al
cambio de color (entre 10 y 15 minutos
aproximadamente). La segunda fue la reacción
Xantoproteica, consto de la adición de 1 ml de HNO3 Figura 2: Reactivos en reacción Xantoprotéica
concentrado a 1 ml de solución problema, siguiente de
esto se calentó la solución, se dejó enfriar, por ultimo se
estratifico cuidadosamente con NH4OH concentrado, y III. Reacción para Azufre de Cistina y Cisteína
se espero hasta detectar el cambio de color. La tercera
fue la reacción para azufre de cistina y cisteína, la cual
consto de 1 mL de solución problema al cual se le
adiciono 1 mL de hidróxido de sodio al 40%, el cual se
calentó ligeramente, posteriormente se le adicionaron 4
gotas de acetato de plomo, después de la adición se
volvió a calentar hasta producir el cambio de color. La
cuarta reacción fue la de Nihidrina, la cual empezó
colocando 1 mL de soluciones problema en los tubos de
ensaye, a los cuales se les adicionó 5 gotas de piridina y Figura 3: Reactivos en reacción para Azufre
0.5 mL de solución de nihidrina, se calentó en baño de de Cistina y Cisteína
agua durante 10 minutos, donde después se genero un
color azulado o rojizo, concluyendo así la colorimetría. IV. Reacción de Ninhidrina
La sexta y última reacción fue la de Hopckins-Cole, en
la cual a nuestras muestras problema se le adicionaron 5
gotas del reactivo de Hopckins-Cole y se mezcló, Se
estratifico con acido sulfurico concentrado y se esperó a
la formación de coloración, finalizando la práctica de
colorimetría.

4. Resultados
A. Reacciones Coloridas Figura 4: Reactivos en reacción de Ninhidrina
V. Reacción de Hopkins-Cole (para Triptófano)
I. Reacción de Biuret

Figura 1: Reactivos en reacción de Biuret Figura 5: Reactivos en reacción de Hopkins-Cole

II. Reacción Xantoprotéica

3
 de igual manera un aminoácido, aunque la arginina es
BIURET XANTOPROTÉICA CYS NINHIDRINA HOPKINS-COLE un aminoácido cargado positivamente.
1. GELATINA + - - + - Para la prueba de Biuret, como se puede observar en la
2. Peptona + + - + + imagen, tenemos un positivo para las primeras tres
3. ALBÚMINA + + - + + muestras problema (Gelatina, Peptona y albúmina) los
resultados observados son mucho más visibles en la
4. TYR - + - / - muestra de gelatina; mostrando un color violeta intenso,
5. TRP - + - + + indicando la presencia de proteínas en solución.
6. PHE - - - + - Mientras que, para las muestras de peptona y albúmina,
7. CIS - - + - - se muestran más bien tonalidades rosadas de azules lo
que nos indica la presencia de péptidos. El reactivo de
8. ARG - - - + - Biuret cambia de color a púrpura en presencia de
9. AGUA - - - - - proteínas debido a la interacción de las moléculas de
Tabla 1: Reactivos que dieron positivo, negativo o parcial a cada proteína con los iones de cobre en el reactivo, estos
tipo de reacción
forman un nuevo complejo que absorbe luz a una
longitud de onda diferente, lo que resulta en el cambio
de color.
B) Desnaturalización de Metales Pesados
Pruebas para proteinas
En segundo lugar, para la prueba xantoproteica, que es
I. Albúmina Pura
una prueba para identificar aminoácidos con
aromáticos, es decir con grupos fenólicos. Podemos
observar como resultado una coloración amarilla a
amarilla oscuro o naranja en las muestras de triptófano,
tirosina y fenilalanina. Lo que nos indica un positivo
para grupos aromáticos en estos aminoácidos y negativo
(sin cambio de color) para compuestos no aromáticos.
Figura 6: Desnaturalización de metales pesados con Albúmina Pura
Para la cuarta prueba de identificación de proteínas,
II. Albúmina 1:4 tenemos la prueba de azufre para cisteína, la cual como
podemos ver presenta una coloración azul oscuro que
confirma la presencia de azufre, cisteína en la solución

Continuando con las pruebas, tenemos los resultados de

Figura 7: Desnaturalización de metales pesados con Albúmina en
relación 1:4
5. Discusión
Práctica 1, parte 1.
Como bien sabemos, la gelatina es colágeno, el cual es
una proteína compleja, es decir, un polímero compuesto
por aminoácidos; así mismo la albúmina y la peptona,
aunque la peptona es mezcla hidrosoluble de
polipéptidos, péptidos, aminoácidos y otras sustancias ;
por otra parte la fenilalanina, tirosina y el triptófano son
aminoácidos con anillos aromáticos, aunque la
fenilalanina es un aminoácido con azufre; la arginina es
la prueba de ninhidrina para la presencia de aminoácidos
en una solución. Cómo podemos observar en las
imágenes, tenemos formaciones de color azul intenso en
las muestras, lo que indica la presencia de amoníaco/
aminoácidos primarios, secundarios en la solución.
Finalmente, para la prueba de hopkins-cole para
tirosina, podemos apreciar la formación de un anillo de
tonalidad púrpura fuerte entre el ácido sulfúrico (abajo)
y la solución proteica (arriba) esto se debe a la
condensación de triptófano debido a la reacción con el
ácido glioxilico el cuál formó un complejo colorido
observable.
Desnaturalización con metales pesados
Para esta segunda parte de la práctica uno, presentamos
la desnaturalización de metales pesados, analizando las
imágenes presentadas podemos apreciar una
precipitación en las muestras que contienen proteínas
4
 Proteínas

(específicamente) lo que indica que debido a la reacción
con metales pesados (Hg, Ag, Br, etc) se formaron sales
metal-proteicas o bien hubieron reacciones de
desplazamiento que rompieron los puentes disulfuro
que permiten el plegamiento de las proteínas, lo que
concluyó en la desnaturalización de las mismas.
6. Conclusiones
Como conclusión podemos decir que todo salió
conforme a lo esperado, exceptuando algunos
detalles del análisis con micropipetas, los colores
correspondientes a las proteínas usadas y los
métodos realizados fueron los adecuados para la
identificación de estas, además de contar con
nuevas experiencias, como las que son el trabajo
colaborativo y la comparación de ideas para un
mejor resultado, dando los anteriores
mencionados. El trabajo con micropipetas,
aunque los resultados fluctuaron de una manera
muy extraña debido a los reactivos o a una
contaminación ambiental de la muestra, lo que
posiblemente llevo a que esta no saliera del todo
correcta, aunque se conto con puntos destacables
de la misma, desde la experiencia propia de
trabajar con ellas.
[5] Oxford University Press. (2022). Millon’s reaction.
Oxford Reference.
https://www.oxfordreference.com/display/10.1093/oi/a
uthority.20110803100158843
[6] Encyclopædia Britannica, inc. (2022). Glutamic
acid. Encyclopædia Britannica.
https://www.britannica.com/science/glutamic-acid
[7] Biochem Insider. (2022). Ninhydrin Test-
Definition, Principle, Procedure, Result, Uses. Biochem
Insider.
https://biocheminsider.com/ninhydrin-test/
[8] Biochem Insider. (2022). Hopkins Cole Test-
Definition, Principle, Procedure, Result, Uses. Biochem
Insider.
https://biocheminsider.com/hopkins-cole-test-
principle-reaction-reagents-and-result-interpretation/
[9] Labster. (2017). Desnaturalización de las proteínas
por interacción con metales pesados
https://theory.labster.com/denaturation_metal/

7. Referencias
[1] Encyclopædia Britannica, inc. (2022). Protein -
General structure and properties of proteins.
Encyclopædia Britannica.
https://www.britannica.com/science/protein/General-
structure-and-properties-of-proteins
[2] Libretexts. (2022). Proteins. Libretexts.
https://bio.libretexts.org/Bookshelves/Biotechnology/B
ioOER_%28CUNY%29/02%3A_Chemistry/2.09%3A
_Proteins
[3] Springer. (1978). The Hopkins-Cole Reaction for
Tryptophan. Springer.
https://link.springer.com/chapter/10.1007/978-3-642-
67356-6_50
[4] Sagar Aryal. (2022). Xanthoproteic Test- Definition,
Principle, Procedure, Result, Uses. Microbe Notes.
https://microbenotes.com/xanthoproteic-test/