TÉCNICAS BÁSICA DE MICROBIOLOGÍA Y

BIOQUÍMICA

UT 1. El laboratorio de Microbiología
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TÉCNICAS BÁSICAS DE MICROBIOLOGÍA

UT 1. El laboratorio de Microbiología

1. Organización funcional de un laboratorio de

microbiología y bioquímica.
2. Normas de seguridad medioambientales.
3. Normas generales de trabajo.
4. Limpieza del material.
5. Condiciones de asepsia
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1. Organización funcional de un laboratorio de microbiología y bioquímica.

TOMA DE MEDIOS DE
VESTUARIO MUESTRAS CULTIVO

acceso directo aislado del resto y cerca del área de

desde el exterior y dispone del esterilización, con
dispone de todo lo material necesario: campana de flujo
necesario para que asas, hisopos, laminar y
el trabajador pase guantes, tubos, refrigerador.
directamente al medios de
laboratorio. transporte, etc
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1. Organización funcional de un laboratorio de microbiología y bioquímica.

ESTERILIZACIÓN: BACTERIOLOGÍA MICOLOGÍA

dotado de autoclave dispone de todo el estudio de
y situado en un lugar material necesario muestras
estratégico con fácil para la manipulación susceptibles de
acceso desde todos de muestras
contener mohos o
los puntos del levaduras.
laboratorio. bacteriológicas
(microscopio, VIROLOGÍA
centrífuga, agitadores,
equipo de tinción, dedicada a la
estufa de cultivo, etc). investigación de
virus
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1. Organización funcional de un laboratorio de microbiología y bioquímica.

RECOGIDA DE ALMACÉN
MICROSCOPÍA RESÍDUOS
se encuentran los Donde se
microscopios que deben estar conservan los
especiales aislados, medios de
(fluorescencia) protegidos y cultivo,
esterilizados reactivos y
material
fungible
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1. Organización funcional de un laboratorio de microbiología y bioquímica.

•Mesas de trabajo fácilmente limpiables y resistentes a

los desinfectantes
•Iluminación natural y artificial
EL LABORATORIO REUNIRÁ LAS
•Ventilación sin corrientes de aire para evitar la
SIGUIENTES CONDICIONES
diseminación de los productos infecciosos
•Lavabos y red de agua potable cerca de las mesas de
trabajo
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2. Normas de seguridad medioambientales.

•Utilizamos siempre guantes.

•Nos lavamos las manos después de trabajar y las desinfectamos,
aunque utilicemos guantes.
•No debemos dejar en la mesa de trabajo objetos personales.
•La mesa de trabajo debe ser desinfectada cada vez que termine una sesión de
prácticas.
•No tocaremos con los guantes objetos personales o a otros compañeros.
•No nos llevaremos a la boca lapiceros, rotuladores etc.
•Nunca pipetearemos con la boca.
•Utilizaremos siempre la bata y esta estará cerrada, incluso en verano.
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2. Normas de seguridad medioambientales.

•Siempre que haya peligro de salpicaduras, se utilizarán gafas de

seguridad.
• Utiliza la técnica correcta para quitarse los guantes sin que la piel
tome contacto con la parte exterior del guante
•Todos los desechos biológicos, sean líquidos o sólidos, tienen que ser
descontaminados antes de su eliminación. Después, el material que los
contiene puede ser lavado.
•Se evitarán manipulaciones tales como la inserción de asas calientes
en un cultivo y, la inyección violenta de fluidos a partir de pipetas o
jeringas, ya que todas estas técnicas pueden generar aerosoles
• Se seguirán las normas existentes sobre la gestión de residuos
contenidos en las reglamentaciones referentes a residuos sanitarios.
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3. Normas generales de trabajo. .

• Todo el material empleado en el manejo de

microorganismos debe estar estéril.
• Todas las manipulaciones deberán realizarse en un radio
de 10 a 15 centímetros del mechero Bunsen (zona
aséptica), alrededor de la llama del mechero, o
bien en una cámara de flujo laminar.
• Se procurará disponer de todo el material para el
procesamiento de la muestra al alcance de la mano,
para evitar desplazamientos innecesarios y el abandono
de la misma.
• Es necesario adquirir rapidez y automatismo,
indispensable para una buena ejecución de las técnicas.
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4. Limpieza del material.

Todo material que contacte con una fuente de microrganismos ha de limpiarse.

Se diferencian dos Material de escaso riesgo

tipos de limpieza Material a esterilizar
Material de elevado riesgo.
Material a desinfectar
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4. Limpieza del material.

1. Se lavará tras su utilización con agua y jabón, con la ayuda de

estropajos y escobillones.

2. También, se puede dejar sumergido en una disolución de detergente

en gran proporción durante algunas horas,

3. Posteriormente se enjuagan con agua corriente varias veces,

4. Finalmente, se pasa por agua destilada (para evitar depósitos de

sales residuales),

5. Dejándose secar en escurridores o se lleva a la estufa a 70 ºC.

6. Una vez seco, se guarda en las estanterías correspondientes.

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4. Limpieza del material.

El agar se licua introduciéndolo en baño maría a 60-70 ºC o en

microondas.

Limpieza de material con El agar licuado no debe verterse en las tuberías de la red de
restos de agar solidificado desagüe, ya que al solidificarse la obturaría. Antes de que solidifique
(Medios de cultivo sólidos): se trasvasa a una bolsa para residuos.

La bolsa que contiene el agar se deja solidificar y se elimina con el

resto de material sólido desechable.
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Se considera material de escaso riesgo:

▪ Materiales que NO contactan con ninguna fuente de microorganismos, como ocurre con
el utilizado en la preparación de reactivos, disoluciones etc.

▪ Materiales que contactan con microorganismos demostradamente inocuos.

▪ Material metálico fácilmente esterilizable a la llama (inmediatamente después de su uso

se flamea), como asas de siembra, tijeras, pinzas, etc.
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4. Limpieza del material.

Limpieza del material de elevado riesgo

a) Material a esterilizar.

En este grupo se encuentra el material contaminado con microorganismos

potencialmente patógenos, como:

- medios de cultivo incubados,

- los recipientes que lo contienen,
- material utilizado en la preparación de inóculos (muestras que
introduciremos en los medios de cultivo).

La esterilización garantiza la eliminación de todas las formas de vida

microbiana incluidas esporas, se consigue con calor húmedo a presión
(autoclave) o calor seco (horno Pasteur)
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4. Limpieza del material.

Limpieza del material de elevado riesgo

b) Material a desinfectar.

A pesar de estar contaminado con microorganismos patógenos, no es

posible esterilizarlos debido al gran tamaño en general de este material:
• material eléctrico,
• mesas de trabajo etc.

La desinfección consiste en destruir los microorganismos patógenos,

pero no necesariamente sus esporas.

Se consigue con agentes químicos como el fenol o la lejía o con

agua a temperaturas superiores a 75ºC.
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5. Condiciones de asepsia

Llamamos condiciones de asepsia a aquellas en las que se impide el desarrollo

y la contaminación por microorganismos.

En un laboratorio de microbiología todo el trabajo con

microorganismos se debe realizar en condiciones de
asepsia.

Esas condiciones de asepsia se consiguen utilizando de

manera sistemática las técnicas de asepsia.
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5. Condiciones de asepsia

Técnica de asepsia
NUNCA

• Introducir en un cultivo un asa de siembra no esterilizada.

• Mantener el tubo o la placa de Petri abiertos más del tiempo

necesario para transferir el cultivo.

• Coloca la tapa del tubo o de la placa de Petri en la superficie de la

mesa de trabajo.

• Tocas la tapa del tubo con otra cosa que no sea la boca del tubo
flameada.
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5. Condiciones de asepsia
Técnica de asepsia
SIEMPRE

• Flamear el borde del tubo antes y después de introducir el asa o la pipeta para sembrar.

• Esterilizar el asa de siembra después de completar la siembra.

• Trabajar con un mechero encendido situado entre el operador y los materiales que se
manipulan.

• Mantener la placa de Petri en posición invertida, salvo que el medio esté fundido o no se
haya absorbido todo el inóculo.

• Eliminar el material contaminado (puntas de pipeta, pipetas de vidrio, portas, etc.) en

un recipiente con desinfectante como agua con lejía o en los contenedores amarillos para
residuos biológicos.