CURSO: Informática

COPROCUTIVO

1 ¿Qué es?
El coprocultivo es el método de elección para el
diagnóstico de las infecciones bacterianas
intestinales, infecciones por Clostridium difficile se
pueden diagnosticar por la detección de las toxinas A
y B en las heces. Las infecciones por Escherichia coli
diarreagénicas se pueden diagnosticar mediante la
detección por reacción en cadena de la polimerasa de
factores de virulencia específicos de los diversos
enteropatotipos.
2
infecciones agudas
del tracto
gastrointestinal
Las infecciones agudas del tracto
gastrointestinal son de las más
frecuentes superadas por las las
infecciones
del tracto respiratorio. Se estima
que en Asia, Africa y Latinoamérica
la probabilidad de que un niño

3
muera antes de los 5 años puede
Consideraciones
llegar al 50% a causa de esta
clínicas enfermedad.

Las manifestaciones clínicas más

destacadas de las gastroenteritis son
4 Diagnóstico microbiológico
causantes de infección
fiebre, vómitos, dolor abdominal y diarrea gastrointestinal
moderada o intensa.
Diarrea acuosa: Forma más común de
La participación de microorganismos
gastroeneteritis, se presenta con
depende de la población estudiada. Hay
evacuaciones casi líquidas. La forma
mayor
más pura produce bacterias
incidencia de gastroenteritis vírica en
secretoras de enterotoxinas (Vibrio
otoño y en invierno, mientras que las
cholerae o Escherichia coli
bacterias afectan princialmente en
enterotoxigénica).
primavera y en verano.
Diarrea invasiva: evacuaciones
intestinales frecuentes y de volumen
menor y contienen sangre, moco y

6
pus.

5 Escherichia coli
MIcroorganismos en coprocultivo
Bacterias
Virus
Salmonella sp.
La utilización de medios
líquidos de enriquecimiento,
como el caldo de selenito, es
fundamental cuando se trata
de estudiar portadores
asintomáticos.
Para su aislamiento se utiliza el
agar MacConkey, agar SS, el
agar Hektoen o el agar XLD.
Campylobacter sp.
Campylobacter jejuni.
Campylobacter coli.
Campylobacter laridis.
Campylobacter upsaliensis.
para el aislamiento de esta
bacteria deben contener
sangre o carbón. Medio de
Butzler, medio de Skirrow y
medio de Campy-BAP.
Bacterias
diarreagénicas
E. coli enterotoxige ́nico.
E. coli enteropatógeno.
E. coli enterohemorrágico.
E. coli enteroinvasivo.
E. coli enteroagregativo.
Para su aislamiento se
ocupan Agar MacConkey.
Shigella sp.
Shigella dysenteriae.
Shigella flexneri.
Shigella boydii.
Shigella sonnei.
Crecen en agar Hektoen o el
agar xilosa-lisina-deoxicolato.

Virus Parásitos
Rotavirus Protozoos
Norovirus Amebas
Adenovirus Microsporidios
Sapovirus Helmintos
Nematodos intestinales
Flagelados
Ciliados
Coccidios
 GRUPOS E.coli

Principales características y
diagnóstico
de los grupos patógenos de
Escherichia coli

¿Qúe es la Escherichia
coli?
Bacilo gram negativo anaerobio facultativo
de la familia Enterobacteriaceae.
coloniza el intestino del hombre y se
considera microorganismo de la flora normal.
Pero hay cepas que pueden causar daño
produciendo cuadros clínicos como diarrea.
clasificación
Con base en su mecanismo de patogenicidad y
cuadro clínico, las cepas de E. coli causantes de
diarrea
se clasifican en seis grupos: enterotoxigénica
(ETEC),
enterohemorrágica también conocidas como
produc-
toras de toxina Vero o toxina semejante a Shiga
(EHEC o VTEC o STEC), enteroinvasiva (EIEC),
enteropatógena (EPEC), enteroagregativa (EAEC) y
adherencia difusa (DAEC).
la serotipificación requiere
de gran numero de
antisueros, se prefiere
identificar las sepas
mediante sus factores de
virulencia .
E.coli enteroxigénica
coloniza la mucosa del intestino delgado por medio de
pilis o fimbrias.
siendo su principal mecanismo de patogenicidad la
sintesis de alguna o ambas enterotoxinas llamadas
toxina termolábil(LT) y toxina termoestable(ST) .
La ETEC son importantes en lactantes, niños menores
de 2 años y en particular los primeros seis meses de
vida.
periodo de incubacion de 14 a 50 horas.
cuadro clinico: diarrea aguda, sin moco, sin sangre ni
pus, a veces fiebre y vómito.
la contaminación fecal de agua y alimentos es la
príncipal fuente de infección

E.coli enteroinvasiva E.coli

enterohemorrágica
el grupo EIEC y Shigella spp están relacionados tanto
geneticamente como bioquimicamente ya que son
Riley describió a EHEC: dolor
descarboxilasa negativa, no móviles y lactosa negativa . abdominal, diarrea acuosa con
el mecanismo de patogenicidad es la invasión del epitelio del sangre y poca fiebre , a este
colon.
cuadro se le llamo colitis
hemorrágica. Ya que la
E. coli enteropatógena citotoxina STX es el principal
mecanismo de patogenicidad de
EHEC, actúa a nivel de síntesis
se asoció con casos de diarrea en infantes, siendo de proteínas ya que se une a la
adherencia su principal factor de patogenicidad, subunidad 60S de los
intima entre la bacteria y la membrana de las
ribosomas.
células del epitelio intestinal seguida con la
destrucción de la microvellocidad, con periodo de incubación: 1 a 8
polimeración de actina. días
su forma de transmisión es fecal-oral. la transmisión puede ser por
cuadro clínico: diarrea aguda, leve o grave, vomito, ingerir carne cruda o mal cocida,
fiebre baja y mala absorción. leche bronca, agua
contaminada..

E. coli enteroagregativa
scaletsky y Nataro encontraron cepas aisladas en pacientes con diarrea.
la adherencia de células Hep-2 y la hemaglutinación de eritrocitos humanos se
debe a la presencia de una fimbria I de adherencia agregativa (AAF/I).
incubación de menos de 8 horas hasta 18 -20 dias.
puede presentarse con diarrea liquida, color verde, con moco, sin sangre y en
ocasiones severa y requerir rehidratación intravenosa.

E.coli con
adherencia difusa Aislamiento,
No forman microcolonias cuando se adhieren identificación y
a células Hep-2 . se puede aislar tanto en caracterización
personas sanas como con diarrea.
Método tradicional: tomado directamente de
sintomas: diarrea acuosa sin sangre y sin
la mateia fecal con hisopo rectal, sembrar con
leucocitos
la punta en agar MacConkey por estría
cruzada. incubar a 37°c durante 18-24 horas.
la identificación se hace en tubo TSI, LIA, MIO
citrato, mucato.
 1 INTRODUCCION
la gastroenteritis aguda es uno de
los motivos de consulta mas
frecuentes.
la etiología infecciosa las diarreas
pueden estar producidas por virus,
bacterias, micobaterias y parasitos

2 indicaciones del
coprocultivo
no todo cuadro diarreico es susceptible a ser
estudiado mediante coprocultivo
El coprocultivo es indicado en los siguientes 4
casos
cuadros graves que requieren hospitalización Siembra
persistencias prologadas de diarrea
pacientes inmunodeprimidos
se realiza con asa de plástico
niños y acianos
o metálica
microorganismos lo mas
aislados posible

3
si las heces son liquidas puede
muestra emplearse una pipeta para
realizar la siembra
La muestra debe ser
recogida en un recipiente
con boca ancha
Cantidad equivalente al
tamaño de una nuez
Si la cantidad es
insuficiente solicita una
nueva muestra
Si las heces no pueden
procesarse
inmediatamente conservar
en nevera 24 horas

5 medios
Se pueden dividir en tres grupos :
escasamente selectivos: inhiben el crecimiento de microorganismos Gram positivos;
agar MacConkey y agar EMB
Moderadamente selectivos: inhiben el crecimiento de Gram positivos y algunos
coliformes; agar entérico de Hektoen, agar Xilosa-LisinaDesoxicolato (XLD), agar
Salmonella-Shigella (SS) y agar de Rambac
Altamente selectivos: de uso más restringido, permiten el aislamiento de Salmonella
; agar sulfito de bismuto (Wilson-Blair) y el agar verde brillante
medios líquidos de enriquecimiento; caldo de selenito, tetrationato y Vassiliadis-
Rappaport.

6 informe de resultados

si se aísla la bacteria con

motivo de estudio se informara
así como si antibiograma
preceptivo
si no se aísla ningún patógeno
se debe emitir el siguiente
resultado; " Ausencia de flora
saprofita habitual, no se aísla
flora patógena
 7 ESQUEMATICA DE
TRABAJO
AGAR SANGRE: Tipo de flora, ausencia de la misma. Oxidasa
(Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio)
MACKONKEY : Identifica colonias lactosa negativo
MEDIO SS: identifica colonias lactosa negativo y sulfhidricas
CAMPYLOBACTER: Identificar colonias brillo rosado metálico; Gram
SELENITO Subcultivo a medio SS

8 Bacterias implicadas en la producción de

diarrea

Salmonella spp
junto con Campylobacter spp la causa de diarrea bacteriana más
frecuente; es una enterobacteria caracterizada por no fermentar
lactosa producción de sulfhídrico y pruebas de indol y ureasa
negativas. Posee antígenos somáticos (O) que son lipopolisacáridos y
antígenos flagelares (H) que son proteínas.
se confirman utilizando antisueros policlonales que contienen
anticuerpos contra los subgrupos más frecuentes
Existen cepas de Citrobacter spp y Proteus spp capaces de aglutinar a
los antisueros descritos.
puede encontrarse en la carne cruda y en huevos.
sigue excretándose en heces durante 4 a 5 semanas.
portador crónico se define a los seis meses tras la infección por lo que
no está indicado hacer controles hasta esta fecha. La 542 vesícula
biliar es el principal órgano donde se acantona el microorganismo. Se
estima que la tasa de portadores crónicos es inferior al 1%

S. typhi
posee un antígeno capsular
o de virulencia (Vi).
produce menor cantidad de
sulfhídrico, que se traduce
en una media luna
sulfhídrica en el TSI o Klige
presenta prueba del citrato
negativa, a diferencia de las
salmonellas entéricas
hombre es el único
reservorio
período de incubación
oscila entre las 8 y las 48
horas
Produce un cuadro de
gastroenteritis de
intensidad variable
causante de la fiebre
tifoidea, en los primeros
estadios de la enfermedad
puede cursar con
estreñimiento.
 9 Campylobacter spp
Es un bacilo Gram negativo curvo microaerófilo y es oxidasa positiva. Las más comúnes
en aislamiento de cuadro diarreíco.
Campylobacter spp: es capaz de crecer a 42o C, para aislar se ocupan medio de Butzler,
agar sangre de Skirrow, medio de Blazer y el medio de 543 Preston. La colonia crece
presentando un brillo metálico de tonalidad rosácea. Su crecimiento se observa en 24,
pero no se puede dar un resultado negativo hasta 48 hrs. Su aislamiento es común en
carne de pollo y en leche, produce una diarrea típicamente con moco y sangre,
que puede tener afectación general con fiebre alta.

10 Sighella spp
Pertenecen a la familia Escherichiae, no fermentan la lactosa y sólo algunosbiotipos de S.
flexneri producen gas. Existen cuatro subgrupos: S. dysenteriae, S. flexneri, S. sonnei S.
boydii.
Para su aislamiento se usan medios entéricos como el agar MacKonkey o el SS. El
período de incubación va desde las 6 horas hasta los 9 días, siendo las 72 horas lo más
normal.
La diarrea viene acompañada de cefalea, meningismo y convulsiones, sobre todo en
niños.

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Yersinia enterocolitica
Son cocobacilos Gram negativos no
esporulados. Para un diagnóstico de
laboratorio el medio más adecuado es el
CIN.
La incubación de este medio se realiza a
30o C durante 18 horas, sus colonias
presentan en este medio un aspecto
característico; son colonias puntiformes,
con el centro rosado, rodeadas de un
halo transparente. Posee varios
reservorios animales, entre los que
destaca el cerdo.
Produce habitualmente un cuadro de
disentería con fiebre y afectación
general.
12
Aeromonas spp
Son bacilos Gram negativos, oxidasa positiva. Se
han relacionado varias especies de Aeromonas
con cuadros diarreicos; A. hydrophila, A. caviae,
A. media y A. veronii, siendo la primera de ellas la
más frecuentemente implicada. Se pueden
recuperar de los medios agar sangre y del medio
CIN. Su identificación definitiva se puede
obtener a través de los métodos
automatizados habituales. Los aislamientos de
Aeromonas spp se han de valorar con
precaución
debido a que su presencia en las heces puede
ser casual

E. coli
Hay seis mecanismos distintos por los que E. coli puede
producir diarrea: E.
coli enterotoxigénico, enteropatógeno, enteroinvasivo,
enterohemorrágico,
enteroagregante y difusamente adherente.
Diarrea del viajero: causada más frecuentemente por E.
coli enterotoxigénico.

E. coli 0157:H7 enterohemorrágico fue el primero de los serotipos productores de

toxina Shiga del que se supo que era capaz de producir enfermedad en humanos.
Para su aislamiento en el laboratorio se utiliza el medio MacKonkey
Sorbitol. Estas cepas de E. coli no fermentan el sorbitol, lo que hace que en
este medio aparezcan como colonias blancas, a diferencia de las que fermentan el
sorbitol (colonias rosas).
El inicio de la clínica producida por este microorganismo viene definida
por cólicos y diarrea que en uno a dos días se torna sanguinolenta.
Según algunos autores el tratamiento con antibiótico podría aumentar la
producción de toxina Shiga, empeorando el cuadro. De hacerse, la elección
serían las quinolonas y las penicilinas.
 7 PLESIOMONAS
SHIGELLOIDES
Plesiomonas shigelloides es la única especie de este género, se trata de un
bacilo Gram negativo oxidasa positiva.
Crece bien en agar sangre y en los medios entéricos.
Presenta colonias no hemolíticas grises, brillantes y opacas, pudiendo estar
sobreelevadas en el medio.
Se ha asociado a un cuadro de diarrea acuosa leve.

Vibrio spp Crecen en agar Mackonkey como

colonias lactosa negativas, excepto
Son bacilos Gram negativos curvos o
V.vulnificus que fermenta la lactosa.
con forma de coma. Son catalasa y
Para su aislamiento específico suele
oxidasa positivas.
utilizarse el medio TCBS (tiosulfato-
Fermentan la D-glucosa, raramente
citrato-bilis-sacarosa). Las colonias de
producen gas y reducen nitratos a
V.cholerae crecen de color amarillo y
nitritos.
con un diámetro de 2 a 3 mm. Desde
Se caracterizan además por ser
este medio no puede realizarse
sensibles al factor vibriostático 0/129
directamente la prueba de la oxidasa.

V. cholerae se divide en 3 subgrupos;

Se puede utilizar agua peptonada alcalina
01, 0139 y Non 01
como caldo de enriquecimiento
El subgrupo 01 se ha asociado con
para Vibrio spp. este caldo contiene
cuadros más graves en pacientes con
peptona al 1% y NaCl al 1% a un pH de
grupo sanguíneo O.
8,6. Este pH alto inhibe el crecimiento de
El subgrupo 0139 ha sido descrito
bacterias intestinales comensales.
recientemente en India y Bangladesh,
El mismo caldo podría utilizarse igualmente
produciendo un cuadro diarreico de
como medio de transporte.
gravedad similar al 01.
Se asocian con cuadro diarreicos V.
El subgrupo Non 01 se caracteriza por
cholerae, V. fluviales, V. furnisii, V.
no producir toxina colérica. Los
hollisae, V. mimicus y V. parahaemolyticus
cuadros diarreicos producidos por
este subgrupo son en general menos
graves que los producidos por el 01.

Clostridium difficile
La diarrea por este microorganismo se asocia generalmente a ciclos de
antibióticos previos en pacientes ingresados, aunque se han descrito casos
en los que falta este antecedente.
Aunque se han relacionado la práctica totalidad de antibióticos con la
diarrea asociada a Clostridium difficile, el más frecuentemente documentado
ha sido la clindamicina.
Es un tema controvertido, debido a que este microorganismo
puede ser comensal intestinal, por lo que su aislamiento no tendría por qué
estar relacionado siempre con patología. El cultivo se debe hacer en
condiciones de anaerobiosis.
El cuadro clínico es muy variado y puede ir desde una diarrea
autolimitada hasta un cuadro diarreico severo. También se han descrito
casos de megacolon e incluso estallido colónico.
En el tratamiento se utiliza metronidazol o vancomicina oral.

Otras bacterias.
Edwarsiella tarda es una enterobacteria capaz de producir cuadros
diarreicos en humanos. Se caracteriza por ser indistinguible de Salmonella spp
en medio SS, aunque se diferencia de la misma por presentar prueba del indol
positiva. Sus principales reservorios son los reptiles y los peces de agua dulce.

La asociación de Moellerella wisconsensis con cuadros diarreicos es

controvertida. Es una enterobacteria que se caracteriza por ser resistente a
colistina.
Otras bacterias relacionadas con cuadros de gastroenteritis cuyo
diagnóstico no suele hacerse mediante coprocultivo son Clostridium
perfringens, Clostridium botulinum, Staphylococcus aureus y Listeria
monocytogenes

NUEVAS HERRAMIENTAS.
Se han incluido nuevos medios de cultivo cromogénicos que son capaces de diferenciar distintos tipos de
bacterias, si bien no han demostrado una mayor tasa en la recuperación de enteropatógenos.
También se han incluido pruebas rápidas para el cribado de cepas no patógenas aprovechando alguna
de sus pruebas bioquímicas.
Como novedad se ha desarrollado el sistema Robobact un nuevo aparato capaz de realizar la siembra e
incubación tras la inoculación de la muestra en medios de enriquecimiento.