EP Nutrición - Microbiología y Parasitología I Semestre - 2023

Bacteriología

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE MICROBIOLOGÍA MÉDICA –FACULTAD DE MEDICINA-UNMSM

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Estimados Profesores y alumnos

Debido a la normalización de las condiciones sanitarias del

momento actual, las clases prácticas serán presenciales y las
actividades programadas se colocarán en la plataforma del aula Virtual
Moodle, de la Facultad de Medicina.
En lo referente al desarrollo de las clases prácticas de la
Asignatura (NO1803) de “Microbiología y Parasitología” para la EP de
Nutrición, de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional Mayor
de San Marcos, Semestre 2022-I, se desarrollarán en los laboratorios de
Prácticas del Departamento Académico de Microbiología Médica .

Por lo tanto, para tener un conocimiento previo al tema a tratar,

vamos a tener que recurrir a videos. Se revisarán videos seleccionados
referentes a los temas de las clases prácticas y en el Manual de
prácticas, la parte teórica. Se invita a los docentes y estudiantes, a
proporcionar algunos videos o imágenes que sean útiles en el proceso
enseñanza-aprendizaje, bienvenido sea, todo en aras de un mejor
aprendizaje y comprensión para los estudiantes de los temas a tratar.

En las actividades presenciales, se debe acudir con el kit de

protección personal, mantener el distanciamiento adecuado y estar
atentos a las indicaciones.

Es necesaria la participación activa de todos, para llevar adelante

estas actividades.

Se agradece a los profesores que han participado en la

elaboración del presente Manual de Prácticas y el Atlas de Prácticas.

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Práctica Nº 1. Bioseguridad en microbiología: Conocimiento de los equipos

empleados en los procesos de Esterilización y descontaminación
Elizabeth Pareja Cuadros
Miguel Condezo Rojas

CARACTERÍSTICAS GENERALES
La bioseguridad son un conjunto de medidas preventivas, que nos protegen frente a los agentes de
riesgos biológicos, químicos y físicos.
La implementación de los programas de bioseguridad es fundamentalmente importante sobre todo en los
laboratorios de Microbiología Clínica.
Agentes biológicos: Ingestión (pipeteo de cultivos, suspensiones bacterianas, sangre), Inhalación de
aerosoles, inoculación (con agujas), por contacto directo a través de piel y mucosas (sin guantes, sin
cubículo y lentes, para proteger los ojos).
Agentes físicos: Temperaturas extremas, Radiaciones ionizantes, Contactos eléctricos, Vidrios
resquebrajados.
Agentes químicos: Corrosivos o tóxicos, carcinogénicos, inflamables.
Existen en los laboratorios, dos fuentes de riesgos biológicos:
a) El cultivo de microorganismos.
b) Manipulación de muestras como: sangre, líquidos corporales etc.
Por lo que, debemos de cumplir con las siguientes medidas de bioseguridad: relacionada al ambiente
de trabajo (equipamiento de los laboratorios con equipos e instrumentos adecuados), al personal
(capacitación y normas a cumplir), del vestido (indumentaria adecuada de protección), de las
muestras clínicas o biológicas y de su procesamiento.
Contar con bioseguridad que involucra hablar de esterilización y desinfección.
Esterilización: Es el proceso mediante el cual se destruye a todo microorganismo patógeno o saprofitos
presentes utilizando equipos y técnicas establecidas.
Desinfección: Es el mecanismo por el cual, utilizando una sustancia química, se mata los microorganismos
presentes en las superficies de mesas, cubículos, objetos, material de vidrio, metal, etc.
La esterilización y desinfección se logra utilizando agentes físicos y químicos.

AGENTES BIOLÓGICOS

Son microorganismos que se encuentran formando parte de la flora microbiana, en el agua, alimentos
contaminados, en muestras de personas y animales infectados, aislados en medios de cultivo, así como,
las toxinas microbianas presentes en los alimentos.
Los agentes biológicos pueden ser: bacterias, hongos, virus y parásitos, los que se agrupan en grupos
de riesgo (Riesgo: I, II, III y IV) según su patogenicidad y la posibilidad de tratamiento.

AGENTES FÍSICOS

CALOR

El calor, como forma de transferir energía, puede ser el calor seco y el calor húmedo.
 Calor Seco: se destruye a la bacteria por deshidratación, alterando la permeabilidad de la membrana
celular, Ejemplo: flameado con el mechero de Bunsen y esterilización con el horno a 180°C por 1
hora. El horno permite esterilizar material quirúrgico (pinzas, tijeras, bisturís), placas Petri, tubos de
prueba, baja lengua, gasa, algodón, etc. (Su uso es restringido para material limpio, seco y
debidamente preparado).

 Calor Húmedo: Utiliza el vapor de agua saturado a presión, por ejemplo, el autoclave. Se utiliza a
121°C por 15 libras de presión por 15 minutos. Se utiliza para material contaminado
(descontaminación) o para material limpio.

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 Pasteurización: Esta técnica se utiliza en la leche. Se usa calentando a 62,8-65,6 °C durante 30

minutos, o 71,7 °C durante 15 segundos.

FILTRACIÓN

Este método se usa para esterilizar algunas sustancias que por el calor se desnaturalizan. Se usan
filtros (Millipore etc.), en los cuales quedan adheridos los microorganismos dejando pasar las
sustancias estériles. Ejemplo de uso, para filtrar carbohidratos, proteínas, suero de conejo, gelatina, etc.

RADIACIÓN

Se utiliza la luz ultravioleta (UV), este método de esterilización se usa para eliminar
microorganismos de superficie, su acción es a nivel del DNA bacteriano la acción es directamente
proporcional a la distancia, al tiempo y a su superficie de exposición. Ejemplo: cubículos, salas de
quirófano, etc.

AGENTES QUÍMICOS

Son sustancias químicas que tienen efecto destructivo sobre los microorganismos y los más usados en la
práctica son:

 Alcoholes, sustancias, cuya estructura R-CHOH, tienen acción tóxica para los microorganismos.
Su acción es a nivel de las proteínas desnaturalizándolas; la combinación del yodo con el alcohol es
un buen compuesto antibacteriano (antiséptico).
 Fenol, y sus demás derivados fenólicos a concentraciones de 5 % en soluciones acuosas,
desnaturalizan las proteínas (desinfectante).
 Sustancias oxidantes, como el agua oxigenada, el yodo, el cloro y sus compuestos, inactivan a las
células microbianas, mediante el fenómeno de oxidación de los grupos sulfhidrilos libres. El agua
oxigenada es un buen antiséptico, mientras que el hipoclorito de sodio al 5% es un buen
desinfectante.
 Detergentes, son sustancias tensioactivas, que actúan a nivel de la membrana bacteriana,
disolviendo a los lipopolisacáridos.
 Gases, se utiliza el óxido de etileno y el formaldehido.

I. OBJETIVO

 Describir y aplicar las medidas de bioseguridad en el laboratorio de microbiología frente a

los agentes de riesgo.
 Discutir la importancia del correcto lavado de manos.
 Conocer los principales métodos de esterilización en microbiología, su aplicación en la
prevención de enfermedades infectocontagiosas.

II. MATERIALES

- Mechero bunsen - Horno

- Asas de siembra - Cubículo con rayos U.V.
- Soluciones desinfectantes - Filtro
- Jabón y papel toalla - Materiales de laboratorio (tubos,
- Mascarilla, guantes, gorro placas, pipetas)
- Autoclave - Otros: Papel kraft, algodón

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III. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

Para Evaluar las Medidas de Bioseguridad se debe seguir las siguientes recomendaciones:

 Identificar y adoptar las medidas de bioseguridad del personal, la vestimenta y el ambiente del
laboratorio de microbiología para disminuir los riesgos.

HOJA DE EVALUACIÓN DE LAS MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD

a) Del ambiente
1) Todo laboratorio debe estar adecuadamente ventilado e iluminado.
2) Los servicios de agua luz y gas deben funcionar correctamente.
3) El área de trabajo (área contaminada) debe estar ubicada lejos de la puerta y de zonas con
corriente de aire.
4) Las mesas de trabajo deben ser de material liso, impermeable y resistente a sustancias
corrosivas.
5) Se deben limpiar mesas, pisos y paredes. No se debe levantar polvo.
6) Al sistema de desagüe solo se eliminará material descontaminado o neutralizado.
7) Se debe realizar fumigación periódica.
8) Se debe contar con extinguidores.
9) En las puertas de todo laboratorio debe estar la señal de alto riesgo.

b) Del personal
1) Deben estar entrenados en los procedimientos.
2) Deben someterse a un examen médico completo.
3) Todo personal deberá recibir inmunizaciones contra (Covid-19, Tétano, Difteria, Hepatitis B)
otras (Antirrábica, Fiebre amarilla, BCG).
4) Evitar el ingreso de personal no autorizado.
5) Evitar el movimiento de personas durante el procesamiento.
6) Evitar el uso del mandil fuera del ambiente del laboratorio.
7) Evitar tocarse con las manos enguantadas los ojos, nariz, piel, etc.
8) No se debe permitir comer, ni fumar en los laboratorios etc.
9) Lavarse las manos con abundante agua y jabón y secarse con papel toalla antes y después de
los procedimientos.
10) Nunca pipetear fluidos. Usar propipetas o pipetas automáticas.

c) Del vestido
1) Mandil de manga larga limpio e íntegro. Cerrado hasta el cuello
2) Gorro que cubra todo el cabello.
3) No usar collares o brazaletes, anillos o relojes.
4) Usar zapatos bajos y que cubran de exposición a ácidos.
5) Uso de anteojos de material neutro.
6) Las mascarillas deben adaptarse a la comodidad de la cara, no filtrar aire por los lados, si se
humedece cambiar de mascarilla.

d) De las muestras y su procesamiento

1) Todas las muestras deben ser tratadas como altamente infecciosas.
2) Verificar la desinfección del área de trabajo antes y después de trabajar.
3) El material de desecho debe eliminarse al tacho (rojo) o al recipiente correspondiente, nunca dejarlo
en la mesa.
4) Descartar láminas y laminillas en soluciones desinfectantes.
5) NO CRUZAR LOS MECHEROS BUNSEN.

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e) Del mechero de Bunsen

1) Instalar el mechero. Reconocer las llaves de salida de gas.
2) Verificar que no exista corriente de aire.
3) Encender el fuego y abrir la llave de gas lentamente en presencia del docente.
4) Regular la llama (azul).
5) Luego de su uso avisar y cerrar el gas. “NUNCA CRUZAR LOS MECHEROS. AVISAR A SUS COMPAÑEROS
ANTES Y DESPUES DE ABRIR LA LLAVE DEL GAS. NO MOVILIZARSE CON PAPEL ENCENDIDO A OTRAS
MESAS”.

b) Del material químico

1) Debe preparase dentro de un lavadero y en presencia del docente.
2) Se debe utilizar guantes y mascarillas especiales.

c) Del material biológico

1) Se debe usar guantes para su manipulación.
2) Se debe trabajar cerca del mechero.
3) Tener cuidado si el recipiente está roto, informar al docente y no manipularlo.
4) Nunca eliminar el material al caño.
5) Dejar los tubos en las gradillas.
6) Dejar las placas Petri cerradas.

a) Lavado de manos
1) Subirse las mangas hasta el codo.
2) Retirar alhajas y relojes.
3) Abrir el caño y mojarse las manos.
4) Utilizar jabón líquido 3 a 5 mL.
5) Friccionar la superficie de la palma de la mano; tener especial atención en la parte interna de los
dedos, parte del dorso de las manos y bajo las uñas.
6) Dejar actuar por 20 segundos.
7) Lavarse hasta cerca del codo.
8) Enjuagar con abundante agua.
9) Secarse con papel toalla.
10) Cerrar la llave del caño con ayuda de un papel toalla “EL USO DE GUANTES NO SUSTITUYE EL
LAVADO DE MANOS”

 Observar en los videos de visitas de los ambientes de esterilizado y descontaminación.

 Observar en los videos los procesos en la eliminación de material contaminado: placas y tubos
con medio de cultivo, pipetas, guantes y papeles.

a) Eliminación de placas y tubos con cultivo

1) Será retirado por personal calificado en baldes de metal.
2) Deben ser esterilizados en el autoclave.
3) Se procederá a su lavado y secado.

b) Eliminación de pipetas
1) Se dejarán en los recipientes con desinfectantes (lejía al 5%, mezcla sulfocrómica).
2) Serán llevados a autoclavar, si fuese necesario por personal calificado.
3) Se lavarán y secarán.

c) Eliminación de guantes
1) Serán descartados en bolsas rojas.
2) Luego serán autoclavados e incinerados.

d) Eliminación de papel
1) Se descartarán en bolsas negras.
2) Serán eliminados a contenedores y luego al camión municipal.

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IV. RESULTADO

1. En los videos se observará los equipos utilizados en los métodos de esterilización: Horno,
Autoclave, rayos Ultravioleta, filtración.
2. Se observarán los pasos recomendados para el correcto lavado de manos.
3. Se demostrarán en los videos los pasos seguidos en la descontaminación de material por la
autoclave y las sustancias químicas.

V. PREVENCION Y CONTROL
Conocer las medidas de bioseguridad para evitar accidentes y proteger la vida de todos y del
ambiente.

VI. PREGUNTAS DE AUTOEVALUACION

1.- Defina Bioseguridad

…………………………………………………………………………..………………………………………………………………………………

2.- Mencione dos medidas de bioseguridad a utilizarse en los laboratorios de microbiología.

a)…………………….……………………………….. b)…………………….…………………………………………..

3.- Cite dos agentes de riesgo en los laboratorios de microbiología.

a)…………………….…………………..…………… b)……………………………………………….………………

4.- Realizar un mapa conceptual de la clasificación de los agentes esterilizantes

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EQUIPOS DE LABORATORIO

AUTOCLAVE HORNO MECHERO BUNSEN

MATERIAL DE LABORATORIO

Vaso de precipitado Hisopo Matraz de fondo redondo Pinza

Embudo Tubo de ensayo Pipeta Placa Petri

MATERIALES EMPLEADOS EN BIOSEGURIDAD

Mascarilla Respirador N95 Gorro Mandil de manga larga

Guantes Descartador de material Descartador de papel Propipeta

contaminado

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VII. REALICE ESQUEMAS DEL MATERIAL OBSERVADO

AUTOCLAVE HORNO MECHERO BUNSEN

MATERIAL DE LABORATORIO

Vaso de precipitado Hisopo Matraz de fondo redondo Pinza

(Beaker)

Embudo Tubo de ensayo Pipeta Placa Petri

MATERIALES EMPLEADOS EN BIOSEGURIDAD

Mascarilla Respirador Nº95 Gorro Mandil de manga larga

Guantes Descartador de material Descartador de papel Propipeta

Contaminado

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X. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Instituto Nacional de Salud. Manual Bioseguridad en Laboratorios de ensayo, biomédicos y

clínicos. 3a edición. Lima, Perú: Centro de Producción Editorial E Imprenta de la Universidad
Nacional Mayor de San Marcos. 2005: págs 7,18,42.
2. Soto V, Olano E. Conocimientos y cumplimientos de medidas de bioseguridad en personal de
enfermería. Hospital Nacional Almanzor Aguinaga. Chiclayo 2002. AnFacMed .2004;65(2).
3. Lara H, Ayala V, Rodríguez C. Bioseguridad en el laboratorio: medidas importantes para el
trabajo seguro. Bioquímica .2008;33(2):59-70.

EL MANDIL COMO VEHÍCULO DE BACTERIAS PATÓGENAS DE IMPORTANCIA MÉDICA EN INTERNOS

DE MEDICINA. HOSPITAL DANIEL A. CARRIÓN. 2006

ELIZABETH PAREJA, VILMA BÉJAR, JOSÉ MARÍA GUEVARA, ESTHER VALENCIA, JORGE CHUMPITAZ, LUIS SOLANO, ANA
HUAMÁN, CARLOS SEVILLA, GLORIA SÁEZ, SARA VALER, EDITH CASTILLO, DANIEL MEJÍA
1 2 3
Departamento Académico de Microbiología Médica, UNMSM. Instituto de Medicina Tropical Daniel A. Carrión, UNMSM. E.A.P.
Tecnología Médica, Facultad de Medicina, UNMSM.

Objetivos: Identificar bacterias patógenas de importancia médica en mandiles de internos de medicina, del Hospital Daniel
A. Carrión.

Materiales y Métodos: En junio de 2006, se realizó la toma de muestra de mandiles y chaquetas de 46 internos de
medicina del Hospital Daniel A. Carrión, Callao, que se encontraban realizando rotación de internado. La toma de muestra
se hizo mediante hisopado de la zona de las mangas y el delantal. Las muestras fueron transportadas en medio Stuart, hacia
los laboratorios de IMT Daniel A. Carrión de la UNMSM, las que fueron sembradas en agar sangre, agar hipertónico de
Chapman, Agar Mac Conkey y medios de diferenciación bioquímica convencionales.

Resultados: El número de internos evaluados, según servicio, fue: Pediatría (11), Ginecología (6), Neonatología (5),
Medicina (10), Cirugía (8), Emergencia (6). Se halló 41 internos con mandil y 5 con chaquetas. De los 46 internos evaluados,
se aisló: a) 65,2% Staphylococcus aureus(30/46); b) 50% Staphylococcus manitol negativo (23/46); c) 41,3%
enterobacterias (19/46); d) 32,6% bacilos Gram negativos no fermentadores (15/46); y, e) 10,9% Staphylococcus manitol
positivos coagulasa negativos (5/46).

Conclusiones: Se ha aislado bacterias de importancia médica sobre mandiles y chaquetas de internos de medicina; se debe
evaluar el rol de las barreras de contención primaria y la epidemiología de las infecciones intrahospitalarias, así como las
medidas de bioseguridad.

Palabras clave: Mandil, Staphylococcus aureus, Staphylococcus coagulasa negativo, enterobacterias, bacilos gram
negativos no fermentadores, infecciones intrahospitalarias.

V Jornadas Científicas Sanfernandinas y VIII Jornadas de Investigación en Salud

72 An Fac Med Lima. 2006; 67 Suppl 1

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Práctica Nº 2: Acción de los Métodos Físicos y Químicos sobre Bacterias

Ana Huamán Reyes

CARACTERÍSTICAS GENERALES

Los Agentes Antimicrobianos son aquellos utilizados para destruir o impedir el crecimiento de los
microorganismos. Por su naturaleza, pueden ser físicos y químicos. La eficacia de estos agentes está
condicionada por varios factores como son: la naturaleza y concentración del mismo, así como la
concentración y características de la población microbiana presente, la temperatura, la duración del
contacto entre el agente y los microorganismos, la naturaleza del material a descontaminar,
particularmente la presencia de material orgánico y el pH.

MÉTODOS FÍSICOS
Son métodos esenciales, utilizados de manera sistemática en los hospitales, en el tratamiento y en la
prevención de infecciones y también para prevenir la contaminación de cultivos microbianos de los
laboratorios y de la industria alimenticia.

Acción del Calor

1. Calor Húmedo

Modo de Acción: Coagulación de proteínas del protoplasma bacteriano.

Usos: Productos líquidos, materiales de vidrio, metal y plásticos resistentes, materias primas,
reactivos de microbiología. Puede usarse:
A. Ebullición: Cuando el material es sometido a la acción directa del agua hirviente a 100°C.
Útil para esterilizar jeringas, ropa en un tiempo no menor de 30 minutos.

B. Autoclavado: Para esterilizar medios de cultivo y soluciones no desnaturalizables a 15 libras

de presión, 121°C por 15 minutos.

2. Calor Seco

Modo de Acción: desnaturalización de material orgánico.

Usos: Se puede usar.
A. Llama directa: para esterilizar instrumentos metálicos de uso inmediato, como el asa de
platino.

B. Hornos: Proporcionan temperaturas adecuadas de 160 a 180°C por 60 minutos, para la

esterilización de material de vidrio e instrumentos metálicos.

Otros métodos físicos

3. Filtración

Modo de Acción: Retención de gérmenes por medio de una barrera física con poros de acuerdo
al tamaño de células que se quiere separar.
Usos: Líquidos no autoclavables, agua.

4. Radiación

Modo de Acción: Alteración de bases nitrogenadas a nivel de ácido nucleico que desestabiliza la
división celular.
Usos: materia prima, material de plástico, vidrio, metal, kits de microbiología, semillas, granos.
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Radiación ultravioleta
Usos: Sobre superficies en aplicaciones industriales. Actúa mejor a longitudes de onda de 2560 y
2700 A.

MÉTODOS QUÍMICOS
Son útiles aquellos que desinfectan, es decir que reducen el número de microorganismos
contaminantes, principalmente aquellos que causan infección, a un número menor que no ocasione
daño para la salud. Los agentes químicos pueden ser muy tóxicos para el organismo humano. Entre
estos tenemos: detergentes, alcoholes, ácidos, álcalis, halógenos y colorantes .

APLICACIÓN DE LOS MÉTODOS FÍSICOS Y QUÍMICOS EN LA CONSERVACIÓN DE LOS

ALIMENTOS
Métodos Físicos

Refrigeración: Es la conservación de alimentos a temperaturas inferiores a 10°C y superiores al punto de

congelación del agua. La baja temperatura es un factor limitante del crecimiento microbiano. Según su
comportamiento frente a la temperatura, los organismos, pueden ser termófilos, mesófilos o
psicrótrofos. A temperatura de refrigeración (0-5°C) los organismos psicrófilos crecen más rápidamente
que los mesófilas y por tanto, supone un factor de selección de la flora del alimento, de gran
importancia.

Congelación: Método para la conservación de alimentos a temperaturas inferiores al punto de

congelación del agua. Estas temperaturas pueden variar desde la que se obtiene en un congelador
casero (-2 a -10°C) y las conseguidas en los sistemas de congelación más potentes que puedan llegar a
-30°C a -80°C, la congelación detiene el crecimiento de todos los microorganismos. Los organismos
superiores (hongos, levaduras y helmintos) son más sensibles que las bacterias y mueren. Durante la
congelación la carga microbiana continúa disminuyendo. Sin embargo, las actividades enzimáticas de las
bacterias pueden continuar dando lugar a más deterioro.

Radiación ultravioleta: produce una disminución exponencial en el número de células vegetativas o de

esporas vivas con el tiempo de irradiación. El mayor valor del tratamiento con radiaciones U.V. se
encuentra en el saneamiento del aire, aunque también puede aplicarse para esterilizar superficies de
alimentos o para el equipo de manipuladores de alimentos.

Métodos Químicos

Ácidos orgánicos: La actividad antimicrobiana de un ácido orgánico o de su éster se debe a las moléculas
no disociadas de este compuesto, porque esta forma molecular es la más soluble en las membranas
celulares, por esto sólo los ácidos orgánicos lipofílicos tienen actividad antimicrobiana. La mayoría de los
ácidos orgánicos resultan poco eficaces como inhibidores del crecimiento bacteriano a los pH de 5.5 a
5.8 y son más eficaces a altas concentraciones y pH más bajos. Su empleo más frecuente es como
micostático. De todos los ácidos, el más usado, es el ácido acético.

I. OBJETIVOS
 Reconocer la acción de los agentes físicos y químicos usados en microbiología.

 Identificar a los agentes químicos más eficaces.

 Valorar la aplicación de los agentes físicos y químicos en los alimentos.

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II. MATERIAL
- Placas con agar nutritivo con cultivo
bacteriano para evaluar agentes físicos:
llama directa y radiación UV.
- Placas con agar nutritivo con cultivo
bacteriano para evaluar acción de los
agentes químicos: fenol, cristal violeta,
lejía,etc.

III. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

Explicar los resultados esperados, luego de comprender los procedimientos a) b) y c).

Procedimiento:

a) Acción de los agentes físicos: Rayos ultravioleta (U.V.)

1. Sembrar con el asa de siembra el cultivo bacteriano en toda la placa.

2. Dentro del cubículo con luz UV, cubrir la mitad de la placa con una cartulina y dejar actuar por 10 minutos
3. Incubar a 37°C por 24 horas.

PLACA EXPUESTA A U.V. PLACA NO EXPUESTA A U.V.

(Ausencia de colonias) (Desarrollo de colonias)

b) Acción de los agentes físicos: Llama directa

1. Con el asa de siembra tomar un inóculo bacteriano y sembrarlo en la mitad de la placa de agar. Incubar a
37°C por 24 horas.

2. Con el asa de siembra tomar un inóculo bacteriano esterilizarlo a la llama directa y sembrarlo en la otra mitad
de la placa de agar. Incubar a 37°C por 24 horas.

CON ASA SIN ESTERILIZAR CON ASA ESTERILIZADA

(Desarrollo de colonias) (Ausencia de colonias)

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c) Acción de los agentes químicos: Método de Difusión con Filtros embebidos

1. Sembrar en tapete un cultivo bacteriano en una placa de agar nutritivo. Con una pinza estéril colocar sobre el
agar discos de papel embebidos en alcohol yodado, fenol, hipoclorito de sodio, alcohol de 70º en forma
equidistante. Incubar a 37°C por 24 horas.

MÉTODO DE DIFUSIÓN DE DISCOS DIÁMETROS DE HALOS DE INHIBICIÓN (mm)

EMBEBIDOS
1. Observar los halos de inhibición alrededor de
los discos. Agente químicos:
2. Medir los halos de inhibición (mm): a)Alcohol yodado :…………………….mm
3. Agente químicos: b)Fenol :………………….…mm
a)Alcohol yodado c) Hipoclorito de sodio :…………………….mm
b) Fenol d) Alcohol de 70 :…………….………mm
c) Hipoclorito de sodio
d) Alcohol de 70º

4. Ordenar de mayor a menor los agentes

químicos según diámetro de los halos de
inhibición.

IV. RESULTADO

1. La exposición a la luz UV de las bacterias, inhibe el desarrollo bacteriano por daño del ADN bacteriano.
2. La llama directa mata al inóculo bacteriano sobre el asa de siembra.
3. El halo de inhibición (en mm) se evidencia por ausencia del desarrollo bacteriano alrededor de cada
disco embebido con cada agente químico.

V. PREVENCIÓN Y CONTROL

 El uso de agentes químicos y físicos en los procedimientos microbiológicos y en el procesamiento de

los alimentos, previene y controla la presencia de bacterias .

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VI. PREGUNTAS DE AUTOEVALUACIÓN

1.- ¿Cuál es el mejor método de esterilización en el laboratorio y por qué?

………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

………………………………………………………….…………………………………………………………………………………………
2.- ¿Qué agentes químicos se usan en un laboratorio de microbiología?

………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

……………………………………………………………………………………………………………………………………………………
3.- Indique los métodos de desinfección que se utilizan en frutas

………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

……………………………………………………………………………………………………………………………………………………
4.- ¿Qué es la pasteurización y para qué es útil?

………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

……………………………………………………………………………………………………………………………………………………

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