DISCUSION

1. PREPARACION DE MEDIO DE CULTIVO, PLAQUETAS Y

SIEMBRA:
Con esta prctica se pretende aprender las tcnicas de preparacin de medios de cultivo, su
esterilizacin y su almacenaje, as como la importancia de los medios de cultivo y su uso.
Adems tambin se pretende que el alumno se familiarice con las tcnicas empleadas en
Microbiologa para el cultivo y la manipulacin de microorganismos en condiciones de
esterilidad.
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. Puesto que la diversidad metablica de los microorganismos es enorme,
la variedad de medios de cultivo es tambin muy grande. La mayora de los medios de
cultivo se comercializan en forma de liofilizados que es preciso rehidratar. La preparacin
de un medio de cultivo se reduce en general a pesar la cantidad de medio y redisolverla en
agua destilada (libre de inhibidores del crecimiento) siguiendo las instrucciones del
fabricante. Las sustancias termolbiles se esterilizan por filtracin y se aaden al resto de
los componentes previamente esterilizados en la autoclave.
En trminos microbiolgicos se entiende por SIEMBRA el proceso mediante el cual se
lleva una porcin de una poblacin de microorganismos (inculo) de un cultivo bacteriano
a un medio nutritivo para su crecimiento.
PARA UNA CORRECTA REALIZACIN DE LA SIEMBRA SON NECESARIAS
CIERTAS CONDICIONES:
Que se lleve a cabo con instrumentos estriles sobre medios de cultivo estriles. Para
estudiar una bacteria determinada, es necesario destruir todos aquellos microorganismos
que pudieran encontrarse en el medio y en los instrumentos de trabajo. Esto se consigue con
la ESTERILIZACION, proceso que consiste en conseguir que todos los microorganismos
presentes mueran desde el punto de vista microbiolgico.

Para la preparacin de los medios de cultivo, primero se esterilizan en el AUTOCLAVE, el

cual hace uso del calor hmedo. El autoclave es un aparato que permite elevar la presin y
la temperatura con lo que se consigue un aumento en la temperatura de ebullicin del agua.
Normalmente, se lleva la presin a 1 atmsfera (por encima de la ambiental) lo que
corresponde a una temperatura interior de 126C, mantenindolo en estas condiciones
durante 20 minutos. Todo el material de vidrio (pipetas, tubos, varillas.etc..) se esteriliza
con calor seco, siendo el "horno Pasteur" el aparato ms empleado (se somete a
temperaturas de 140-180 C durante 2h-3h). En el caso de objetos metlicos, como el asa de
siembra, que se esterilizan en el momento de su utilizacin, se mantienen en la llama hasta
que se pongan al rojo, teniendo la precaucin de enfriarlos antes de su uso.
Para la utilizacin del agar se utiliz el PDA, Papa Dextrosa, es utilizado para el cultivo de
hongos Son aquellos que contienen un agente solidificante entre sus componentes,
normalmente agar. Se preparan en placas de Petri o en tubos en slant (tubos con la
superficie del medio inclinada).

2. IDENTIFICACION DE PLANTULAS, Y TALLOS EN CULTIVO DE

TEJIDOS.
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como
mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern
necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento.

Para la

preparacin del medio de cultivo se tiene en cuenta partiendo de un medio lquido,

podemos modificar su consistencia aadiendo productos como albmina, gelatina o agar,
con lo que obtendramos medios en estado semislido o slido.
El uso de las tcnicas de cultivo de tejidos puede extender y mejorar las posibilidades de la
propagacin vegetativa para algunas especies. Uno de los objetivos prioritarios del
mejoramiento de especies no industriales ser probablemente las actividades relacionadas
con la conservacin de la variabilidad gentica (Haines, 1994). El cultivo in vitro de tejidos
es un rea de la biotecnologa cuya importancia en la conservacin de los recursos
fitogenticos est aumentando, especialmente en las especies que se propagan

vegetativamente. La propagacin vegetativa representa un camino ms directo para retener

las caractersticas genticas deseables de un rbol o de una especie amenazada. Dentro de
este tipo de propagacin, el cultivo de tejidos ofrece un gran potencial de apoyo a los
mtodos tradicionales.
El nmero de plantas que se obtiene depender de la especie vegetal y de las condiciones
del medio de cultivo. El nmero de plantas que se obtiene por la va de la
micropropagacin permite alcanzar incrementos exponenciales, considerando que todos los
factores que afectan el crecimiento hayan sido optimizados.
Para las condiciones necesarias de humedad se tiene un nivel mnimo de esta, tanto en el
medio como en la atmsfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las clulas
vegetativas microbianas en los cultivos.
Condiciones necesarias de luz, la mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en
la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de
los microorganismos fotosintticos.