STAPHYLOCOCCUS AUREUS

1.CATALASA

Objetivo: separar Staphylococcus y Micrococcus (catalasa positiva) de los genes

Streptococcus y Enterococcus (catalasa negativa).

Fundamento:
El peróxido de hidrógeno es el producto final del metabolismo oxidativo de
carbohidratos, a esta vía metabólica recibe el nombre de metabolismo aerobio-
oxidativo.
La acumulación del peróxido es muy toxico por lo que la mayoría de las bacterias
aerobias y anaerobias facultativas exceptuando a Streptococcus producen una
enzima llamada catalasa que degrada el peróxido de hidrógeno obteniendo agua y
oxigeno gas.
Técnica e interpretación:
El reactivo utilizado en la prueba es el peróxido de hidrogeno al 30%, Hay diferentes
técnicas para realizar la prueba la mas común es poner una gota de peróxido en el
portaobjetos y posteriormente con un palillo plano tomar un poco de bacteria a
partir de una colonia aislada, si se observa el burbujeo generalmente intenso
significa que hay producción de oxígeno por lo tanto se entiende que hay presencia
de la enzima catalasa., hay bacterias que dan una reacción positiva debil aunque son
las menos.
 Control positivo: Stahylococcus aureus
Control negativo: Streptococcus pyogenes
Burbujeo catalasa positivo, carencia de burbujeo catalasa negativo.

2. PRUEBA DE LA COAGULASA
Objetivo: permite separar S. aureus, que posee coagulasa, de las otras especies de
estafilococos que genericamente se las denomina estafilococos coagulasa
negartiva (ScoN).

Tubo:
Interpretación :
prueba positiva :
• coagulo completo
• coagulo parcial
• el coagulo no abarca completamente
la columna del fluido.
prueba negativa:
• no hay formación de coagulo
• la suspensión permanece homogénea
3.Prueba de oxidación y fermentación
Las bacterias ocupan diferentes vías metabólicas para obtener sus nutrientes y la
energía, casi todas las bacterias consumen algún tipo de carbohidrato
generalmente el mas utilizado por las bacterias es la glucosa, usan la vía oxídativa,
fermentativa o ambas.
La vía oxidativa utiliza oxígeno, un sinónimo es vía aerobia. El metabolismo
fermentativo no utiliza oxigeno, sinónimo metabolismo anaerobio.
PEPTONA. 2G
NACL. 5g
D-GLUCOSA. 10g
AZUL DE BROMOTIMOL. 0.03g
AGAR. 3g
FOSFATO DIPOTASICO. 0.3g
AGUA. 1000m
INGREDIENTES DEL MEDIO OF.
Ph debe ser 7.1, que dara un color verde en la preparación

Fundamento :
El metabolismo oxídativo de la glucosa produce ácidos débiles, por lo tanto en la
prueba bioquímica se utiliza de indicador el azul de bromotimol que tiene un vire de
ph menor respecto al rojo de fenol, ya que son ácidos débiles se agrega una mayor
cantidad de glucosa hasta el 1%, para que se produzca una mayor cantidad de
ácidos y se alcance mas fácilmente el vire del indicador.
El metabolismo de las peptonas produce sustancias alcalinas que podrían disminuir
el Ph del medio evitando así evidenciar la presencia de los ácidos débiles producidos
por la via oxidativa, para solucionar esto el medio tiene poca cantidad de peptonas
hasta el 2% respecto a la D-glucosa.
Ph de vire del azul de bromotimol: 6-7
Ácido: Amarillo Alcálino: Verde.

En el tubo sin aceite: La producción de ácidos débiles reduciría el ph del medio esto
será evidenciado gracias al indicador produciéndose una coloración amarilla en todo
el tubo, aunque puede variar su intensidad.
En el tubo con aceite: La fermentación de la glucosa produce ácidos fuertes
respecto a los que produce la vía oxidativa, ejemplo de estos ácidos son el ácido
láctico, ácido fórmico, ácido acético, entre otros. El medio se acidifica y el vire del
indicador da como resultado una coloración amarilla intensa en la totalidad del
tubo.

TÉCNICA DE LA PRUEBA.
Se van a usar dos tubos, utilizando un asa recta la cual se flamea en el mechero, se
puede enfriar en agar estéril, después se toma un poco de bacteria a partir de una
colonia aislada posteriormente se inoculan ambos tubos por el método de picadura
y finalmente se preparan las condiciones de los tubos;
Un tubo se cerrara su tapa de tal forma que quede floja con la intención de que
entre algo de oxigeno, al segundo tubo se le agregara 1.5-2ml de aceite mineral
estéril y la tapa se cerrara completamente, se incubarán durante 24h
Interpreatción de tubos amarillo, amarillo: Fermentador facultativo y se
reporta como: F

Interpreatción de tubos amarillo, amarillo: Fermentador facultativo y

se reporta como: F
 Cuando el tubo abierto es amarillo y el tubo con aceite es verde se
interpreta como reacción oxidativa y se reporta como: O

ESCHERICHIA COLI

PRUEBA DE LA CITRATO:
La prueba de citrato se utiliza para evaluar si la bacteria puede utilizar el citrato como única fuente de carbono. E. coli es
negativa en esta prueba y no puede usar el citrato como fuente de carbono. Un resultado positivo se evidencia por un
cambio de color del medio de cultivo de verde a azul, indicando un aumento del pH debido a la utilización del citrato.

Se cultiva el microorganismo en agar citrato de Simmons. Este medio contiene citrato de sodio y fosfato de amonio como
fuentes de carbono y de nitrógeno respectivamente, y azul de bromotimol, como indicador de pH. Sólo las bacterias
capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este medio y liberarán iones amonio lo que, junto con la
eliminación del citrato (ácido), generará una fuerte alcalinización del medio que será aparente por un cambio de color del
indicador de pH, de verde a azul.
Prueba de Indol:

La prueba de indol se realiza para verificar la capacidad de una bacteria para producir indol a partir del triptófano. E. coli
es indol-positiva, lo que significa que puede descomponer el triptófano en el medio de cultivo y producir indol. Se utiliza
el reactivo de Kovac para detectar la presencia de indol, que forma un anillo rojo cuando reacciona con el indol.

El indol es uno de los productos de degradación del aminoácido triptófano. La presencia de la enzima triptofanasa en la
bacteria provoca la hidrólisis del aminoácido y su desaminación, produciendo indol, ácido pirúvico y amoníaco.

Si la bacteria posee la enzima triptofanasa, al añadir al medio las gotas del reactivo de Kovacs, se producirá un anillo de
color rojo cereza en la superficie del caldo y la prueba será considerada positiva. Si esto ocurre después de 24 horas, la
prueba se considera completa, pero si es negativo deberá incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba. Por ello es
conveniente hacer siempre la prueba no en el tubo incubado sino en una porción de unos 2 ml que se retira de él
asépticamente.
Prueba de la ureasa (opcional):
Esta prueba verifica la capacidad de la bacteria para producir ureasa y descomponer la urea en el medio de cultivo. E. coli
es generalmente negativa en esta prueba, lo que significa que no produce ureasa. El medio de cultivo se vuelve amarillo
si no hay producción de ureasa.

Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando una molécula de dióxido de carbono y dos
moléculas de amoniaco por acción de la enzima ureasa. Esta actividad enzimática es característica de todas las especies
de Proteus y se usa sobre todo para diferenciar este género de otras enterobacterias que dan negativo o positivo
retardado. Se cultiva el microorganismo en slant en agar urea de Christensen. Este medio se complementa después del
autoclavado con 50 ml/l de urea. Ésta será degradada por aquellos microorganismos capaces de producir la enzima ureasa.
Esta degradación produce amoniaco que hará variar el color del indicador de amarillo a rojo, poniéndose así de manifiesto
la actividad ureasa.
HONGOS Y LEVADURAS
TUBO GERMINAL

UREASA
FENOL OXIDASA