Informe de Laboratorio 2 Bioquimica

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA “UNAD”
CURSO: BIOQUIMICA
PRACTICA DE LABORATORIO
INFORME PRACTICA DE LABORATORIO
NELLY CONSTANZA TORRES ZEA

CÓDIGO. 1055313429
CARMENZA AGUILERA
CÓDIGO. 23316297
ÁNGELA LILIANA LEÓN LÓPEZ
CÓDIGO. 46387565
GRUPO VIRTUAL: 201103_ 4
PRESENTADO A:
ING. MARTHA PAVA
TUTORA VIRTUAL
ING. GOLDA MEYER TORRES VARGAS

CEAD SOGAMOSO
09 DE NOVIEMBRE DE 2017
CURSO: BIOQUIMICA
PRACTICA 3.
PROPIEDADES BIOQUÍMICAS DE LAS PROTEINAS
OBJETIVO
-Identificar la presencia de aminoácidos en las proteinas.
Objetivos específicos
- identificar las reacciones biuret, lowry y bradfor.
- Conocer las propiedades de las proteínas.
MARCO TEORICO
Las proteínas son uno de los principales componentes de todas nuestras células.
Los aminoácidos son los bloques de construcción de las proteínas.
Los aminoácidos se agrupan de acuerdo con su comportamiento químico
formando de esta forma las proteínas. Todos los aminoácidos comparten una
estructura química común. Un grupo de amino (representado químicamente
como NH2) está unido a un átomo de carbono (el carbono central o alfa) que
después se une a otro átomo de carbono. Éste se encuentra en la forma de ácido
carboxílico (abreviatura química COOH). El grupo de amino y el grupo de ácido
carboxílico tienen una participación crucial en los enlaces que se forman entre
los aminoácidos cuando se sintetizan las proteínas.
Las proteínas se sintetizan mediante la unión entre sí de las cadenas lineales de
aminoácidos. Los diferentes aminoácidos imparten diferentes comportamientos
químicos a la estructura de las proteínas. Algunos de los 20 aminoácidos
comunes, pueden ser sintetizados por las células. Otros, es decir, los
aminoácidos esenciales, deben formar parte de nuestra dieta.
Las proteínas son polímeros lineales de aminoácidos. Las instrucciones que están
codificadas en nuestros genes especifican el orden en que los aminoácidos
específicos deben unirse entre sí para formar una proteína en particular, tal como
la insulina. El primer aminoácido en la cadena dona parte de su grupo de ácido
carboxílico para formar parte de un enlace químico con el grupo de amino del
aminoácido siguiente en la cadena y así, sucesivamente a medida que el polímero
se sintetiza. Cuando se termina una cadena, el primer aminoácido todavía tiene un
CURSO: BIOQUIMICA
grupo de amino no utilizado, por lo que se conoce como el amino terminal. Del
mismo modo, el último aminoácido de la cadena tiene un grupo ácido carboxílico
no utilizado y por lo tanto, el final de la proteína se conoce como carboxilo
terminal.
Los aminoácidos son necesarios en nuestra dieta todos los días. Las células
humanas pueden sintetizar 10 aminoácidos. Los otros 10 aminoácidos restantes
utilizados habitualmente, debemos adquirirlos a través de nuestra dieta. Éstos son
los llamados aminoácidos esenciales, entre ellos podemos nombrar la arginina, la
histidina la lisina, la metionina, la isoleucina, la leucina, la fenilalanina, la valina, la
treonina y el triptófano. Necesitamos todos estos aminoácidos no sólo con el fin de
crear las proteínas celulares que nuestro cuerpo requiere para su buen
funcionamiento, sino también para la síntesis de otros compuestos e incluso, en
casos seleccionados, para utilizarlos como señales del sistema nervioso.
PRUEBAS GENERALES PARA AMINOÁCIDOS.
prueba de Biuret: es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y

otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de
composición desconocida.
Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con
tartrato de sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a
violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con
polipéptidos de cadena corta. El hidróxido de potasio no participa en la reacción,
pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.
Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un método colorimétrico que permite

determinar la concentración de proteínas de una muestra mediante
espectroscopía ultravioleta-visible a una longitud de onda de 540 nm (para
detectar el ion Cu2+).
Prueba de reconocimiento sh: es un ensayo bioquímico para la determinación
del nivel total de proteínas en una disolución. La concentración total de proteínas
se detecta por la diferencia de color con una disolución de muestra, que es medida
utilizando técnicas de colorimetría.
Prueba de bradfor:
Basado en el Azul Brillante de Coomasie G-250 cambia de rojo a azul, al unirse a
residuos aromáticos y arginina en las proteínas.
CURSO: BIOQUIMICA
La reacción entre el colorante y la proteína es muy rápida (aproximadamente 2

min), y el completo proteína-colorante permanece disperso en solución por un
tiempo relativamente largo.
Rango de detección: 0.5-10 mg proteína/ml.
MATERIALES Y MÉTODOS
Reactivos
Reactivo ninhidrina
NaOH
Sulfato cúprico (CuSO)
Ácido acético(CH3COOH)
Cloruro de sodio (NaCl)
albúmina
Ácido nítrico (HNO3)
Hidróxido de sodio (NaOH)
Acetato de Plomo
α Naftol
Hipoclorito de sodio
Reactivo de Hopkins- Cole
Ácido sulfúrico (H2SO)
Reactivo de Millón
Aminoácidos: Glicina, tirosina, triptófano, fenilalanina y arginina
Fenol
Albumina de huevo
Agua destilada
Ácido fosfórico
Etanol
CURSO: BIOQUIMICA
Materiales
Tubos de ensayo (140 mm*14mm)
Gradilla
Pinza para tubos

CURSO: BIOQUIMICA
Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 ml y 10 ml.
Beaker o vasos de precipitados de 500 mL
Estufa
Pera de goma para pipetas

CURSO: BIOQUIMICA
Vidrios reloj grandes
Probeta 100 ml
Balón aforado de 25 ml
Agitador de vidrio
CURSO: BIOQUIMICA
Balanza analítica
Micropipeta 10 μL, Micropipeta 20- 200 μL, Micropipeta 20- 200 μL, Micropipeta
200-1000 μL, Micropipeta 200-1000 μL
Agitador vórtex múltiple para tubos

CURSO: BIOQUIMICA
PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE BIURET
preparar los tubos de

ensayo
En cada tubo se agregan 3ml de la

solución (aceite de cocina, leche,
glucosa y albumina de huevo)
con una pipeta se agrega 1ml del

reactivo de biuret a cada tubo
Se llevan a baño maria hasta

ebullición
Observar y tomar apuntes de los

cambios
CURSO: BIOQUIMICA
REGISTRO FOTOGRÁFICO DE LAS PRUEBAS

La reacción de Biuret se basa en la formación
de un compuesto de color violeta cuya
intensidad de color depende de la
concentración de la proteína presente.
El Reactivo de Biuret, el mismo que es un

sulfato de cobre en una base fuerte tienden a
reaccionar con los enlaces del péptido, para
finalmente cambiar de color cuando entra en
contacto con otra sustancia, que es lo que
observamos en nuestra práctica.
CURSO: BIOQUIMICA
*DISCUSIÓN DEL RESULTADO:
-Al obtener la caseína de la leche y al hacerle reaccionar con el reactivo de Biuret

se torna una solución de color violeta debido a que el reactivo de Biuret contiene
CuSO4 en solución acuosa alcalina de NaOH que se une con los pares de
electrones no compartidos del nitrógeno formando un complejo de coordinación de
cuatro enlaces peptídicos de dos cadenas proteicas próximas la intensidad del
color depende de la concentración proteica de la caseína.
-Para determinar el punto isoeléctrico de la caseína utilizamos el ácido acético, lo

cual nos permitió que la caseína se acidifique y disminuya el pH hasta llegar a un
punto de equilibrio que en este caso es de 4,6.
CONCLUSIONES:
 Para esta reacción las muestras deben tomar un color amarillo, violeta,
morado o azul. En el análisis encontramos que tomo color en las
muestras de albumina de huevo y en la leche el color fue amarillo.
PRUEBA DE RECONOCIMIENTO SH

ensayo

con una pipeta se agrega 2 ml del

Naoh a cada tubo

ebullición
CURSO: BIOQUIMICA

cambios
CONCLUSIONES
 Para esta reacción el color que debe tomar la muestra es el negro y nos
indica que hay azufres. En las mestras encontramos positivo para
albumina de huevo
Esta abajo esta repetido BRADFOR
PRUEBA DE BRADFOR:

ensayo

con una pipeta se agrega 1ml del

reactivo de brandford a cada tubo

ebullición

cambios
CURSO: BIOQUIMICA
CONCLUSIONES
1.1 PREGUNTAS:
1. ¿Cuáles son los principales métodos colorimétricos usados en la

determinación de proteínas?
Los principales métodos empleados para la determinación de proteínas
totales son los siguientes:
 Método del Biuret
En solución alcalina el Cu+2 reacciona con el enlace peptídico de las
proteínas dando un color purpúreo que se cuantifica
espectrofotométricamente (540nm). Como estándar se utiliza una solución
de albúmina.
Proteína + Cu+2 Complejo Cu-Proteína (púrpura)
Muestra: suero o plasma (heparina o EDTA). Separar el suero del coágulo o
el plasma de las células antes de 3h. Si el paciente está acostado durante la
extracción el resultado será menor.
 Método de Lowry
Dependen de la concentración de tirosina y triptófano de la muestra.
Consiste en dos reacciones:
1. Reacción de Biuret
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2. Reacción de Folin: característica de los grupos –OH reductores de los

aminoácidos tirosina y triptófano que, junto con los complejos Cu+2
reducen el reactivo de Folin generando un color azul.
Está sujeto a muchas interferencias. Se utiliza fundamentalmente en orina.
 Turbidimetría
Medición de la turbidez resultante de la precipitación de proteínas
· Absorción en el ultravioleta
Se mide la absorbancia a 270nm originada fundamentalmente por los
anillos aromáticos de triptófano y tirosina.
 Métodos de unión a colorantes
2. ¿Cuál es la reacción de un alfa-aminoácido y ninhidrina?

El grupo alfa-amino de los aminoácidos forma complejos coloreados con la
ninhidrina: violeta azuloso en la mayoría de los aminoácidos cuyo grupo
amino es primario, amarillo para la prolina e hidroxiprolina y café para la
asparagina que tiene un grupo amido en la cadena lateral. Esta reacción
también identifica los grupos alfa-amino libres presentes en péptidos y
proteínas.
3. ¿Cuál es la reacción con el reactivo de Biuret?

El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas,
péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en
sustancias de composición desconocida. Está hecho de hidróxido potásico
(KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio
(KNaC4O6·4H2O).
4. ¿Qué proteínas dan positivas con la prueba de Hopkins-cole?
La reacción de Hopkins-Cole, también conocida como reacción de Adamkiewiczs,
es una prueba estándar para el triptófano y para las proteínas que contienen
triptófano. La solución que se va a examinar se mezcla con ácido glioxílico y se
agrega ácido sulfúrico concentrado. Un anillo entre violeta y rojo en la unión de los
dos líquidos indica que la reacción es positiva.
5. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de la clara de huevo?
Si en una disolución de proteínas se producen cambios de pH,
CURSO: BIOQUIMICA
alteraciones en la concentración, agitación molecular o variaciones

bruscas de temperatura, la solubilidad de las proteínas puede verse
reducida hasta el punto de producirse su precipitación. Esto se debe a
que los enlaces que mantienen la conformación globular se rompen y la
proteína adopta la conformación filamentosa. De este modo, la capa de
moléculas de agua no recubre completamente a las moléculas
proteicas, las cuales tienden a unirse entre sí dando lugar a grandes
partículas que precipitan. la precipitación de la clara de huevo al
desnaturalizarse la ovoalbúmina por efecto del calor
6. ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de
desnaturalización?
7. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?

Haciendo pruebas como la de Biuret que nos ayudan a determinar las
concentraciones proteicas de una sustancia.
8. ¿Qué coloración da la reacción del Biuret?
Un color de morado a violeta
9. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?
Sí, porque al desnaturalzarse una proteína, ésta cambia su estructura pero
no se rompen los enlaces que la conforman, lo que hace esta prueba es
romper los enlaces peptídicos para comprobar la presencia de estas.
10. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina

¿es positiva o negativa? ¿Por qué?
No porque se necesita tener una cadena de aminoácidos con al menos un
enlace peptídico para que la prueba de positiva. La glicina al no estar unida
con otro aminoácido, dará negativa
CURSO: BIOQUIMICA
PRECIPITACION DE PROTEINA
OBJETIVO
-Identificar la precipitación en las proteinas.
- identificar las reacciones en la harina de maiz
MARCO TEORICO
Reactivos
Etanol
Cloruro de sodio (NaCl)
Hidróxido de sodio (NaOH)
Agua destilada
Materiales
Tubos de ensayo (140 mm*14mm)
CURSO: BIOQUIMICA
Gradilla
Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 ml y 10 ml.

CURSO: BIOQUIMICA
Probeta 100 ml
Agitador de vidrio
Balanza analítica
CURSO: BIOQUIMICA

CURSO: BIOQUIMICA
PROCEDIMIENTO
PRECIPITACION DE PROTEINAS
Pesamos 2gr de
harina de maíz
En un biker colocamos la muestra y

llenamos a 10 ml de agua destilada
Agitar por 10min
Llevamos los tubos y Centrifugamos a 2500r.p.n por

3min, luego sacamos las muestras con cuidado
el sobrenadante lo pasamos a un biker y al precipitado le agregamos

5ml de agua destilada agitamos y nuevamente se lleva a centrifugar
por el mismo tiempo.
Sacamos la muestra y colocamos el segundo sobrenadante en el

primero. se la agrega Nacl al 1% al precipitado se agita manualmente
5 min y luego se lleva a centrifugar.
Al sobrenadante 1 y 2 se le agrega 25ml de agua destilada.

CURSO: BIOQUIMICA
Tomamos otro biker y colocamos el sobrenadante 3.
Luego llevamos nuevamente el precipitado a centrifugar y le

adicionamos etanol y obtenemos el sobrenadante 4.
Tomamos el precipitado y le adicionamos hidróxido de sodio y sale el

sobrenadante 5
Al precipitado se le agrega NAOH, nuevamente se agita y se lleva a

centrifugar para el sobrenadante 6
Tomamos los sobrenadantes 5 y 6 y le adicionamos 25ml de

hidróxido de sodio
CURSO: BIOQUIMICA
REGISTRO FOTOGRAFICO
Precipitación de proteínas sin
desnaturalización, por ejemplo utilizando
sulfato de amonio ((NH4)2SO4), cloruro de
amonio (NH4Cl) o sulfato de sodio (Na2SO4)
Precipitación de proteínas con
desnaturalización que utilizan sales de metales
pesados (sales de plomo, de cobre, de mercurio
y otras), o la temperatura mayor a 80ºC, ácidos
inorgánicos y orgánicos
Podemos ver en la imagen que queda

un residuo en el fondo y un
sobrenadante de la muestra
CURSO: BIOQUIMICA
CONCLUSIONES
 El primer y segundo sobrenadante encontramos albuminas
 En el tercer y cuarto sobrenadante encontramos globulinas
 En el quinto y sexto sobrenadante encontramos glutelinas
CURSO: BIOQUIMICA
bibliogarfia
http://www4.ujaen.es/~esiles/TEMA3PROTEINASalumno.pdf
CURSO: BIOQUIMICA
Práctica 4: IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS
OBJETIVO
- Identificar las características de los carbohidratos.
- identificar presencia de azucares e las muestras
- identificar los diferentes carbohidratos por medio de los reactivos de
benedict, fehling, molihs, tollens, lugol,barfoed.
MARCO TEORICO
Los carbohidratos son uno de los principales nutrientes en nuestra alimentación.
Estos ayudan a proporcionar energía al cuerpo. Se pueden encontrar tres
principales tipos de carbohidratos en los alimentos: azúcares, almidones y fibra.
Las personas que tienen diabetes a menudo deben llevar una cuenta de la
cantidad de carbohidratos que consumen.
Funciones
El cuerpo necesita las tres formas de carbohidratos para funcionar correctamente.
El cuerpo descompone los azúcares y los almidones en glucosa (azúcar en la
sangre) para utilizarlos como energía.
La fibra es la parte del alimento que el cuerpo no descompone. La fibra ayuda a
hacerlo sentir lleno y puede ayudarle a mantener un peso saludable.
Existen dos tipos de fibra. La fibra insoluble agrega volumen a las heces para que
pueda tener deposiciones regulares. La fibra soluble ayuda a reducir los niveles de
colesterol y puede ayudar a mejorar el control del azúcar en la sangre.
PRUEBAS GENERALES PARA AMINOÁCIDOS.
Prueba de Benedict: identifica azúcares reductores (aquellos que tienen su OH

libre del C anomérico), como la lactosa, la glucosa, la maltosa, y celobiosa. En
CURSO: BIOQUIMICA
soluciones alcalinas, pueden reducir el Cu2+ que tiene color azul a Cu+, que
precipita de la solución alcalina como Cu2O de color rojo-naranja.
El reactivo de Benedict consta de:
Sulfato cúprico;
hidrato de sulfato de sodio y o cloruro
Carbonato Anhidro de Sodio.
Además se emplea NaOH para alcalinizar el medio.
Prueba de Fehling: Esta prueba se utiliza para el reconocimiento de azúcares

reductores. El poder reductor que pueden presentar los azúcares proviene de su
grupo carbonilo, que puede ser oxidado a grupo carboxilo con agentes oxidantes
suaves. Si el grupo carbonilo se encuentra combinado no puede presentar este
poder reductor.Los azúcares reductores, en medio alcalino, son capaces de
reducir el ión Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo carbonilo
del azúcar se oxida a grupo carboxilo. En medio fuertemente básico como en
nuestro caso el NaOH el ión Cu2+ formaría Cu (OH)2 insoluble por eso añadimos
tartrato sódico potásico que actúa como estabilizador al formar un complejo con el
Cu2+.
Reacción de Molish: Todos los carbohidratos tanto los monosacáridos como los
disacáridos y polisacáridos reaccionan con -naftol, en presencia de ácido
sulfúrico para formar sustancias complejas coloreadas. Esta reacción se utiliza
para la identificación en general de los carbohidratos. El proceso se fundamenta
en la deshidratación que experimentan los carbohidratos en presencia de ácidos
minerales fuertes, como el ácido sulfúrico y el ácido clorhídrico. Después de
deshidratado el carbohidrato se forma el complejo coloreado, porque el grupo
carbonilo, del carbohidrato, se polariza produciendo un carbocatiòn que se
estabiliza con los pares electrónicos libres del oxigeno del -naftol. Véase a
continuación la descripción de la reacción.
Prueba de Tollens
La prueba de Tollens es un procedimiento de laboratorio para distinguir un

aldehído de una cetona: se mezcla un agente oxidante suave con un aldehído o
una cetona desconocida; si el compuesto se oxida, es un aldehído, si no ocurre
reacción, es una cetona. El complejo de plata amoniacal [Ag(NH3)2]+ en solución
CURSO: BIOQUIMICA
básica es el agente oxidante utilizado en la prueba de Tollens. Si hay un aldehído

presente, éste se oxida a la sal del ácido RCOO-. Al mismo tiempo, se produce
plata metálica Ag(s) por la reducción del complejo de plata amoniacal. La glucosa
de la prueba positiva ya que tiene la función aldehído.
Ensayo con Lugol: El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y
yoduro, permite reconocer polisacáridos, particularmente el almidón por la
formación de una coloración azúlvioleta intensa y el glicógeno y las dextrinas por
formación de coloración roja.
Prueba de Barfoed
Sirve para distinguir monosacáridos reductores de disacáridos reductores,

basándose en la velocidad de reacción; en los monosacáridos la formación del
óxido cuproso es más rápido que en los disacáridos.
La reacción consiste en utilizar acetato cúprico y ácido acético en solución ácida
con lo que los monosacáridos son capaces de reducir al cobre de manera más
rápida y en condiciones menos drásticas.
Por supuesto que al tener la solución un pH ácido resulta necesario controlar
rigurosamente el tiempo de reacción, pues si éste se prolongara se produciría la
hidrólisis ácida del enlace glucosídico con la consiguiente liberación del carbono
anomérico y la aparición de nuevos grupos reductores que falsearían el resultado.
CURSO: BIOQUIMICA
II.1. Materiales
 Muestra: mermelada, miel, compota, arequipe, leche condensada. Harina
de trigo, harina de maíz, lisina. Galletas con sal, pan , galletas de dulce
 Materiales de vidrio: Tubos de ensayo (140 mm*14mm)
 Gradilla
Pinza para tubos

CURSO: BIOQUIMICA
Probeta 100 ml
Agitador de vidrio
CURSO: BIOQUIMICA
Balanza analítica

CURSO: BIOQUIMICA
 Reactivos
Reactivos
Reactivo de Benedict
Reactivo Fehling A y reactivo Fehling B
Lugol
Glucosa
sacarosa
almidón
Fructosa
Reactivo Fehling A y B
α-naftol
CURSO: BIOQUIMICA
Procedimiento
Reacción benedict
Preparar los tubos de ensayo

uno por muestra
Se toma 1ml de la solución y se

agrega de 5 a 6 gotas de benedict
Agitar por 2 min
Llevamos los tubos a baño

maria por 10 min
Con ayuda de las pinzas para tubo colocamos en la gradilla
Observar el cambio de color y tomar nota de la

reaccion
CURSO: BIOQUIMICA
Reacción de la glucosa = positiva
Reacción de fructosa= positiva
DISCUSIÓN DEL RESULTADO:

CURSO: BIOQUIMICA
 La glucosa, la fructosa y la maltosa al someterse a la Reacción de Benedict

dan un resultado positivo debido a que presentan un precipitado de color
rojo ladrillo o anaranjado (óxido cuproso) lo cual es la evidencia de un
azúcar reductor.
 En las muestras de glucosa, fructosa y la maltosa en la reacción de

Benedict tienen la capacidad de reducir al cobre y formar un precipitado de
color anaranjado o rojizo por lo que podemos afirmar que son azúcares
reductores.
CONCLUSIONES
 En la reacción de benedict encontramos que aporta la presencia de
azucares reductores y puede cambiar de color dependiendo la cantidad
de azúcar que la muestra posea.
 Para el arequipe y la leche condensada se agregó más benedict pero al
igual no cambio de color por tener tanto azúcar
 Mediante la reacción de Benedict podemos identificar azúcares
reductores y comprobar que la reducción que se lleva a cabo es por el
efecto del grupo aldehído del azúcar (CHO) en forma de Cu + y el nuevo
ión se observa a modo de precipitado de color rojo anaranjado o
amarillo ladrillo que corresponde al óxido cuproso(Cu2O)
CURSO: BIOQUIMICA
REACCIÓN DE FEHLING

uno por muestra

agrega 1ml de fehling A + B
Agitar por 2 min
Llevamos los tubos a baño

maria por 10 min
Con ayuda de las pinzas para tubo colocamos en la gradilla

reaccion
CURSO: BIOQUIMICA
Lactosa y frucosa =positvo
para glucosa= Positivo
*DISCUSIÓN DEL RESULTADO:
El resultado de la práctica es óptimo, conocemos que la experiencia con el

reactivo de Fehling se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo en las
aldosas, pues tienen la estructura química abierta necesaria para actuar como
agentes reductores, y en algunas cetosas (generalmente positiva en fructosa), lo
que se evidencia con la formación de un precipitado rojo ladrillo (óxido cuproso).
Vemos que la coloración que toman los precipitados depende de la cantidad de
reactivo que se use y por tanto dan un aspecto de buena o baja concentración,
según las imágenes, por lo que hablamos de una cantidad muy buena de azúcar.
Discutiendo los resultados positivos, que se dio en la glucosa, maltosa, lactosa
este reactivo, reacciona principalmente con los aldehídos porque tienen un grupo
carbonilo más expuesto, que le da el carácter reductor, y existe la presencia del
precipitado rojo ladrillo (óxido cuproso)
CURSO: BIOQUIMICA
CONCLUSIONES
 En la reacción de FEHLING nos aporta la presencia de azucares
reductores más específicos
 reacción de FEHLING A+ B se encuentra el sulfato y el taltrato por eso
la coloración que debe tomar es verde o naranja
 Un azúcar es reductor por la formación de un precipitado de color rojo
ladrillo (óxido cuproso) y la decoloración de la solución.
 Podemos concluir que las muestras de glucosa, fructosa, maltosa y

galactosa son azúcares reductores, ya que se formó un precipitado de
color rojo ladrillo (óxido cuproso).
 En cambio la sacarosa es un azúcar no reductor, debido a que no se

formó un precipitado de color rojo ladrillo.
CURSO: BIOQUIMICA
REACCIÓN DE MOLISCH

uno por muestra

agrega de 1ml reactivo de MOLISCH
No mezclar
Observar el anillo de formación y el color y tomar nota

de la reaccion
CURSO: BIOQUIMICA
Glucosa =positivo
Fructosa y sacarosa= positivo

CURSO: BIOQUIMICA
 La sacarosa, maltosa, fructosa y glucosa que fueron los azúcares usados

dieron un resultado positivo con el reactivo de Molish, a pesar de que la
glucosa y la fructosa son monosacáridos y de que la sacarosa y la maltosa
son disacáridos, esto hace que dicha clasificación se deba al tiempo que
tarda en formarse el anillo color rojo violeta ya que el el ácido sulfúrico
concentrado [H SO ] permite que los glúcidos se deshidraten formando
2 4
compuestos furfúricos por tanto diremos que como en nuestro caso las
hexosas dan HMF (hidroximetilfurfural).
 La glucosa y la fructosa presentaron la formación de un anillo de color rojo

violeta en interfase inmediatamente. Lo que nos indica que corresponde a
un carbohidrato (monosacárido).
CONCLUSIONES
 La reacción de Molish es un método cualitativo la cual se utiliza para poder
observar la presencia de carbohidratos en una muestra desconocida y a su
vez poder determinar si en la muestra se forma de manera inmediata el
precipitado con el óxido cúprico (Cu2O) tendríamos un monosacárido y si
se tarda un tiempo más prolongado en formar el precipitado se trataría de
un disacárido.
 En la reacción de MOLISCH cuando se forma un anillo es carbohidrato
CURSO: BIOQUIMICA
REACCIÓN DE TOLLENS

uno por muestra

agrega de 1ml reactivo de tollens
No mezclar
Observar el anillo de formación y el color y tomar nota

de la reaccion
CURSO: BIOQUIMICA
Primero colocamos agua en un vaso y lo

pusimos a calentar con la ayuda de un
sostén de hierro y una tela metálica. Pusimos
a calentar el agua baño María sobre el
mechero. Tomamos dos tubos y colocamos
un aldehído y una cetona, en cada probeta.
En la del aldehído introdujimos: formol (que
es un metanal) y reactivo de Tollens, que es
nitrato de plata amoniacal. Y en el de la
cetona pusimos acetona (propanona) y
también reactivo de plata amoniacal.
En el primer tubo, colocar las drogas

pudimos observar que la mezcla se puso de
color verde. Cuando le dimos calor, esta
mezcla se tornó de color negra, y con olor
muy irritante. Luego se puso de color gris-
verdoso y notamos que en un costado del
tubo comenzaron a formarse pequeños
pedazos de espejo de plata.
CONCLUSIONES
CURSO: BIOQUIMICA
 En la reacción de TOLLENS cuando toma color negro u oscuro hay

presencia de amilosa o amolopectina
 Entonces podemos sacar como conclusión que el reactivo de TOLLENS
solo reacciona con los aldehídos, ya que obtuvimos esos pequeños
pedacitos de espejo de plata depositados en el tubo.
REACCIÓN DE LUGOL

uno por muestra

agrega de 2 a 3 gotas de lugol
agitar o mezclar por 2min

reaccion
CURSO: BIOQUIMICA
En el primer tubo que contiene almidón al

agregar dos gotas de yodo (lugol) nos dio una
coloración azul negruzco esto se debe a que en
esta reacción el yodo entra a la estructura
helicoidal del almidón, es decir, que los átomos
de yodo se introduce entre las espirales
provocando la absorción o fijación de yodo en
las moléculas del almidón (amilosa).
Ésta prueba es utilizada como un indicador del

grado de madurez de los frutos; el fruto
contiene elevadas cantidades de almidón
cuando está inmaduro las mismas que pueden
ser detectadas a través de la tinción haciendo
uso de la prueba de almidón en donde se
observan unas grandes zonas de color azul del
fruto teñido, en cambio cuando el fruto es
maduro no se tiñe la prueba debido a que el
almidón que contiene se ha transformado en
azúcar.
CONCLUSIONES
CURSO: BIOQUIMICA
 En la reacción de LUGOL nos da como resultado l presencia de almidón en

las muestras analizadas
 Con la reacción del Lugol podemos identificar de modo general
polisacáridos, pero de modo específico entre uno de ellos se encuentra el
almidón que lo identificamos en la práctica.
 El almidón al ponerse en contacto con el lugol presenta una coloración

violeta, esto se debe a que cuando el lugol reacciona con las dos
estructuras que forman el almidón, con la amilosa proporciona un color
azul y cuando reacciona la amilopectina con lugol proporciona un color
rojo y la combinación de estos dos colores nos proporciona el color violeta
característico del almidón.

 En la muestra del agua al reaccionar con el lugol, nos dio una reacción
negativa, y como resultado una coloración amarillenta, esto se debe a que
el agua no es un polisacárido.
 En el agua, no se produce una reacción con la experiencia de yodo, esto

debido a que el agua no es un azúcar, y la coloración que se presentó en
nuestro tubo, fue la del color del reactivo de lugol (amarillento)
CURSO: BIOQUIMICA
Reacción Barfoed

uno por muestra

agrega de 5 a 6 gotas de barfoed
Agitar por 2 min

reaccion
CURSO: BIOQUIMICA
Reactivo de Barfoed
 La glucosa al ser un
monosacárido obtuvimos un
resultado positivo, es decir, la
presencia de un precipitado leve
de color rojo de óxido cuproso, lo
cual podemos evidenciar en la
imagen.
 Sabiendo que la maltosa es un

disacárido puede dar o no un
resultado positivo considerando
que si es positivo, entonces su
proceso o reacción es lento, en
nuestra experiencia práctica fue
positiva ya que en el tiempo
determinado que lo observamos
hubo un cambio mínimo de
coloración (5-10 minutos) es
decir que nos presentó un
precipitado rojo característico del
óxido cuproso (Cu2O).
CURSO: BIOQUIMICA
GLUCOSA = POSITIVO (Se formó el precipitado

en un lapso de tiempo de 2 minutos con 10
segundos).
 La glucosa al ser un monosacárido obtuvimos un resultado positivo, es

decir, la presencia de un precipitado leve de color rojo de óxido cuproso, lo
cual podemos evidenciar en la imagen.
 Sabiendo que la maltosa es un disacárido puede dar o no un resultado

positivo considerando que si es positivo, entonces su proceso o reacción es
lento, en nuestra experiencia práctica fue positiva ya que en el tiempo
determinado que lo observamos hubo un cambio mínimo de coloración (5-
10 minutos) es decir que nos presentó un precipitado rojo característico del
óxido cuproso (Cu2O).
CURSO: BIOQUIMICA
CONCLUSIONES
En conclusión, podemos determinar que:
 A través del reactivo de Barfoed principalmente podemos identificar

azúcares reductores y también poder diferenciar si la muestra de azúcar
analizada es un monosacárido o disacárido esto se debe al tiempo que se
tarda la reacción.
 En la práctica realizada hubo la presencia del precipitado rojo (Cu O) por

2
tanto se los considera como azúcares reductores.
 La glucosa al presentar un resultado positivo se trata de un azúcar reductor

debido al leve precipitado de color rojo formado en el interior del tubo, como
este resultado apareció en un lapso de tiempo (0-5 min) se trata de un
monosacárido.
 La reacción correspondiente a la prueba de Barfoed para que obtengamos

un resultado positivo es:
RCOH + 2Cu + 2H O → RCOOH + Cu O↓ + 4H

+2
2 2
+
CURSO: BIOQUIMICA
GRUPOS MUESTRAS BENEDICT FEHLING MOLISH TOLLENS LUGOL BARFOED

(amarillo) A+ B
(color
amarillo
no se
descarta
el verde)
1 s/n + azúcar + + - +
mermelada reductor (café coloración carbohidrato
+ monosacarido
oscuro) amarillo
Amilosa y
amilopectin
a
s/n miel + azúcar + + - -

reductor coloración carbohidrato
+
(amarillo) amarillo
Amilosa y
amilopectin
a
s/n + azúcar + + + + -
compota reductor(amarillo coloración carbohidrato almidones
Amilosa y
) amarillo
amilopectin
a
S/n -No hay + + + - -
arequipe coloración coloración carbohidrato
Amilosa y
verde
CURSO: BIOQUIMICA
amilopectin
a
s/n leche + azúcar + + - +
condensada reductor (amarillo coloración carbohidrato
- monosacarido
claro) amarillo
2 s/n harina + azúcar -presenta +

de trigo reductor color verde almidones
- +
(amarillo) oscuro
Amilosa y
amilopectin
a
-Presenta +
color azul almidones
s/n harina + azúcar + -
de maiz reductor (amarillo carbohidrato
claro)
s/n frijol -No hay -Presenta - + +
color color azul almidones
Amilosa y
oscuro
amilopectin
a
s/n lisina -No hay -Presenta + -
color color negro carbohidrato
-
3 s/n galleta + azúcar + + - +
con sal reductor coloración
CURSO: BIOQUIMICA
(amarillo) amarillo carbohidrato almidones
s/n pan + + + +
coloración carbohidrato almidones
+ azúcar Amilosa y
amarillo
reductor amilopectin
(amarillo) a
s/n galleta + + - +
con dulce coloración carbohidrato almidones
+ azúcar
amarillo
reductor (amarillo
oscuro)
CURSO: BIOQUIMICA
PREGUNTAS
1. Explique por qué el monosacárido gliceraldehido da negativa la prueba
Molish.
La Prueba de Molish es una reacción general para carbohidratos que contienen
más de 5 átomos de carbono, y el gliceraldehido tiene un carbono. Para identificar
monosacáridos se utiliza la Prueba de Barfoed.
2. ¿Cuáles son las aplicaciones prácticas de las pruebas estudiadas?
3. Defina los siguientes términos: carbono anomérico, centro quiral,

levorrotatorio.
 un carbono anomérico hace referencia al carbono carbonílico que se

transforma en un nuevo centro quiral tras una ciclación hemicetal o
hemiacetal.
El azúcar (carbohidrato) en su modo cíclico puede asumir dos orientaciones

en el espacio, que se designan con las letras griegas α (alfa) y β (beta).
Estos son anómeros, correspondientemente uno del otro.
 El centro quiral es la causa de la quiralidad. En cada una de las

moléculas quirales hay un carbono (C) que tiene cuatro grupos o
sustituyentes diferentes. Existen moléculas las cuales tienen un centro
quiral, a pesar de esto se tratan de moléculas aquirales. Si en la
molécula se determina que solo tiene un centro quiral, se puede
asegurar que se trata de una molécula quiral. La presencia o ausencia
del centro quiral va a determinar el criterio de quiralidad.
 Los compuestos que desvían el plano de luz polarizada hacia la

izquierda se llaman levógiros o levorrotatorios, y esa característica se
indica anteponiendo el signo (-) al nombre del compuesto.
4. Dibuje los monosacáridos glucosa, galactosa, ribosa y fructosa,
clasifíquelos según el número de átomos de carbono y la función principal
CURSO: BIOQUIMICA
5. Efectué un enlace hemiacetálico y uno hemicetálico, escriba las diferencias

entre ambos enlaces.
La formación del ciclo se realiza mediante un enlace hemiacetal, que
supone un enlace covalente entre el grupo aldehído y un alcohol( en caso
de las aldosas), o un enlace hemicetal entre el grupo cetona y un
alcohol( en el caso de las cetosas). Este enlace no implica pérdida ni
ganancia de átomos, sino una reorganización de los mismos.
* El ciclo resultante puede tener forma pentagonal (furano) o hexagonal

(pirano), denominandose los monosacáridos furanosas o piranosas
respectivamente.
* El carbono carbonílico correspondiente a los grupos aldehído y cetona se
designa en la fórmula cíclicoa con el nombre de carbono anomérico, y
queda unido a un grupo -OH.
* La posición del grupo -OH unido al carbono anomérico determina un
nuevo tipo de estereoisomeria conocido como anomería.
6. Escriba las funciones: aldehídica, cetónica, alcohólica, ácida, colóquelas en
orden de reactividad y explique el porqué de ese orden.
7. Explique en qué consiste la hidrólisis ácida de disacáridos.
8. Defina los siguientes términos: azúcar reductor y azúcar no reductor, cite

ejemplos.
9. Efectué un enlace glucosídico.

CURSO: BIOQUIMICA
ANALISIS DE RESULTADOS GENERALES
 En la prueba de benedict se encontró que hay azucares reductores en algunas muestras ya que
dieron positivo al tomar una coloración amarilla o café oscuro encontrando oxido cuproso que
está presente en los azucares reductores y en las muestras que no presentaron coloración se
demuestra que son proteínas o aminoácidos y que en esta prueba presentan reacción de
oxidación al no presentar color.
 Con la reacción de benedict tienen la capacidad de reducir al cobre y formar un precipitado de
color anaranjado o rojizo y con esto formaron azucares reductores.
 Mediante la reacción de benedict se identifican azucares reductores y se comprueba que la
reducción es por efecto del grupo aldehído del azúcar (CHO) en forma de Cu y por eso se
+
precipita a color anaranjado o amarillo formando el óxido cuproso.

 Se identificó que en la reacción de fehling también se puede identificar azucares en algunas de
nuestras muestras dando un precipitado de color amarillo mientras en las otros nuestras nos
dio una reacción negativa ya que se produjo una oxidación. En las muestras positivas se
encontraron azucares reductores.
 En la prueba de fehling el poder reductor que pueden presentar los azúcares proviene de su
grupo carbonilo, que puede ser oxidado a grupo carboxilo con agentes oxidantes suaves. Si el
grupo carbonilo se encuentra combinado no puede presentar este poder reductor.
 En la reacción de molisch se logra identificar los carbohidratos dando una reacción positiva en
las muestras del grupo 1, en las del grupo 3 y en algunas del grupo 4 ver tabla formando se el
anillo color violeta y esto se debe a la formación de furfuricos cuando se condensan con el
reactivo de molisch.
 En la prueba de barfoed se obtuvo el precipitado color ladrillo en algunas de nuestras
muestras, en las muestras que dio positivo son monosacáridos y en las muestras que no dio el
color esperado son muestras de disacáridos
CURSO: BIOQUIMICA
5. Conclusiones
 Se identificó mediante la reacción de Fehling los diferentes azúcares,

dándonos una reacción positiva para la mermelada, miel, compota, arequipe,
leche condensada, galleta con sal pan y galleta con dulce reflejado en el
cambio de color de reacción ion mediante un precipitado de color rojo ladrillo;
mientras que para harina de trigo,harina de maíz, frijol, lisina, nos dio una
reacción negativa, esto debido a que no se produjo una oxidación por lo que se
mantuvo el color verde y azul oscuro en toda la reacción.
 Comparamos las características de benedict donde para la mayoría de las

muestra se encontararon azucares reductores y en algunas no hay color ya
sea porque son proteína o aminoácidos
Conclusiones
 En la prueba de benedict se encontró que hay azucares reductores en
algunas muestras ya que dieron positivo al tomar una coloración amarilla o
café oscuro encontrando oxido cuproso que está presente en los azucares
reductores y en las muestras que no presentaron coloración se demuestra
que son proteínas o aminoácidos y que en esta prueba presentan reacción
de oxidación al no presentar color.
 Con la reacción de benedict tienen la capacidad de reducir al cobre y formar
un precipitado de color anaranjado o rojizo y con esto formaron azucares
reductores.
 Mediante la reacción de benedict se identifican azucares reductores y se
comprueba que la reducción es por efecto del grupo aldehído del azúcar
(CHO) en forma de Cu+ y por eso se precipita a color anaranjado o amarillo
formando el óxido cuproso.
 Se identificó que en la reacción de fehling también se puede identificar
azucares en algunas de nuestras muestras dando un precipitado de color
amarillo mientras en las otros nuestras nos dio una reacción negativa ya
que se produjo una oxidación. En las muestras positivas se encontraron
azucares reductores.
 En la prueba de fehling el poder reductor que pueden presentar los
azúcares proviene de su grupo carbonilo, que puede ser oxidado a grupo
carboxilo con agentes oxidantes suaves. Si el grupo carbonilo se encuentra
combinado no puede presentar este poder reductor.
 En la reacción de molisch se logra identificar los carbohidratos dando una
reacción positiva en las muestras del grupo 1, en las del grupo 3 y en
CURSO: BIOQUIMICA
algunas del grupo 4 ver tabla formando se el anillo color violeta y esto se
debe a la formación de furfuricos cuando se condensan con el reactivo de
molisch.
 En la prueba de barfoed se obtuvo el precipitado color ladrillo en algunas de
nuestras muestras, en las muestras que dio positivo son monosacáridos y
en las muestras que no dio el color esperado son muestras de disacáridos
CURSO: BIOQUIMICA
BIBLIOGRAFIA
http://www.guatequimica.com/tutoriales/carbonilo/Propiedades_Quimicas

Informe de Laboratorio 2 Bioquimica

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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA “UNAD”

INFORME PRACTICA DE LABORATORIO

NELLY CONSTANZA TORRES ZEA

GRUPO VIRTUAL: 201103_ 4

ING. MARTHA PAVA

ING. GOLDA MEYER TORRES VARGAS

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA “UNAD”

PROPIEDADES BIOQUÍMICAS DE LAS PROTEINAS

PRUEBAS GENERALES PARA AMINOÁCIDOS.

prueba de Biuret: es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y

Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un método colorimétrico que permite

La reacción entre el colorante y la proteína es muy rápida (aproximadamente 2

Pinza para tubos

Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 ml y 10 ml.

Beaker o vasos de precipitados de 500 mL

Pera de goma para pipetas

Vidrios reloj grandes

Agitador vórtex múltiple para tubos

preparar los tubos de

En cada tubo se agregan 3ml de la

con una pipeta se agrega 1ml del

Se llevan a baño maria hasta

Observar y tomar apuntes de los

REGISTRO FOTOGRÁFICO DE LAS PRUEBAS

El Reactivo de Biuret, el mismo que es un

*DISCUSIÓN DEL RESULTADO:

-Al obtener la caseína de la leche y al hacerle reaccionar con el reactivo de Biuret

-Para determinar el punto isoeléctrico de la caseína utilizamos el ácido acético, lo

preparar los tubos de

En cada tubo se agregan 3ml de la

con una pipeta se agrega 2 ml del

Se llevan a baño maria hasta

Observar y tomar apuntes de los

REGISTRO FOTOGRÁFICO DE LAS PRUEBAS

preparar los tubos de

En cada tubo se agregan 3ml de la

con una pipeta se agrega 1ml del

Se llevan a baño maria hasta

Observar y tomar apuntes de los

REGISTRO FOTOGRÁFICO DE LAS PRUEBAS

1. ¿Cuáles son los principales métodos colorimétricos usados en la

2. Reacción de Folin: característica de los grupos –OH reductores de los

2. ¿Cuál es la reacción de un alfa-aminoácido y ninhidrina?

3. ¿Cuál es la reacción con el reactivo de Biuret?

alteraciones en la concentración, agitación molecular o variaciones

7. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?

10. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina

Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 ml y 10 ml.

Beaker o vasos de precipitados de 500 mL

Pera de goma para pipetas

Agitador vórtex múltiple para tubos

En un biker colocamos la muestra y

Agitar por 10min

Llevamos los tubos y Centrifugamos a 2500r.p.n por

el sobrenadante lo pasamos a un biker y al precipitado le agregamos

Sacamos la muestra y colocamos el segundo sobrenadante en el

Al sobrenadante 1 y 2 se le agrega 25ml de agua destilada.

Tomamos otro biker y colocamos el sobrenadante 3.

Luego llevamos nuevamente el precipitado a centrifugar y le

Tomamos el precipitado y le adicionamos hidróxido de sodio y sale el

Al precipitado se le agrega NAOH, nuevamente se agita y se lleva a

Tomamos los sobrenadantes 5 y 6 y le adicionamos 25ml de

Podemos ver en la imagen que queda